“METODOS DE ESTERILIZACIÓN”

Materia: Laboratorio de Técnicas Microbiológicas.

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 Definición

Incapacidad reproductiva de los organismos vivos.

Remoción o destrucción total de toda forma de vida contenida en un

elemento de volumen o en una superficie de un determinado material.

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 Otras definiciones

Desinfección: Disminución de la carga microbiana contenida

en un determinado material, sin llegar a la destrucción o
remoción total de los mismos.

Asepsia: Material libre de microorganismos.

Antisepsia: Es el uso de una sustancia química no tóxica

(antiséptico) sobre tejidos vivos, para prevenir o detener el
crecimiento o la acción de los microorganismos, ya sea
inhibiendo su actividad o destruyéndolos.

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 Otras definiciones
Los agentes químicos que tienen la particularidad de destruir
totalmente un determinado grupo microbiano, se denominan con
el nombre genérico del grupo microbiano sobre el que actúan
con la terminación "cida" (bactericida, fungicida, esporocida,
viricida, etc.).

Si un determinado agente químico detiene o retarda la

reproducción de un determinado grupo microbiano sin destruirlo,
se denominará con el nombre del grupo en el que actúa con la
terminación "stático" (bacteriostático, etc.).

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 Selección del método
FACTORES A CONSIDERAR

•Microorganismos.
- Grado de muerte microbiana requerido
- Naturaleza microbiana (virus, bacterias...)
•Instrumental.
- Uso al que se destine
- Naturaleza del objeto a tratar
•Costo del procedimiento.
•Facilidad/accesibilidad de la técnica.
•Impacto medioambiental.

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 Relación de resistencia
(9) PRIONES (EJC)

(1) ESPORAS BACTERIANAS (Bacillus spp., Clostridium spp.)

(5)MICOBACTERIAS (Mycobacterium tuberculosis)

(6) VIRUS PEQUEÑOS SIN ENVOLTURA (Poliovirus)

(4) BACTERIAS GRAMNEGATIVAS (Pseudomonas spp.)

(2) HONGOS (Aspergillus spp., Candida spp.)

(7) VIRUS MEDIANOS SIN ENVOLTURA (Adenovirus)

(3) BACTERIAS GRAMPOSITIVAS (Staphylococcus spp.)

(8) VIRUS CON ENVOLTURA (HIV, VHB)

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 Métodos de
esterilización

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 Físicos:
Temperatura
CALOR SECO CALOR HÚMEDO
Vidriería, equipos metálicos (pinzas, espátulas,
etc.), es decir, materiales que soporten altas Medios líquidos y materiales que no soporten
Uso
temperaturas. No es aplicable en la las altas temperaturas
esterilización de medios de cultivos.

Hasta 200 OC por tiempos relativamente largos Hasta 130 OC por tiempos relativamente cortos
Condiciones (aproximadamente dos horas) (aproximadamente 30 minutos)
Mecanismo Por la desnaturalización de las proteínas y
Por una oxidación de la materia orgánica
de acción enzimas microbianas.
Transferencia Mayor resistencia Menor resistencia
de calor
Eficiencia Menor Mayor

Flameado Pasteurización
Tipos Incineración Ebullición
Aire caliente Vapor saturado

Mecheros Pasteurizadoras
Equipos Incineradores Parrillas, baños de agua caliente
Hornos Autoclaves, ollas de presión

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 Físicos:
Temperatura
LA ACCIÓN LETAL DEL CALOR ES UNA RELACIÓN DE TIEMPO Y TEMPERATURA

La mayoría de bacterias, levaduras y hongos 80oC , 5-10 min

Mycobacterium tuberculosis 58oC , 30 min

Mycobacterium tuberculosis 59oC , 20 min

Mycobacterium tuberculosis 65oC , 2 min

Staphylococcus aureus, Enterococcus faecalis 60oC , 60 min

La mayoría de esporas patógenas 100oC , pocos min

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 Físicos:
Temperatura

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 Físicos:
Temperatura

CONGELACIÓN

• Mecanismo de acción: Daño celular causado por

cristales.
Se requiere de varios ciclos.
Costoso y largos periodos.
Uso poco frecuente.

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 Físicos:
Radiación
•Usos.
RADIACIONES IONIZANTES.
– Para elementos que no soportan
• Son los rayos X y Gamma, y los el calor y la humedad (jeringas,
radioisótopos Co60 y Cs137. materiales médicos y de origen
• Efectos letales y mutagénicos. biológico: medicamentos,
alimentos).
• Muy penetrantes.

•Desventaja:
– Medidas de seguridad y costo.
RADIACIONES NO IONIZANTES.
• Son los rayos UV.
• Cambios en el ARN o en proteínas.
• Poco penetrantes.

