GPC (GEL PERMEATION

CHROMATOGRAPHY)

OLEH
KELOMPOK V (Lima)
AISYAH NUR SAPRIATI 1601045
AUGUSTINIA RELGA T. 1601010
JINGGA PERDANA 1601039
AISYAH HUMAIRA RS 1601052
NINGSIH PURNAMASARI 1601017
NURFADHILAH YUNUS 1401189

Sekolah Tinggi Ilmu Farmasi

Makassar
2018
 KROMATOGRAFI

KROMATOGRAFI GEL PERMEASI

KELEBIHAN DAN KEKURANGAN

INSTRUMEN

METODE DAN PEBAHASAN JURNAL

 TEORI UMUM

Kromatografi adalah metode pemisahan secara fisika yang mana

komponen-komponen yang akan dipisahkan terbagi antara dua fase, yang
satu adalah fase diam sementara yang lain adalah fase gerak yang yang
bergerak pada arah tertentu (Gandjar,2013).

Pada dasarnya metode

kromatografi adalah metode
analisa untuk memisahkan
komponen-komponen zat dari
campurannya yang berdasarkan
perbedaan migrasi dari masing-
masing komponen itu sendiri
terhadap adsorbsi fase diam
dibawah pengaruh fase geraknya
(Kusnowo,1990)
 Pembagian kromatografi

Kromatografi dibagi menjadi beberapa jenis bergantung pada jenis fasa mobile dan
mekanisme pemisahannya, seperti ditunjukkan pada table di bawah ini:
Kriteria Nama

Kromatografi cair, kromatografi

gas, kromatografi adsorpsi,
Fase Mobile kromatografi partisi

Kromatografi pertukaran ion,

Mekanisme kromatografi gel

Kromatografi kolom,
kromatografi lapis tipis,
Fase Stasioner kromatografi kertas
 KROMATOGRAFI GEL PERMEASI
Kromatografi gel permeasi merupakan proses pemisahan
dengan gel. Bahan ini dapat menyerap air dan membentuk
susunan seperti saringan yang dapat memisahkan
molekul-molekul berdasarkan ukurannya.

GPC adalah tipe dari LC yang fase diamnya yang

padat dan fase gerak yang digunakan adalah
cairan. Namun mekanisme pemisahannya disini
hanya bergantung pada ukuran molekul polimer
dalam larutan, bukan bahan kimia apapun yang
berinteraksi antara partikel dan fase diam
Alasan penggunaan utama
kromatografi gel biasanya karena:
Kromatografi gel sangat berguna untuk pemisahan spesies dengan berat molekul tinggi (BM < 2000),
terutama yang tak terionkan. Selain dari resolusi dari setiap makro molekuler seperti protein dan asam
nukleat, krimatografi gel dapat digunakan untuk mendapatkan distribusi berat molekul dari polimer sintesis.

Campuran sederhana dapat dipisahkan secara mudah dengan kromatografi gel, terutama jika penyusun
campuran itu memiliki berat molekul yang sangat berbeda.

Kromatografi gel sangat cocok untuk skrining awal, pemisahan cuplikan yang tak diketahui. Pemisahan ini
memberikan informasi isi cuplikan, sehingga dapat diketahui dengan cepat apakah cuplikan itu memiliki
berat molekul rendah atau berat molekul
Kelebihan

Tidak terjadi
Waktu pemisahan
Bisa mengukur pita- kehilangan cuplikan
pendek dan mudah
pita sempit atau reaksi selama
diramalkan
pemisahan

Kekurangan

Tidak dapat
digunakan untuk
Kapasitas terbatas cuplikan yang
mempunyai ukuran
yang hampir sama
 INSTRUMEN GPC
Katup injeksi Kit standar
Memperkenalkan digunakan untuk
sampel ke stream mengkalibrasi kolom untuk
eluent pada menunjukkan hubungan
konsentrasi yang antara waktu retensi dan
Sampler Otomatis diketahui
memperkenalkan berat molekul
sampel secara Oven
otomatis mempertahankan suhu kolom gpc

Detektor
Pompa
Kolom mendeteksi komponen yang
memompa eluent Melakukan pemisahan terselesaikan dari sampel yang dielusi
melalui sistem range gpc, menyelesaikan di kolom, juga dapat mengukur sifat
arus konstan sampel pada dasar
ukuran dalam solusi
spesifik dari molekul polimer
 Penjelasan bagian-bagian instrumen
 Pelarut dan wadah pelarut
Pelarut dalam GPC tergantung pada beberapa faktor.
 Pompa
Memompa polimer dalam larutan melalui sistem dengan laju alir konstan.
 Injektor
Memperkenalkan solusi polimer ke dalam fase gerak. Injektor harus mampu injeksi volume kecil (untuk
penentuan berat molekul) dan suntikan volume besar (jika mengumpulkan fraksi diinginkan).
 Set Kolom Secara efisien memisahkan komponen sampel dari satu sama lain.
Kolom yang lebih kecil (diameter 7,5 X 50 mm ) digunakan sebagai kolom pelindung
Kolom ukuran menengah ( 4,6 X 250 mm atau 7,5 X 300 mm ) digunakan untuk analisis dan
Kolom ukuran yang lebih besar ( 25X300 mm) digunakan untuk metode-metode preparasi.
 Detektor
Memantau pemisahan dan menanggapi komponen saat mereka mengelusi dari kolom.
 Peralatan pengolahan data otomatis
Secara otomatis menghitung, mencatat, dan melaporkan nilai numerik
BOBOT MOLEKUL DAN
SIFAT PENYAMAKAN
TANNIN
FRAKSI-FRAKSI DARI KULIT
POHON MANGIUM
ACACIA
 Abstrak

