CURSO BIOLOGÍA CELULAR

MITOCONDRIAS

Dr. Alejandro Roth. 2008

 Mitocondrias en 4 puntos
1. Son organelos característicos de las células eucarióticas, y se postula que son
resultado de un evento endosimbiótico.

2. En ellas se produce una serie de reacciones de óxido-reducción cuya energía

libre es utilizada para la síntesis de ATP.

3. En las células aeróbicas, el piruvato formado en la glicólisis (anaeróbica) es

transportado a la mitocondria donde es oxidado por el O2 a CO2.

4. Estas reacciones de oxido-reducción generan una diferencia en la concentración de

protones entre el interior y el exterior de la membrana interna de las
mitocondrias. El transporte de los protones a favor de su gradiente de
concentración (∆G<<0) permite acoplar fosfato a ADP, generando el grueso del
ATP producido por la conversión de glucosa a CO2.
Carácterísticas probables de
los protoeucariontes
1. Células Depredadoras: 2
• Sin pared celular, por lo tanto, capaces
de fagocitar.
• Gran Tamaño,
• Citoesqueleto
• Núcleo protegido (de las presas y de las 1
enzimas digestivas).

Carácterísticas probables de
las protomitocondrias

1. ¿Parásitos intracelulares? Poco probable

debido a su eficiente metabolismo.
2. Cadena transportadora de H+ en la
membrana. Probablemente asociada ya
a la generación de energía, pero
desarrollada inicialmente para…
3. Sin núcleo definido.
Hipótesis alternativas que describen el origen de
las células eucariontes.
1. Fusión de un Archaeobacterio metanogénico
(huesped que requiere H) con Proteobacterium
(simbionte productor de hidrógeno)
2. Eucarionte amitocondrial producido pot la fusión de
Archaeobacterio con un Proteobacterium, adqusición de
mitocondrias por endosymbiosis con un alpha-
Proteobacterium.
Gray et al. (1999); Science 283, 1476
 Organización morfofuncional

Las mitocondrias poseen dos membranas fosfolipídicas que definen el

espacio intermembranas y la matriz.

Origen bacteriano:
• Genoma Mitocondrial: Codifica 2
rARN, 22 tARN y 13 polipéptidos
•Ribosomas: carácterísticas
mixtas
•Síntesis protéica se inicia en N-
fornil-Metionina (igual q’
bacterias)

¿Dónde están los demás

genes?

ADN mitocondrial
 Mitocondrias de crestas Laminares

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Mitocondrias de crestas tubulares.

Glándula suprarrenal
http://www.drjastrow.de/EMAtlasE.html Reconstrucción de tomografía de mitocondrias
con crestas laminares. Tejido: grasa parda.
Perkins et al (1998). J. Bioenergetics and Biomembranes, 30, 431-442.
Organización morfofuncional

Membrana externa: contiene proteínas

integrales: enzimas (i.e. monoamino oxidasa y
canales acuosos débilmente selectivos a
aniones (VDACs) y permeables a moléculas
con PMs hasta 4 o 5 KDa. Canales
translocadores de proteínas (TOM)

Membrana interna: Plegada formando las

crestas mitocondriales. Contiene: lípidos
30% ( PC, PE, cardiolipina) y proteínas
integrales (70%): complejo
multienzimático de la cadena
respiratoria, ATPasa F0F1 o ATP sintetasa,
transportadores y canales iónicos. Canales
translocadores de proteínas (TIM)

Matriz mitocondrial: contiene enzimas, que

participan en la oxidación de piruvato y
ácidos grasos y las del ciclo del ácido
cítrico. Además, DNA mitocondrial, ribosomas,
tRNA y enzimas para la expresión de los genes Cardiolipina, difosfatidilglicerol
mitocondriales. (membrana interna)
 Las mitocondrias son organelos móviles y activos

Movimiento: Las mitocondrias no son organelos sésiles. Están asociados al citoesqueleto y

responden a estímulos.

División: ¿qué forma tiene una mitocondria? Estamos acostumbrados a una visión estática,
sin embargo, las mitocondrias forman retículos mitocondriales o se dividen en múltiples
organelos.

Imágenes de Alberts et al.

