ASISTENSI 2

PREPARAT APUS

Membuat preparat hapus dari spesimen

cair dan padat untuk pewarnaan sederhana TUJUAN
dan pewarnaan gram

Alat dan Bahan :

1) Biakan bakteri
2) NaCl 0,9%
3) Kaca objek
4) Sengkelit
5) Bunsen
6) Alcohol
 CARA KERJA

Spesimen padat : Spesimen cair :

1. Bersihkan kaca objek 1. Untuk spesimen ini

2. Teteskan NaCl 0,9%
tidak membutuhkan
3. Oleskan spesimen padat
pada kaca objek di NaCl 0,9%
dekat tetesan NaCl 2. Ambil spesimen
0,9% cair dgn sengkelit,
4. Buat suspensi dari NaCl dan oleskan di kaca
dan spesimen
benda
5. Biarkan mengering
6. Fiksasi di bunsen 3. Apuskan secara
7. Simpan untuk melingkar
pewarnaan sederhana 4. Keringkan dan
dan gram fiksasi
 PEWARNAAN

Alat dan Bahan :

1) Rak pewarnaan
2) Kaca objek
3) Pipet tetes
4) Bunsen
5) Sengkelit
6) Biakan bakteri
7) Zat warna
8) Aquades
9) Tisu/kertas saring
10) Stopwatch
 PEWARNAAN
SEDERHANA
Untuk mengetahui morfologi dan koloni
bakteri dengan menggunakan satu zat warna TUJUAN

Pewarnaan sederhana menggunakan zat warna

basic yang bermuatan (+), muatan (+) ini
berinteraksi kuat dengan dinding sel bakteri yang PRINSIP
bermuatan (-) sehingga dapat memberi warna pada
dinding sel bakteri

• Methylen Blue
ZAT
• Crystal Violet
• Carbol Fuchsin WARNA
 CARA KERJA

1) Sediakan preparat apus

2) Tetesi preparat dengan zat warna
: methylen blue, crystal violet,
carbol fuchsin
3) Diamkan 1 menit
4) Bilas dengan aquades
5) Keringkan dengan menggunakan
tisu
6) Amati preparat dibawah
mikroskop
 PEWARNAAN
NEGATIF
Melihat morfologi dan koloni bakteri dengan
mewarnai latar belakangnya TUJUAN

Negrosin bermuatan (-) dan dinding sel bakteri

juga bermuatan (-) sehingga negrosin tidak
mewarnai dinding sel bakteri, sehingga bakteri yang PRINSIP
tidak diwarnai akan dengan mudah terlihat pada
latar belakang yang berwarna

Tinta India
ZAT
atau
Negrosin WARNA
 CARA KERJA

1) Teteskan zat warna tinta india/negrosin di

pinggir kaca objek
2) Ambil sedikit biakan bakteri dengan
menggunakan sengkelit
3) Letakkan biakan bakteri di tetesan zat
warna
4) Gunakan kaca objek lain untuk meratakan
zat warna ke seluruh permukaan kaca
objek
5) Biarkan preparat mengering
6) Fiksasi 3x di bunsen
7) Amati dibawah Mikroskop
PEWARNAAN KAPSUL

TUJUAN
Melihat morfologi dan koloni bakteri dengan
mewarnai latar belakangnya

ZAT WARNA
Tinta India/
Negrosin
Safranin
CARA KERJA

1) Teteskan zat warna tinta india/negrosin di

pinggir kaca objek
2) Ambil sedikit biakan bakteri dengan
menggunakan sengkelit
3) Letakkan biakan bakteri di tetesan zat
warna
4) Gunakan kaca objek lain untuk meratakan
zat warna ke seluruh permukaan kaca
objek
5) Biarkan preparat mengering
6) Fiksasi 3x di bunsen
7) Amati dibawah Mikroskop
PEWARNAAN GRAM

TUJUAN
Melihat morfologi dan koloni bakteri dan
mengetahui sifat gram suatu bakteri

ZAT WARNA
Primer : Crsytal Violet
Mordant : Lugol / Iodine
Peluntur : Alkohol 96%
Kontras : Safranin
CARA KERJA

1) Letakkan preparat mendatar di atas rak preparat, dan

tuangi masing-masing dengan larutan kristal violet
dan biarkan selama 1-2 menit.
2. Buang zat warna, dan cuci dengan air mengalir
3. Tetesi seluruh preparat dengan larutan lugol, biarkan
selama 30 detik
4. Buang larutan lugol dan bilas preparat dengan air
mengalir
5. Lunturkan preparat dengan alkohol 96%
6. Tetesi dengan zat warna kontras , biarkan selama 2
menit
7. Buang zat warna dan cuci dengan air mengalir
8. Periksa di bawah mikroskop dengan pembesaran 100
PEWARNAAN TAHAN
ASAM
TUJUAN
Untuk melihat bentuk dan sifat
tahan asam dari bakteri.

ZAT WARNA
Primer : Larutan Kinyoun
( Carbol Fuchsin )
Peluntur : Alkohol asam
( ethanol 95% + HCl 3 %)
Kontras : Methylen Blue
CARA KERJA

1. Letakkan preparat mendatar diatas rak pewarnaan

dan tuangi larutan Kinyoun, biarkan selama 3-5
menit
2. Buang zat warna dan cuci preparat dengan air
mengalir
3. Lunturkan zat warna dengan alkohol asam sampai
semua zat warna larut
4. Segera cuci dengan air mengalir, dan keringkan
dengan kertas saring
5. Tuangi preparat dengan larutan Methylen Blue,
biarkan 3 menit
6. Cuci dengan air mengalir dan keringkan dengan
kertas saring
7. Lihat dibawah mikroskop dengan pembesaran
emersi
PEWARNAAN SPORA

TUJUAN
Untuk melihat spora dan sel
vegetatif pada bakteri

ZAT WARNA
Primer : Malachite Green
Peluntur : Air
Kontras : Safranin / Larutan
Fuchsin
 TES KEPEKAAN
ANTIBIOTIK
MUELLER HINTON AGAR
TUJUAN
Membandingkan sensitivitas bakteri
terhadap jenis-jenis antibiotic

CLEAR ZONE / ZONA INHIBISI

DISC ANTIBIOTIK
RESPON
1
Apa perbedaan pembuatan preparat apus dengan
menggunakan spesimen padat dengan
menggunakan spesimen cair ?
2

Apa tujuan dilakukannya fiksasi ?

3
Sebutkan alat dan bahan yang
digunakan untuk melakukan
pewarnaan ! ( minimal 5 )
4

Sebutkan berbagai macam jenis

pewarnaan !
5
Sebutkan apa yang berperan sebagai
mordant serta fungsinya pada
pewarnaan gram !
6

Jelaskan secara singkat tahapan

pewarnaan gram !
7
Apa perbedaan metode tanzil dan
ziehl neelsen pada pewarnaan tahan
asam ?
8
Tuliskan tujuan dan zat warna yang
digunakan pada pewarnaan tahan
asam !
9
Sebutkan zat warna yang digunakan
pada pewarnaan tahan asam
metode tanzil !
10