Kulit kayu Acacia mangium dihancurkan dan diekstraksi dengan larutan

aseton, dan ekstraknya kemudian degreased oleh petroleum eter. Larutan
degreased diekstraksi oleh dietil eter dan etil asetat berturut-turut. Dengan
cara ini, tanin dari A. mangium dibagi sebagai fraksi dietil eter, etil asetat
fraksi, dan fraksi air, masing-masing. Berat molekul tannin ini diukur dengan
gel kromatografi permeasi (GPC), dan ukuran partikel tannin diperiksa oleh
Zetasizer ZS instrumen. Hasil penelitian menunjukkan bahwa fraksi eter terdiri
dari molekul ukuran terkecil dengan berat molekul rata-rata 415 Da,
memiliki kemampuan penyamakan yang lebih lemah tetapi tingkat
penetrasi cepat. Itu berat molekul fraksi etil asetat adalah 1788 Da, dan itu
menunjukkan kemampuan penyamakan yang signifikan. Untuk fraksi air,
berat molekul 2808 Da dengan kemampuan penyamakan yang lebih baik,
dan partikel terbesar ukuran ditunjukkan di tannin. Stabilitas termal dari
bubuk dan kulit sapi menyembunyikan kecokelatan ini tanin adalah
sebagai berikut: Fraksi air> fraksi etil asetat> fraksi dietil eter; penetrasi
adalah: fraksi dietil eter> fraksi etil asetat> fraksi air. Hasil ini bisa
menyediakan a referensi berharga untuk penggunaan tanin A. mangium.
 PROSEDUR KERJA

Kulit kayu mangium dikeringkan dan dihancurkan menjadi ukuran 1,0 hingga 2,0 mm untuk
ekstraksi.

3 liter penyari yaitu aseton dan air (7: 3, v/v) digunakan untuk mengekstraksi 1 kg kulit
mangium pada suhu 20 ° C.

Penyari (aseton dan air) diganti setiap 48 jam dan kemudian disimpan di tempat gelap

Hasil ekstraksi direduksi dengan petroleum eter, dan kemudian diekstraksi dengan dietil eter
dan etil asetat berturut-turut.

Setelah tekanan distilasi berkurang dan pengeringan beku, 223,18 g ekstraksi kering diperoleh
termasuk 145,20 g fraksi air (65% untuk ekstraksi total), 74,33 g fraksi etil asetat (33% untuk
total ekstraksi), dan 3,56 g fraksi dietil eter (2% untuk total ekstraksi).
Distribusi berat molekul dan ukuran
partikel tanin
 Satu miligram tanin dilarutkan dalam 1 ml tetrahidrofuran, dan dianalisis dengan kromatografi permeasi gel (GPC).
 A-150 ALC / GPC instrumen (Waters) dilengkapi dengan detektor indeks bias diferensial, dan kombinasi μ-Styrage
Kolom GPC (10, 50, 100 dan 1000 nm) digunakan untuk mengukur berat molekul tanin.
 Tetrahidrofuran (THF) sebagai fase gerak dipompa ke kolom pada laju aliran 1.0 ml / menit, 150 bar pada 20 ° C.
 Massa molar kurva standar diperoleh dengan menggunakan polistiren monodispersi sebagai sampel standar, dan
persamaan kurva standar adalah Y = 11.451-0.3767X (R² = 0.9975), yang menunjukkan linear yang baik korelasi.
 Fraksi dietil eter digunakan sebagai kontrol untuk menguji keakuratan eksperimen GPC selama 5 kali.
 Standar deviasi data kurang dari 5,17, dan standar relatif penyimpangan berada di bawah 0,90%, menunjukkan
tes GPC yang sangat akurat.
 Dua gram tanin dilarutkan dalam aseton / air (7: 3, v: v), dan ditambahkan hingga 10 ml larutan air aseton (7: 3, v:
v).
 Campuran disaring dengan filter Millipore 450 nm dan ditransfer ke dalam sampel sel.
 Ukuran partikel tannin ini diuji menggunakan Zetasizer Nano ZS-series instrument (Malvern) pada suhu 25 ° C.
 Daya serap dan kapasitas
pengikatan dengan bubuk serbuk

