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Ciências da Natureza e suas

Tecnologias - Biologia
Ensino Médio, 3º Ano
Questões éticas da manipulação do DNA
BIOLOGIA – 3º Ano
Questões éticas da manipulação do DNA

INTRODUÇÃO

Biotecnologia corresponde a técnicas que têm


permitido ao ser humano utilizar organismos para obter
produtos de seu interesse.
Durante milênios, os agricultores vêm cruzando
diferentes espécies e variedades vegetais para obter
plantas com determinadas características.
Há cerca de 3 mil anos, por exemplo, lavradores
chineses cultivaram uma leguminosa silvestre que
produzia um feijão preto ou marrom: a soja. Atualmente,
há cerca de 7 mil variedades de soja, o que ilustra a
grande diversidade obtida por meio de técnicas
convencionais de cultivo.
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Questões éticas da manipulação do DNA

A engenharia genética possibilita a manipulação de


moléculas de DNA. Por meio dessas técnicas, é possível
gerar organismos transgênicos, mapear os genes nos
cromossomos e em qualquer lugar dele um gene se
localiza.
É possível, também, realizar o chamado
sequenciamento gênico, ou seja, determinar qual é a
sequência de bases nitrogenadas de um gene. Essas
informações têm permitido aprimoramento nos serviços de
aconselhamento genético, pois possibilitam que um
indivíduo normal saiba se ele é ou não portador de um
alelo do gene que causa alguma doença (deletério) e que
pode ser transmitido a seus descendentes.
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Questões éticas da manipulação do DNA

Além disso, esses conhecimentos ajudam a aprimorar


as informações que podem ser obtidas em diagnostico pré-
natal sobre doenças genéticas em fetos.
As técnicas de engenharia genética permitem ainda
fazer a identificação de pessoas com base na análise do
DNA, com um nível de certeza igual aos das impressões
digitais.
Por isso, fala-se em “impressões digitais” genéticas
ou DNA fingerprint (palavra inglesa que significa impressão
digital). Esses recursos têm sido empregados em testes de
paternidade para resolver casos de troca de crianças em
maternidades, além de problemas criminais, como estupros,
roubos e assassinatos.
A engenharia genética está abrindo caminhos para a
produção de hormônios de forma mais rápida e eficiente.
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DNA
RECOMBINANTE
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Questões éticas da manipulação do DNA

A técnica central na tecnologia do DNA


recombinante é o isolamento de moléculas de DNA e sua
inserção em outro organismo.
Para isso, é preciso isolar o trecho de DNA a ser
inserido. Esse processo envolve a fragmentação do DNA
dos cromossomos na interfase, o que é feito pela ação de
enzimas especiais denominadas enzimas de restrição.
A descoberta dessas enzimas permitiu grandes
avanços na manipulação do DNA.
Nas bactérias, essas enzimas fazem parte dos
mecanismos de defesa desses procariontes contra os
vírus, pois atuam como verdadeiras “tesouras
moleculares”, cortando o DNA viral em vários pedaços e
tornando-o inativo.
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Cada enzima de restrição corta o DNA somente


quando encontra uma sequência específica de bases
nitrogenadas. Dessa forma, esse corte não é feito em
qualquer lugar. Os cientistas já sabem onde atua cada uma
das enzimas de restrição conhecidas. Por exemplo, existe
uma enzima chamada Eco R1, a qual corta o DNA toda
vez que encontra as seguintes sequências pareadas:

Regiões que ... GAATTC ...


serão cortadas
Por Eco R1 ... CTTAAG ...

Dois fragmentos ... G AATTC ...


resultantes
... CTTAA G ...
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Ao encontrar essa sequência, Eco R1 sempre corta


o DNA entre as bases G e A. Além dessas enzimas com
capacidade de cortar o DNA em locais específicos, os
cientistas têm conseguido inserir segmentos isolados em
outra molécula de DNA, com o uso de enzimas chamadas
DNA ligases.
Aproveitando-se dessas propriedades, os cientistas
têm usado as enzimas de restrição para cortar moléculas
de DNA de vários organismos, inclusive das próprias
bactérias. Assim, tem se conseguido trabalhar com trechos
menores da molécula de DNA e isolar genes.
Esses genes ou trechos de DNA isolados são
unidos a moléculas de DNA de outro organismo. A
molécula de DNA associada ao novo trecho inserido é
denominada DNA recombinante.
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CLONAGEM DE
DNA
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Clonagem de DNA significa produção de inúmeras


