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Anticuerpos Marcados

Técnicas de inmunofluorescencia
• La fluorescencia es una propiedad de ciertas
moléculas que, al ser irradiadas con energía
electromagnética de longitud de onda
adecuada, emiten radiación de longitud de
onda característica permitiendo su
cuantificación.
• Las moléculas de un colorante fluorescente
absorben luz en una longitud de onda y
convierten la luz absorbida de alta energía
(longitud de onda más corta) en luz de menor
energía (longitud de onda más larga). Cada
fluorocromo tiene un espectro de emisión y
excitación característicos; si se utilizan dos con
el mismo espectro de excitación pero distinto
espectro de emisión, se pueden medir dos
características al mismo tiempo (fluorescencia
de dos colores).
• La inmunofluorescencia se utiliza
esencialmente en la detección de
autoanticuerpos y anticuerpos contra
antígenos de superficie de células y tejidos.
Inmunofluorescenci Inmunofluorescenci
a directa a indirecta
• Se tratarel tejido o células con
• Se emplean anticuerpos antisueros anti-antígeno
preparados frente a la proteína producidos, por ejemplo, en
que se desea detectar marcados conejo y secundariamente
con moléculas fluorescentes . antiinmunoglobulinas marcadas
• Se aprecia si hubo unión del con un fluorocromo
anticuerpo con el antígeno por la
fluorescencia emitida, que se
observa bajo microscopio de luz
ultravioleta.
• Este procedimiento, tiene la
limitación del marcaje con un
fluorocromo de cada uno de los
anticuerpos necesarios para cada
una de las sustancias a investigar.
• La técnica de inmunofluorescencia se suele
utilizar en el estudio de poblaciones de células
• de sangre periférica. Actualmente el análisis
de una suspensión de células vivas marcadas
• con un fluorocromo se realiza mediante un
citómetro de flujo