UNIVERSIDAD ARTURO MICHELENA

FACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA DE PATOLOGIA MEDICA
HISTOTECNOLOGIA I.

INCLUSION

Profesor: Lcdo. Marcos Zapata.

INCLUSION:
La inclusión es el proceso en el cual el tejido es rodeado de una
sustancia liquida la cual mediante alcanzar su punto de fusión tomara
una consistencia firme, con la finalidad de conferirle soporte al tejido
que se de sea seccionar al micrótomo.

La parafina es uno de los medios de inclusión mas utilizados en

histotecnólogia, sin embargo debemos tener en mente los demás
medios de inclusión existentes en esta área.
MEDIOS DE INCLUSION:
Hidrofilicos:
• Gelatina.
• O.C.T (Compuesto de temperatura Óptima).

Hidrofóbicos:
• Parafina.
• Celoidina.
 Gelatina:
Se utiliza para la inclusión de piezas grandes y cuando se requieren cortes
en congelación. Es soluble en agua, por lo que no es preciso deshidratar el
tejido; sin embargo el fijador debe ser completamente eliminado del
tejido. La gelatina tiene un punto de fusión bajo, de esta manera no sufren
con el calentamiento. La inclusión se hace en infiltraciones sucesivas de
tipo crecientes a 37 °C. Produce escasa retracción en los tejidos.
O.C.T (Compuesto de temperatura Óptima)

Es un medio hidrosoluble usado rutinariamente en secciones por

congelación. Es un medio sintético que favorece la realización de cortes en
Criostato a temperaturas muy bajas (-20ºC). Esta característica permite la
inclusión de la biopsia sin fijación previa, ya que a esa temperatura se
detienen los procesos postmortem del espécimen y la hace apta para
estudios de lípidos, enzimas e inmunohistoquímicos.
Parafina

La parafina es una mezcla de hidrocarburos sólidos derivados del petróleo.

La parafina es blanca o Incolora, más o menos translucida, inodora y hay
varias. Cada una con un punto de fusión diferente:
Las parafinas más blandas tienen un punto de fusión alrededor de los 45 °C y
funcionan mejor con tejidos blandos. Las parafinas duras se derriten cerca
de los 60°C y son las mejores para tejidos duros tales como el tejido óseo y
fibroso denso.
Celoidina:

Es una forma purificada de nitrocelulosa, que se obtiene tratando celulosa con

ácidos sulfúrico y nítrico. Se recibe como material algodonoso que se ha llamado
también “algodón pólvora”. La celoidina no requiere calor durante ninguno de los
pasos del procesamiento y por lo tanto se recomienda para la infiltración e
inclusión de especímenes que puedan ser afectados por soluciones caliente.
• Entre sus principales desventajas son que consume tiempo de 7 a 10 días para
infiltrar el espécimen, atrae la humedad muy rápidamente, es extremadamente
difícil obtener secciones de menos de 10 micras.
• Sus principales ventajas son que causa menos contracción y endurecimiento de
los tejidos que la parafina, excelente para el estudio de embriones y
especímenes grandes.
MEDIOS DE INCLUSIÓN EN MICROSCOPIA ELECTRÓNICA

Para la observación de la ultraestructura celular es necesario hacer secciones

de tejido muy delgadas, del orden de nanómetros, denominadas ultrafinas, y
usar un microscopio electrónico de transmisión. La obtención de secciones
ultrafinas implica que tenemos que endurecer enormemente el tejido.
TIPOS DE RECINAS

Las resinas para inclusión de microscopia electrónica son las

siguientes:

•Para incluir a bajas temperaturas: Glicol metacrilato o 2-hidroxietil

metacrilato, Lowicryl K4M, Lowicryl HM20.

• No miscibles en agua: Epoxy resinas: Epon 812, Araldita,

Maraglas, Quetol 651, DER 334, DER 332 y Spurr.

• Miscibles en agua: LR-White.