cópias idênticas de um mesmo fragmento de molécula de
DNA. Esse processo tem início com o isolamento, pela
ação das enzimas de restrição, de fragmentos do DNA a
serem clonados. Depois de isolados, esses trechos são
introduzidos no DNA de outros organismos, principalmente
vírus e bactérias, que aceitam essa manipulação.
Esses organismos são chamados de vetores. Ao se
reproduzirem, esses microrganismos multiplicam as
moléculas recombinantes, dando origem a um grande
número de células idênticas. Consegue-se, desse modo,
produzir grande número de cópias exatas (clones) de um
mesmo trecho de DNA.
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Cromossomo bacteriano
DNA humano O plasmideo
Plasmideo codifica a
síntese de uma
As enzimas quebram Substância B.
Local de ação da
Bactéria
a molécula de DNA enzima de restrição
em dois locais Extração
precisos, isolando Local de ação da enzima
um gene que codifica Gene de restrição Outras enzimas
a síntese de uma unem o gene
Local de ação da enzima – DNA ligase
substância A. isolado ao
Gene
Local de ação da plasmideo
enzima – DNA ligase retirado da
bactéria
Reintroduz-se o plasmideo na bactéria

Bactéria recombinante. Passa a produzir


as susbtâncias A e B

Meio de cultura.
Duplicação da bactéria,
dando origem a um clone

Esquema simplificado da formação de DNA recombinante e sua clonagem em bactérias


(Elementos representados em diferentes escalas, cores-fantasia.)
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DNA viral DNA humano


Genes
Genes Genes não
De interesse
essenciais essenciais

Cortes com enzimas Cortes com a mesma


De restrição A Enzimas de restrição A
União com a
Enzima DNA ligase

Gene Humano

DNA recombinante

Adciona-se ao meio com DNA recombinante proteínas


Virais e enzimas para que ocorra a reconstituição do vírus.

Esquema simplificado de
Formação de DNA
Recombinante
Em vírus e sua
Vírus produzido Clonagem.
em laboratório (cores –fantasia.)

Esses vírus são introduzidos em culturas de bactérias ou de células de outros


Organismos, onde ocorre replicação do DNA recombinante, formando vários vírus.
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ALGUMAS
UTILIZAÇÕES
PRÁTICAS DA
CLONAGEM GÊNICA
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A produção de certos hormônios da espécie humana já


tem sido realizada por meio de técnicas de clonagem, como as
descritas. É o caso da insulina e da somatotropina (hormônio
do crescimento).
Hoje, já é possível produzir insulina clonando o gene
humano em bactérias e o estimulando para que entre em
atividade. Produzem-se, assim, quantidades consideráveis de
insulina, posteriormente isolada e purificada para a utilização
humana.
Bactéria com o gene Matérias-primas
Humano para insulina

Processos
Industriais de Purificação
produção

Outras Insulina
substâncias
Esquema de produção de
Clonagem de bactérias Insulina por engenharia genética.
recombinantes (Elementos representados em diferentes escalas; cores fantasia)
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IDENTIFICAÇÃO DE
PESSOA
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O DNA fingerprint tem sido útil para a identificação de


pessoas, para esclarecer dúvidas sobre a possível
participação de suspeitos em crimes e para realizar testes de
paternidade. Os testes que utilizam DNA fingerprint fornecem
certeza de 99,9% em seu resultado.
Os cromossomos humanos contêm cerca de 35 mil
genes diferentes, mas isso representa apenas 3% do
conteúdo do genoma humano. O restante é formado por DNA
não codificante.
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Amostras contendo fragmentos


de DNA de diferentes tamanhos; Esse padrão de bandas
cada amostra é de uma pessoa fica evidente quando se adiciona
à placa de gel corante específico
que fluoresce na luz ultravioleta,
Polo Os fragmentos Eletroforese
negativo
como mostra a fotografia.
migram no gel completa
I II III
Gel
Fragmentos
maiores

Fragmentos
menores
Placas
de vidro Desliga-se a corrente elétrica.
Polo positivo Os fragmentos maiores
Os fragmentos ficam separados
se deslocam menos
Amostras são colocadas em pequenas por tamanho, formando
e os menores, mais.
depressões do gel, que fica sustentado faixas na placa de gel. Cada
por placas de vidro e imerso em solução coluna corresponde ao DNA
Aquosa. Eletrodos ligados nas duas de uma das amostras
Extremidades estabelecem um polo – e outro +.

