Pengertian dan Prinsip


 Pengertian
Kromatografi kolom merupakan metode pemisahan yang
didasarkan pada pemisahan daya adsorbsi suatu adsorben
terhadap suatu senyawa, baik pengotornya maupun hasil
isolasinya.

 Prinsip
Prinsip kerja kromatografi kolom perbedaan daya serap dari
masing-masing komponen, campuran yang akan diuji,
dilarutkan dalam sedikit pelarut lalu di masukan lewat puncak
kolom dan dibiarkan mengalir kedalam zat menyerap.
 Fasa Gerak dan Fasa
Diam

 Fasa Gerak atau eluen dapat berupa pelarut murni
atau campuran kelarutan.

 Fasa Diam atau adsorben (penjerap) dalam

kromatografi kolom adalah zat padat. Fasa diam
yang paling umum untuk kromatografi kolom
adalah silika gel diikuti dengan alumina.
 Proses Pemisahan

Senyawa yang lebih polar akan terserap lebih kuat sehingga turun
lebih lambat dari senyawa non polar terserap lebih lemah dan
turun lebih cepat. Zat yang diserap dari larutan secara sempurna
oleh bahan penyerap berupa pita sempit pada kolom. Pelarut lebih
lanjut atau dengan tanpa tekanan udara masing-masing zat akan
bergerak turun dengan kecepatan khusus sehingga terjadi
pemisahan dalam kolom.
 Analisis Kualitatif dan
Kuantitatif

Kuantitatif
Kadar komponen (eluen) yang diperoleh dapat ditentukan dengan
metode spektrofotometri dan titrasi

Kualitatif
Pergerakan komponen melalui kolom akan terjadi kesetimbangan
baru antara bahan penyerap, komponen campuran dan eluen.
Kesetimbangan dikatakan tetap jika masing-masing komponen
bergerak ke bagian bawah kolom dengan kecepatan yang berbeda-
beda sehingga terjadi pemisahan dengan terbentuk pita- pita (zona-
zona), masing-masingnya berisi satu macam komponen (eluat). Setiap
zona dapat ditampung dengan sempurna sebelum zona yang lain
keluar dari kolom.
 Penerapan

 Menganalisa zat pewarna alami dalam tumbuh-
tumbuhan
 Penentuan kualitatif dan kuantitatif senyawa dalam
protein
 Pemisahan asam nukleat, karbohidrat, lemak,
vitamin dan molekul yang lainnya.
 Menginvestigasi fluida badan