Aplicación de la técnica

de Southern Blot en la
detección de los
síndromes PRADER-WILLI Y
ANGELMAN
EMILIO LOPEZ
 Southern blot

Es una técnica empleada para detectar secuencias específicas de ADN.

Pasos:

Se aísla el ADN de un tejido o línea celular luego se purifica, y se digiere con

enzimas de restricción específicas.

Los fragmentos generados se separan mediante electroforesis y después son

transferidos a la membrana que sirve de soporte (gel de agarosa).

A continuación se sitúa la membrana sobre el gel y encima de esta una pila de

papel filtro seca, y por capilaridad la solución de transferencia es atraída a la pila
de papel filtro, arrastrando consigo al ADN hacia la membrana, donde queda
inmovilizado conservando la misma posición relativa que ocupaba en el gel.
 DIAGNÓSTICO CITOGENÉTICO Y
MOLECULAR DE LOS SÍNDROMES DE
PRADER-WILLI Y ANGELMAN
Descripción y características clínicas
Estos síndromes corresponden a enfermedades multisistémicas complejas
que se producen por trastornos genéticos asociados a una alteración
(microdeleción, disomía uniparental, mutaciones puntuales o falla en el
imprinting) del brazo largo (q) del cromosoma número 15.
Southern blot

Los fragmentos obtenidos después de digerir el ADN genómlco del

paciente con enzimas de restricción se separan en geles de agarosa al
1% y se transfieren a una membrana de nylon.

Por capilarldad según el método tradicional descrito en Sambbrook y

Maniatis et al., (1989), o empleando el TURBO BLOTTER™ (Rapid
Downward Transfer Systems} que permite reducir el tiempo de
transferencia de las 12-24 horas a 2-4 horas.

Finalizada la transferencia el ADN es covalentemente unido a la

membrana.

Sobre esta membrana se realiza la hibridación con la sonda previamente

marcada. Transcurrida la hibridación se hace un lavado del exceso de
sonda y se procede a la detección.
 CONCLUSIONES
El análisis citogenetico debe considerarse como prueba rutinaria para
descartar posibles reorganizaciones que implican al cromosoma 15 u
otras anomalías cromosómicas

El análisis de southern blot con detección quimioluminiscente es una

alternativa valida a la detección radioactiva. Representa el mayor
test para confirmar y descartar los síndromes de PRADER-WILLI Y
ANGELMAN