Esquema resumindo as etapas de separação de fragmentos de DNA por meio da eletroforese em gel.
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I II III A placa de gel é colocada em uma cuba com solução alcalina. Esta migra por
capilaridade em direção às toalhas de papel, passando pelo gel e pela membrana
de nitrocelulose. Nesse processo, há desnaturação do DNA e as cadeias simples
do DNA ficam aderidas à membrana.
Toalhas A membrana é
de papel removida e
colocada em um
meio contendo As sondas são cadeias simples
sondas radiativas. de DNA radioativo complementar
Placa de gel após
a eletroforese à sequência de DNA de interesse.
Elas se unem apenas nesses
trechos, marcando-os: DNA
hibridizado. Lava-se a preparação
para remover as sondas que
não se uniram ao DNA

Sondas de DNA
Cuba contendo
radiativo
solução alcalina Filme
(cadeias simples)
fotográfico

Saco plástico

Uma folha de filme fotográfico é colocada sobre a membrana.


A radiatividade da sonda impressiona o filme, que passa
a conter o padrão de bandas com o DNA de interesse.
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TERAPIA GÊNICA
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Essa técnica consiste em substituir o alelo anormal,


que causa doença, pelo alelo normal. Os estudos de
terapia gênica estão até o momento restritos a células
somáticas, mas, em um futuro próximo, pretende-se atuar
sobre as células que formam os gametas, de modo que o
indivíduo afetado não possa mais transferir o alelo anormal
para seus descendentes.
As principais maneiras de introduzir genes em
humanos, nos casos de terapia gênica, têm sido:
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Técnica ex vivo: consiste em usar um vetor como um


vírus modificado que contenha o alelo normal. A seguir,
colhem-se glóbulos brancos (leucócitos) do sangue da
pessoa afetada e se permite que os vírus alterados
infectem essas células em meio de cultura. Os vírus
introduzem nos leucócitos o alelo normal e, assim
modificados, os leucócitos são mantidos em meios
propícios à sua intensa multiplicação. Depois são
reintroduzidos no paciente, em um processo semelhante a
uma transfusão de sangue.
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Técnica in vivo: consiste na clonagem em um vetor do


alelo normal e de seu preparo para introdução no paciente,
por meio de injeção na veia ou intramuscular. Alguns dos
alelos acabam por ser incorporados às células do paciente,
e dentro delas passam a comandar a síntese da proteína
normal.
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1 e 2 Células de um paciente são removidas e


mantidas em meios de cultura onde se Vetores
adiciona o gente de interesse, Células
usando vetores humanas

2 1
3O vetor
introduz
nas células
3 humanas
o seu DNA,
Células humanas que contém
Geneticamente o gene de
modificadas interesse.

4
4
As células
Gene de humanas
interesse geneticamente
terapêutico modificadas
são introduzidas
Vírus como vetor no paciente.

Representação esquemática do processo de introdução de genes modificados no corpo humano pelos processos
in vivo (representado pela seta laranja) e ex vivo (representado pelas setas azuis). (Elementos representados em
diferentes escalas: cores-fantasia.)
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VACINAS GÊNICAS
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Utilizando as técnicas da biologia molecular, os


cientistas estão avançando em mais uma área importante:
as vacinas a partir do DNA. Genes de agentes causadores
de doenças e que codificam proteínas responsáveis por
estimular o sistema imunológico humano têm sido isolados
e inseridos em bactérias e clonados.
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CLONAGEM
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Ovelha Blackface: Ovelha Finn Dorset:


doadora do ovócito doadora da célula mamária

Células mamárias mantidas em meio


de cultura sem nutrientes.
Ovócito Células Mamárias Com isso, a célula não se divide,
entrando em estado de quiescência.
Nesse momento, todos os genes
podem ser ativados
O núcleo haploide é
removido por
micromanipulação
Célula quiescente pronta para clonagem

Células são mantidas em


cultura por seis dias Descarga Elétrica para estimular a fusão e a
divisão celular

Blastocisto de 6 dias
Vários blastoscistos assim produzidos são implantados no
útero da futura mãe, que é uma fêmea da raça Blackface.