2,00 g serbuk cuka kering

direndam dengan 25 ml
5 ml larutan air aseton air suling dalam labu
dikeringkan pada 120 berbentuk kerucut selama
1,50 g tanin dilarutkan 4 jam dan 25 ml bahan
° C dan ditimbang
dalam larutan 30 ml penyamakan
(M0); 25 ml lainnya ditambahkan dan
aseton / air (7: 3, v: v)
digunakan sebagai disimpan kedalam
agen penyamakan inkubator pengocok
dengan rotasi 120r/ menit
(20°C) selama 24 jam

10 ml filtrat
dikeringkan pada 120
Kemudian campuran
° C dan ditimbang.
itu disaring
Sementara itu bubuk
yang lain dikumpulkan
 KONDISI GPC

Distribusi bobot molekul ditentukan dengan

kromatografi gel permeasi (Agilent 1260, America) yang
terdiri dari pompa pelarut, injektor sampel, thermostatted
column compartemen (TCC) dan detektor index bias. GPC
dilakukan dengan menggunakan kolom kombinasi μ-
Styrage Kolom GPC (10, 50, 100 dan 1000 nm) yang
dihubungkan secara serial. Fase gerak yang digunakan
adalah tetrahidrofuran.
Hasil dan Pembahasan
Distribusi Berat Molekul dari Tanin

Fraksi Massa derajat Ukuran

molekul polimerisasi partikel
Mn (Da) rata-rata
Diethyl eter 415 1,4 64,11
Ethyl Asetat 1788 6,2 128,7
Air 2808 9,7 282,9

Ini menunjukkan bahwa AMT dapat dipisahkan

melalui beberapa pelarut organik yang berbeda
dengan polaritas yang berbeda. Juga, harus ada
beberapa hubungan antara berat molekul tanin
dan kapasitas Tanin
 Gambar di atas adalah: Distribusi berat molekul dari tanin.
Ada distribusi sempit mulai dari 200 hingga 600 Da untuk fraksi dietil eter.
Sebaliknya, untuk fraksi etil asetat dan fraksi air, ada distribusi yang lebih luas mulai
dari 500 hingga 2500 Da dan 800 hingga 3800 Da masing-masing. Ini menunjukkan
bahwa ada beberapa tumpang tindih antara fraksi ini.
Sebagai langkah pertama untuk menentukan kemampuan Tanin
dengan fraksi yang berbeda, diuji terlebih dahulu kemampuan serap
dan kemampuan mengikat tanninnya.
Kemampuan sorptif didefinisikan sebagai kemampuan sejumlah
tanin untuk terikat dengan serbuk tersembunyi sedangkan
kemampuan mengikat adalah kemampuan tanin untuk
dikombinasikan secara ireversibel dengan kolagen. Hasil dari tes ini
dapat digunakan untuk menilai kemampuan tanin dari fraksi yang
berbeda.

Kemampuan Fraksi Diethyl Fraksi Ethyl Fraksi Air

Ether Asetat
Kemampuan 32 63 72
Serap
Kemampuan 11 47 66
mengikat

Tabel diatas menunjukkan bahwa fraksi air memiliki sifat terbaik dalam hal pengikatan
dan serapan. Sebaliknya, fraksi dietil eter menunjukkan nilai minimum untuk kedua
properti. Ini sama dengan urutan Mn. Korelasi positif antara Mn dan kemampuan
mengikat dan kemampuan sorptive diamati. Artinya, semakin tinggi Mn tanin, semakin
kuat kemampuan taninnya
Penetrasi dan stabilitas termal

Gambar diatas menunjukkan waktu penetrasi dengan tingkat penetrasi tanin yang
berbeda. Untuk fraksi air, waktu penetrasi adalah yang terpanjang, dengan waktu
sampai 96 jam untuk ukuran partikel terbesarnya dalam larutan. Sebaliknya, fraksi
dietil eter dengan ukuran partikel terkecil menembus cepat, dan hanya 36 jam
diperlukan untuk penetrasi lengkap. Sebaliknya, untuk fraksi etil asetat dengan ukuran
partikel sedang, waktu penetrasinya adalah 56 jam antara fraksi dietil eter dan fraksi
air
 Kesimpulan

Adapun kesimpulan yang diperoleh yaitu, AMT (A. manguim tannin)

dapat dipisahkan dengan fraksi yang berbeda melalui beberapa pelarut
organik yang berbeda dengan polaritas yang berbeda dan fraksi yang
terpisah memiliki sifat yang berbeda.
1. Ada korelasi positif antara Mn (berat molekul) dan kemampuan tanin.
Secara umum, semakin tinggi berat molekul tanin, semakin kuat kemampuan
taninnya.
2. Fraksi eter memiliki Mn 415 Da untuk ukuran terkecil, dan memiliki
kemampuan tanin yang lebih lemah tetapi tingkat penetrasi tercepat.
3. Berat molekul fraksi etil asetat adalah 1788 Da, dan itu menunjukkan
kemampuan tanin yang signifikan.
4. Untuk fraksi air, berat molekul adalah 2808 Da dan memiliki ukuran partikel
terbesar, sehingga dinilai memiliki kemampuan tanin terbaik.
 SEKIAN DAN
TERIMA KASIH