MBC, 2008
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Mitocondrias en movimiento por sobre citoesqueleto de microtúbulos. Células

H9c2 expresan tubulinaGFP, con las mitocondrias marcadas con mitoDsRed.
Yi et al, 2004. JCB, Volume 167, Number 4, 661-672
EYFP (enhanced yellow fluorescent protein) con secuencia de de
destinamiento a mitocondrias de la SubU VIII de la Citocromo C. SYTOX
Orange (Núcleo) y Falloidina-Alexa Fluor 350.

Michael W. Davidson , Florida State University

 Reacciones químicas en la mitocondria
Hay tres grupos de reacciones que ocurren en la membrana interna y la matriz:
1- Oxidación del piruvato o ácidos grasos a CO2 acoplada a la reducción de los compuestos
portadores de electrones NAD+ y FAD a NADH y FADH2.

2- Transferencia de electrones desde el NADH y FADH2 al O2: ocurren en la membrana

interna y están acopladas al transporte de protones y a la generación de una diferencia de
potencial electroquímico de H+ a través de dicha membrana .

3- Captura de la energía almacenada en el gradiente electroquímico de protones para la

síntesis de ATP por el complejo ATPasa F0F1

H+
H+ e- e- H+
FADH2

H+ H+
H+
Lodish et al. 2004
El ATP es un compuesto intermediario clave en una serie de procesos bioquímicos
celulares en los cuales se hidroliza.

ATP ADP + Pi (HPO4-2)

La energía libre de hidrólisis Gh del ATP es de aprox. 12 kcal/mol. De esta

energía, las reacciones más eficientes usan aprox. 7 kcal/mol. El resto, aprox. 5
kcal/mol, se libera al medio en forma de calor.
Estructuras del NAD y del FAD en sus formas oxidadas y reducidas
 Transporte de sustratos al interior de la mitocondria:
piruvato y Acil-CoA-de-AcGrasos

+ 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi

+ 2 NADH +
2
2 H+ + 2 ATP + 2 H2O
 Activación: de piruvato a Acetil-CoA,

Las mitocondrias pueden usar piruvato (CH3-CO-COO-) o ácidos grasos como combustible,
para formar la importante molécula portadora activada: acetil CoA.

El piruvato generado durante la glicólisis es transportado a través de las membranas

mitocondriales a la matriz. Allí reacciona con la coenzima A para formar acetil CoA, NADH
y CO2 en una reacción catalizada por el complejo piruvato deshidrogenasa.
complejo piruvato deshidrogenasa
 Fuente de energía en las mitocondrias:
Oxidación mitocondrial de ácidos grasos

En el citosol los ácidos grasos libres

son esterificados a la coenzima A
para formar acil-CoA en una
reacción exergónica acoplada a la
hidrólisis de ATP a AMP y PPi.

Las moléculas de acil-CoA se

transportan a la mitocondria donde
son oxidadas a acetil CoA y
moléculas de acil CoA acortadas en
dos átomos de carbono (n-2).

Al mismo tiempo una molécula de

NAD+ es reducida a NADH y una de
FAD a FADH2.
 Ciclo del ácido cítrico
El paso final de la oxidación de los
carbohidratos y lípidos se produce en el
ciclo del ácido cítrico o ciclo de Krebs.
Reacciones por enzimas en la matriz
mitocondrial. Sustrato fundamental es el
acetil CoA.
Primero, un residuo acetilo del acetil CoA
se condensa con una molécula de
oxaloacetato para dar citrato.
Luego, a través de una secuencia de
reacciones (etapas 2 a 8) cada molécula
de citrato es convertida en oxaloacetato
perdiendo 2 moléculas de CO2 en el
proceso.
En el ciclo, cuatro pares de electrones
son removidos de los átomos de
carbono: tres pares de e- son
transferidos a tres moléculas de NAD+
para formar 3NADH + 3H+ y un par es
transferido al aceptor FAD para formar
FADH2.
 Ciclo del ácido cítrico

ATP formado =?
 Fosforilación oxidativa

La fosforilación oxidativa es el proceso en cual se forma ATP como resultado de la

transferencia de electrones desde el NADH o FADH2 al O2 por medio de una serie de
transportadores de electrones en la membrana interna mitocondrial.