Dolly: ovelha
Finn Dorset,
clone de fêmea
doadora da célula Imagem: Squidonius/ Public Domain
mamária
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ORGANISMOS
TRANSGÊNICOS
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Organismos transgênicos são aqueles que recebem


genes de outras espécies de seres vivos. A importância
deles está na obtenção de indivíduos em características
vantajosas e que produzam substâncias de interesse para
o ser humano.
A transferência de genes de um organismo para
outro já foi feita com sucesso em camundongos: o gene
que produz o hormônio do crescimento humano foi isolado
e transferido para zigotos do camundongo, logo após a
fertilização in vitro; os ovócitos foram removidos
cirurgicamente e fecundados com espermatozoides.
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Imagem: Ovócito/ Ekem/ Public Domain


Fotomicrografia mostrando introdução do material genético
em ovócito de mamífero. O ovócito está preso por sucção
à pipeta, e o material genéticos está sendo introduzido por
uma microagulha de vidros. O ovócito mede cerca de
100 mm de diâmetro.
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Imagem: Ingrid Moen et al/ Creative Commons Atribuição 2.0 Genérica


Fotografia de filhotes de camundongos normais e
transgênicos sob luz especial. Os camundongos transgênicos
sintetizam uma proteína de água-viva, que confere a cor
verde fluorescente à sua pele, sob essa iluminação.
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Imagem: Malene Thyssen/ GNU Free Documentation License


Fotografia de ovelha transgênica que expressa o gene humano
que codifica a proteína alfa-1-antitripsina. A proteína é usada no
tratamento de pessoas que não a produzem em quantidade
suficiente, o que pode causar enfisema pulmonar.
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Imagem: United States Department of Agriculture/ Disponibilizado por Jurema


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Oliveira/ Public Domain

Fotografia de sementes de soja e de mamoeiro transgênicos.

Imagem: United States Department of Agriculture/ Disponibilizado por Jurema


Oliveira/ Public Domain
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Imagem: David W. Ow et al/ US Dept. of Agriculture and the National Science


Foundation/ GNU Free Documentation License
Fotografia de planta de tabaco com gene de vaga-lume, que lhe deu a
característica de bioluminescência
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Fotografia de
mexilhões e, dentro
de um frasco,

David W. Ow et al/ US Dept. of Agriculture and the National Science Foundation/


planta de tabaco
geneticamente
modificada. A planta
recebeu genes
de mexilhão que
codificam a síntese
da substância adesiva
dos fios que prendem
o animal ao substrato
(fios do bisso)

GNU Free Documentation License


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Referência Bibliográfica

• Lopes, Sônia e Rosso, Sérgio; BIO: Volume 2 – 1. ed.


São Paulo: Saraiva, 2010.
Tabela de Imagens
n° do direito da imagem como está ao lado da foto link do site onde se conseguiu a informação Data do
slide Acesso

27 Squidonius/ Public Domain http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Dolly_clon 28/08/2012


e.svg?uselang=pt-br
30 Ekem/ Public Domain http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Oocyte.jpg 28/08/2012
31 Ingrid Moen et al/ Creative http://commons.wikimedia.org/wiki/File:GFP_Mice 28/08/2012
Commons Atribuição 2.0 Genérica _01.jpg?uselang=pt-br
32 Malene Thyssen/ GNU Free Documentation http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Klitf%C3% 28/08/2012
License A5r.jpg
33a United States Department of Agriculture/ http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Soybean.U 28/08/2012
Jurema Oliveira/ Public Domain SDA.jpg
33b Marco Schmidt/ Creative Commons http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Carica_pap 28/08/2012
Attribution-Share Alike 2.5 Generic aya_MS4113.JPG
34 David W. Ow et al/ US Dept. of Agriculture http://commons.wikimedia.org/wiki/File:Glowing_t 28/08/2012
and the National Science Foundation/ GNU obacco_plant.jpg?uselang=pt-br
Free Documentation License
35 Sandy Austin/ Creative Commons http://commons.wikimedia.org/wiki/File:New_Zeala 28/08/2012
Attribution 2.0 Generic nd_green_mussels.jpg

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