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 Físicos: agentes
mecánicos
FILTRACIÓN
Para materiales termolábiles y sensibles a radiaciones.
Esterilización de aire.
Tamaño del poro: 0.005-1 µ.
Los virus no son retenidos
◦ Filtros de membrana
◦ Filtros HEPA

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 Físicos: agentes
mecánicos
ULTRASÓNICOS

◦ Vibraciones de alta frecuencia (poca penetración).

◦ Desnaturalizar las proteínas y componentes bacterianos.

◦ Se emplean en un baño de agua para limpieza de material.

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 Químicos

DESINFECTANTES ANTISEPTICOS
◦ Oxido de etileno ◦ Alcohol etílico 70 %
◦ Alcohol ◦ Clorexidina
◦ Fenol ◦ Jabones
◦ Jabones ◦ Detergentes
◦ Detergentes catiónicos ◦ Sol. Yodadas
◦ Sol. cloradas ◦ Metales pesados
◦ Ácidos y álcalis ◦ Peróxido de Hidrógeno 3-6%
◦ Aldehídos

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 Químicos
EFICIENCIA DE LOS DESINFECTANTES

1.Naturaleza de los microorganismos presentes.

2.Condiciones físico-químicas.

3.Presencia de materia orgánica.

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 Químicos
1. NATURALEZA DE LOS MICROORGANISMOS
Potencia de los desinfectantes:
Alto nivel:
• Bacterias vegetativas.
• Micobacterias, hongos, virus.
• No esporas bacterianas.
Nivel intermedio:
• Bacterias vegetativas.
• Hongos y virus.
• Dificultad virus desnudos de pequeño tamaño.
• No esporas bacterianas.
Bajo nivel:
• No todos los hongos.
• No virus desnudos de pequeño tamaño.
• No esporas bacterianas.
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 Químicos
2. CONDICIONES FÍSICO-QUÍMICAS

1. Tiempo de exposición.
2. Temperatura.
3. Concentración.
4. pH.

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 Químicos
3. Presencia de materia orgánica
• Puede captar e inactivar al desinfectante (Ej. Derivados
del Cl).
• Puede dificultar el contacto del desinfectante con los
microorganismos.
• ¡¡¡Imprescindible limpiar material antes de la
desinfección!!!

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 Químicos
OXIDO DE ETILENO
• Mecanismo de acción: oxidación y agentes alquilantes.
•Se debe combinar con CO2.
•Gran poder de penetración.
• Alto nivel y esterilizante con rapidez de efecto.
•Uso:
– Esterilización de materiales no resistentes al calor ni a la humedad (material
descartable, equipos electrónicos).
– 4 h a 58 oC con 40% de humedad.
– Si se utiliza a temperatura ambiente debe actuar 12 h.
•Usar cámara hermética y airear los elementos antes de ser utilizados
(tóxico, mutágeno).

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 Químicos
ALDEHÍDOS (GLUTARALDEHÍDO Y FORMALDEHÍDO)
• Mecanismo de acción: Agentes alquilantes.
• Alto nivel y esterilizantes.
• Muy tóxicos y potencialmente carcinogénicos.
• Usos:
– Esterilización de materiales no resistentes al calor
(glutaraldehído).
– Desinfección de cabinas de seguridad biológica
(formaldehído).

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 Químicos
GLUTARALDEHIDO FORMALDEHIDO

Se utiliza al 2% en solución acuosa. • Se presenta comercialmente en

solución acuosa al 40%, a partir de
Bactericida, tuberculocida y viricida en ella se realiza la solución final al 3
10 minutos. u 8 %(según uso).
Tiene efecto esporicida pero necesita • Formalina al 8% esporicida (no
de 10 h a temperatura ambiente. menos de 18 h a temperatura
ambiente).
Luego de su uso se deben enjuagar los • Preparación de vacunas al 0.2-
elementos con abundante agua estéril
0.4%.
• Uso muy restringido.

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 Químicos
FENOLES Y DERIVADOS
• Mecanismo de acción: Alteración de la membrana y
coagulación de proteínas.
• Nivel intermedio.
• Usos:
– Descontaminación ambiental.
– Al 5% excelente desinfectante para Micobacterium tuberculosis.
– Antisépticos: Hexaclorofeno y triclosan.
• Actúan en presencia de materia orgánica.
• De olor muy picante y tóxico.

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 Químicos
ALCOHOLES
• Mecanismo de acción: desnaturalización de proteínas y
alteraciones en la membrana.
• Nivel intermedio.
• Escasa toxicidad
• Usos:
– Etílico o isopropílico (al 70%). 2 minutos de contacto mata casi el
90% de los microorganismos cutáneos. Concentraciones menores
al 45% tienen una actividad incierta.
– Antisépticos cutáneos en forma de solución acuosa al 70-90 %.
– Desinfectantes de objetos semicríticos y no críticos.
Inactivación por la materia orgánica.
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 Químicos
DETERGENTES CATIÓNICOS
(AMONIOS CUATERNARIOS)
• Mecanismo de acción: alterando la membrana celular.
• Bajo nivel
• Poco tóxicos
• Uso:
- Antisépticos.
- Desinfectantes (saneamiento ambiental).
- Mayor actividad a pH alcalino.
• No son esporicidas, ni tuberculicidas.
• Su acción es interferida por la presencia de materia orgánica, y
son neutralizados por jabones y detergentes aniónicos.