Las reacciones de la vía glicolítica y del ciclo de Krebs producen la conversión de

1 molécula de glucosa en 6 de CO2 y la reducción de 10 NAD+ a 10 NADH y 2 FAD a
2 FADH2.

http://www.nature.com/nrg/journal/v2/n5/ani
mation/nrg0501_342a_swf_MEDIA1.html
 Fosforilación oxidativa

El NADH y el FADH2 transfieren electrones a la cadena respiratoria ubicada en la

membrana interna mitocondrial (MIM) constituida por tres grandes complejos
enzimáticos:
el complejo I NADH deshidrogenasa (NADH-CoQ reductasa, 880 kD) , el complejo III
citocromo b-c1 (CoQ-citocromo c reductasa) y el complejo IV citocromo c oxidasa.

proteína soluble

coenzima Q
 Fosforilación oxidativa
soluble protein

Cada uno de estos complejos actúa

como una bomba de protones
impulsada por el transporte de
electrones. La pérdida de electrones
regenera las formas oxidadas de
NAD+ y FAD y las formas reducidas
coenzima Q (Q)
del aceptor. Los electrones son
finalmente transferidos al O2.

Los G de estas reacciones son muy

negativos, indicando éstas son
fuertemente exergónicas.

Al pasar electrones de una molécula

transportadora a la otra la energía
liberada es usada para bombear
protones al espacio intermembranas,
generándose una diferencia de
potencial electroquímico de protones
(μH+) a través de la membrana
interna.
 Síntesis quimiosmótica de ATP

La síntesis de ATP se realiza utilizando la energía almacenada en forma de gradiente

electroquímico de protones a través de la membrana interna, vía la ATPasa F0F1.

Este mecanismo, de un acoplamiento quimiosmótico fue propuesto por Peter Mitchell en

1961, hipótesis que no fue aceptada al comienzo pero después fue comprobada
experimentalmente. P. Mitchell recibió por ello el premio Nobel en 1978.

-120 mV
V
H+
H+
H+ H+

Los 2 componentes del gradiente electroquímico de protones

 +

Síntesis de ATP

La ATPasa F0F1 funciona esencialmente

como un motor molecular.
Están formadas por dos dominios: F1 y
F0

El complejo F0F1 o ATPasa F0F1 acopla el

flujo de protones a favor de su gradiente
a la síntesis de ATP.
Actúa como una ATP sintetasa. (3
H+s/ATP)

F0 contiene tres tipos de subunidades a,

byc.
F1 está compuesto de 5 polipéptidos
diferentes: , , ,  y ,
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ATPasas de membrana tipo F
Están presentes en las membranas plasmáticas de las bacterias, en la membrana tilacoide de
cloroplastos y en la membrana interna de las mitocondrias.
Catalizan la reacción de síntesis de ATP (G > 0) a partir de ADP y Pi.
La energía proviene del gradiente de potencial electroquímico de protones (H+) a través de la
membrana generado por la actividad de la cadena transportadora de electrones. Es decir,
actúan como ATP sintetasas.
Al igual que las ATPasas tipo V están formadas por dos dominios: F1 y F0
El complejo integral F0 contiene tres tipos de subunidades a, b y c: (a1b2c10 en bacterias) y
contiene el canal a través del que se transportan los protones. El complejo F1 está compuesto
de 5 polipéptidos diferentes :α,β, y γ.

ADP + Pi ATP

lumen mitocondria

H+ H+ H+
Lodish et al. 2000 H+ H+ espacio inntermembranas
ATPasas de membrana tipo V
Están presentes en las membranas de las vacuolas y en organelos como lisosomas,
retículo endoplásmico, cisternas del aparato de Golgi y vesículas cubiertas, bombean
electrogenicamente H+ desde el citosol al lumen del organelo.
Están compuestas de dos partes. Una parte hidrofóbica integral en la membrana (V0)
formada por varias copias del proteolípido c y una de a y que constituye la vía de
transporte de protones. La forman siete tipos de subunidades diferentes con un PM total
de entre 400 y 500 kDa
Una cabeza (V1) hidrofílica que está orientada hacia el citoplasma y donde se realiza la
hidrólisis del ATP. + H
H+ lumen organelo
H+

citosol

H+

Lodish et al. 2000

 Bombas iónicas o ATPasas transportadoras de iones

En las membranas celulares existen proteínas integrales bombas iónicas o ATPasas

transportadoras de iones que conducen activamente iones usando como fuente de energía
el Gq de hidrólisis del ATP:
Se encuentran en las membranas plasmáticas de células animales, vegetales y bacterias y en
membranas de organelos (mitocondrias, cloroplastos, vacuolas, endosomas, etc.).

Existen tres tipos de bombas iónicas: ATPasas de membrana tipo P, tipo V y Tipo F, que se
diferencian por su estructura molecular así como por el mecanismo de transporte activo.