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 Químicos
CLORO Y COMPUESTOS
• Mecanismo de acción: Oxidación.
• Alto o bajo nivel (en función de la concentración).
• Muy tóxico y corrosivo.
• Usos:
– El más usado es hipoclorito de sodio en solución acuosa (material
contaminado 1/10; sino al 0.3%).
– Tratamiento de aguas.
– Desinfección de superficies ambientales en general.
• Inactivación por la materia orgánica e inestabilidad.
• Inestable, las soluciones se deben preparar en el momento y proteger
de la luz y el calor.

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 Químicos
YODO Y COMPUESTOS
• Mecanismo de acción: Oxidación (< Cl) y
halogenación.
• Nivel intermedio.
• Poco tóxicos.
• Usos:
– La tintura de yodo y yodóforos son los antisépticos de
mayor uso (piel intacta, heridas, colutorios, lavado
quirúrgico de manos,...).
• Inactivación por la materia orgánica. Proteger de la luz.

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 Químicos
ACIDO PARACÉTICO
• Mecanismo de acción: Oxidación y alteración de la
permeabilidad de la membrana.
• Alto nivel y esterilizante.
• Tóxico y corrosivo de metales.
• Usos:
– Esterilización de endoscopios.
– Desinfección de instrumental.
• Se mantiene activo en presencia de materia orgánica
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 Químicos
PERÓXIDO DE HIDRÓGENO
• Mecanismo de acción: Oxidación.
• Potencia variable (en función de la concentración y
temperatura).
• Soluciones concentradas son tóxicas y corrosivas
• Usos:
– Solución madre al 30%, a partir de aquí se hace la solución final al 3-6
%. Desinfección de lentes de contacto (3%). Desinfección de equipos
médicos limpios (6%)
– Antisepsia de heridas.
– Esterilización con PLASMAGAS.
• Se debe preparar antes de usar. Guardar en frasco, tiene color
caramelo.

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 Químicos
PLASMAGAS
• H2O2 vaporizado, sometido a radiaciones de alta
energía.

• Mecanismo acción: formación de radicales libres

(oxígeno atómico) de alto poder microbicida.

• Agente esterilizante.

• Ventajas frente al óxido de etileno:

- No productos secundarios tóxicos.
- Alta eficiencia.
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 Químicos

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 Verificación
INDICADORES QUÍMICOS.
◦ Son dispositivos que contienen sustancias químicas
que cambian de color o de estado cuando se
exponen a una o mas variables críticas del proceso.
Cada método tiene sus variables críticas.
◦ Los indicadores químicos por si solos no garantizan
calidad de un proceso de esterilización.

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 Verificación
INDICADORES BIOLÓGICOS:
◦ Se consideran como el ÚNICO medio existente mas
definitivo para confirmar la esterilización de materiales.
◦ Son preparaciones estandarizadas de microorganismos
vivos específicos y de alta resistencia.
◦ Se emplean en general esporas de Bacillus
stearothermophilus; esporas de Bacillus subtilis,
Aspergillus niger.

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 Verificación
INDICADORES BIOLÓGICOS.

◦ Tiras con espora: Son sobres con

esporas.

◦ Autocontenidos: Son los mas usados.

Esporas sobre papel que van dentro de
un tubo plástico que contienen un
caldo de cultivo.

◦ De Lectura Rápida: Consiste en un

sustrato que al detectar una enzima
activa asociada a esporas de
microorganismos pasa a ser
fluorescente.
 Referencias
Breach, M.R. Esterilización, métodos de control. El manual
Moderno, S.A. México
Davis, B., Dulbecco, R., Eisen, H., Ginsberg, H., Wood, W.
1978.Tratado de Microbiología. Ed. Salvat. 2ª edición. España.
Harley, J., Prescott, L. 2002. Laboratory Exercises in Microbiology.
McGraw−Hill . 5th Edition. EUA.
Jhonson, T.R. and Case, C.L. Laboratory experiments in
microbiology. 4th edition. The Benjamin/Cummings Publishing
Company, Inc. California.
Madigan, M.T., Martinko, J.M. y Parker, J. Brock, Biología de los
microorganismos. 10ª edición. Prentice Hall. USA.
Stanbury, P.F., Whitaker, A., Hall, S.J. 1999. Principles of
Fermentation Technology. Butterworth-Heinemann. EUA.

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