ATPasas de membrana tipo P

Están presentes en las membranas plasmáticas de células eucarióticas y en organelos como
retículo endoplásmico, aparato de Golgi. Están formadas por una o dos cadenas polipeptídicas y
durante el ciclo de transporte forman un intermediario fosforilado. El modelo más aceptado del
mecanismo catalítico de estas ATPasas tipo P es el siguiente :
Mg2+
Ci+ + E1 E1Ci+ + ATP E1Ci+ATP E1Ci+Pi + ADP

E1Ci+Pi E2Ci+Pi E2 + Ce+ + Pi

E2 E1
 Esquema del ciclo de transporte de Na+ y K+ por la bomba de sodio

Es la más estudiada de las bombas tipo P. Está presente en las MPs de las células animales y mantiene
los gradientes de concentración de Na+ y K+ entre la célula y el medio extracelular.
Transporta 3 iones Na+ hacia el espacio extracelular y 2 K+ hacia el citosol utilizando una molécula de
ATP por cada ciclo de transporte.

K+ release
(intracellular)

Lodish et al. 2004

Transporte de metabolitos en la mitocondria
Ca2+
La energía del gradiente electroquímico de
protones también se utiliza para el transporte
activo a través de la MIM de una serie de
metabolitos que participan en las reacciones que
ocurren en la matriz mitocondrial, en co-
transporte o contra-transporte con H+.

El transporte de PO4-3 y piruvato hacia la matriz

es mediado por transportadores que acoplan la
entrada de fosfato y piruvato con el flujo de H+ a
favor de su gradiente electroquímico.

La entrada de ADP a la matriz es mediada por un

contratransportador, acoplada a la salida de ATP,
en un proceso impulsado por el gradiente de
potencial. El potencial de membrana impulsa
también la acumulación de Ca2+.
 Comparación de la combustión con las oxidaciones biológicas

(A) Si el hidrógeno se quemara la mayor parte de la energía se liberaría como calor.

(B) En contraste, en las oxidaciones biológicas la energía liberada es almacenada en una
forma útil para la célula por medio de la cadena transportadora de electrones.
El resto de la energía de oxidación es liberada como calor.
 Resumen de la fosforilación oxidativa en mitocondrias

http://www.nature.com/nrg/journal/v2/n5/animation/nrg0501_342a_swf_MEDIA1.html
 Enfermedades Mitocondriales

Fallas de mecanismos mitocondriales se han observado en diversas patologías:

Cáncer, infertilidad, diabetes, enfermedades cardiovasculares, ceguera, sordera, falla renal,
fallas hepáticas, migrañas, etc..

La capacidad de generar radicales libres las relacionan con envejecimiento y

enfermedades neurodegenerativas.

Las primeras enfermedades mitocondriales fueron descritas en 1988

Cuando son enfermedades genéticas son difíciles de diagnosticar por que:

• La herencia puede ser materna si la falla está en el genoma mitocondrial, pero entra a jugar
el número de mitocondrias mutantes (los individuos presentan diferentes niveles de afección
en diferentes lugares del cuerpo).
• La mutación puede ser autosomal (estár localizada en un gen nuclear que codifica una
proteína mitocondrial.
• La mutación puede surgir espontáneamente en un individuo
 Dudas sobre las Mitocondrias
• ¿Qué función cumple la
presencia de 2 membranas?
• ¿Cuál de las dos membranas
es crucial para la función de las
mitocondrias?
• ¿Cómo se obtiene la energía
para sintetizar ATP?
• ¿qué es una gradiente
electroquímica?
• ¿Por qué presentan crestas
mitocondriales? ¿qué formas
tienen?
• ¿Cómo se hace una tomografía
de una mitocondria en base a
microscopía electrónica?
• ¿cuáles son los posibles
orígenes de las mitocondrias?
¿qué evidencia tenemos de
esto?
• ¿Como se define simbiosis?
• ¿Cuál es la función de la
cardiolipina?
• ¿qué tipo de proteína es la ATP
sintasa?
• ¿En que se diferencia la ATP
sintasa de la Na/K ATPasa?
• ¿Qué enfermedades
mitocondriales pueden afectar
los tejidos de manera
diferencial?
 + 2 NADH +
2
2 H+ + 2 ATP + 2 H2O

+ 2 NAD+ + 2 ADP + 2 Pi