INCLUSION PARA MICROSCOPIA ELECTRONICA
MATERIALES NECESARIOS PARA LA INCLUSION

• Moldes de inclusión: Se usan para solidificar la parafina liquida y

convertirla en bloques. Los hay de varias clases. Los moldes de acero
inoxidable son tal vez los que más se usan y son considerados como
ideales para propósitos relacionados con el proceso de inclusión.
Moldes plásticos: Son desechables, eliminándose así la necesidad de
la limpieza periódica. Son poco profundos y requieren una cajilla de
inclusión o un anillo que vaya con cada molde para sostener los
bloques durante el proceso de corte.
 MATERIALES NECESARIOS PARA LA INCLUSION

Piezas en L: Son dos piezas en forma de letra L que se colocan sobre una
superficie plana y se pueden mover para variar el tamaño del molde de
acuerdo al tamaño del tejido.

Unidades de inclusión múltiple: Permiten la inclusión simultánea de varios

bloques. Estas unidades constan de una serie de bandas conectadas en una
bandeja.
EQUIPOS PARA LA INCLUSIÓN

Centros de inclusión: Son sistemas multifuncionales que usualmente

incluyen un proveedor de parafina, un tanque para mantener los
especímenes, una placa de temperatura tibia para orientar el espécimen
en la parafina derretida y una placa fría para transformar la parafina
derretida en un bloque sólido luego de que el espécimen haya sido
orientado. Estos centros de inclusión pueden ser adquiridos como
unidades modulares
ORIENTACIÓN DEL ESPÉCIMEN

La calidad y utilidad final de una sección de tejido depende de la ejecución

impecable de cada uno de los pasos del procesamiento; cada paso, a su vez,
dependerá completamente del paso anterior si se desea calidad óptima. Aún con
fijación adecuada, procesamiento impecable, y microtomía profesional, una
sección de tejido puede ser destruida, si la inclusión, la localización y la orientación
no son adecuadas.
Estructuras Tubulares

Estructuras tubulares tales como vaso deferente, venas, arterias y oviductos

deben ser incluidas en una forma tal que la cuchilla corte a través de la luz tubular.
La orientación debería ser tan vertical como sea posible. La cuchilla, entonces,
deberá hacer los cortes en una forma que sea perpendicular al eje longitudinal del
tubo.
Superficies Epiteliales

Aquellos tejidos que tienen una superficie epitelial, como la piel, el intestino, la
vesícula biliar, la vejiga urinaria y el útero, deben ser colocados en forma tal que el
plano de sección pase a través de todas las capas del tejido. La superficie epitelial debe
colocarse en la parte más alta del bloque para que así sea la última en ser cortada. El
acto de llegar al epitelio al final de la moción de corte va a minimizar la presión que
causa de distorsión por la capa epitelial. Por ejemplo, el cortar de último la capa de
queratina reduce la compresión, los rasguños y las cortadas de las capas subcutáneas.
Múltiples Especímenes

Múltiples fragmentos de tejidos blandos y ganglios linfáticos deben ser colocados

uno junto al otro con suficiente espacio entre ellos. Si los tejidos se colocan uno
encima del otro, existe la posibilidad de que el tejido de abajo distorsione el tejido
que esta encima. La organización metódica de los tejidos hace que la lámina sea más
fácil de estudiar y que se vea más profesional que si los fragmentos se incluyen en
desorden.

Los tejidos rectangulares pequeños deben ser orientados con su eje longitudinal casi
paralelo al borde de la cuchilla para minimizar los pliegues y la distorsión causados
por presión.
Estructuras Quísticas
Después de la bisección, los quistes pequeños adoptan una forma de cúpula.
Por lo tanto, los quistes deben ser incluidos con la superficie de corte hacia
abajo para que así la cuchilla corte a través de todas las capas de la pared del
quiste. Hay que asegurarse de que la cúpula no atrape burbujas de aire.
Identificación de Márgenes y Superficies

Los tejidos que tienen los márgenes marcados con tinta china o con colorante deben
ser colocados en una forma tal que la tinta pueda verse en el borde de la sección. Si hay
secciones múltiples, estas deben ser incluidas con la tinta siempre mirando hacia el
mismo lado del bloque para que las láminas queden mejor organizadas y para facilitar
su estudio bajo el microscopio. La superficie que haya sido marcada con tinta china, es
la que debe ser incluida en forma opuesta a la superficie que se va a cortar con la
cuchilla. La tinta, entonces, no se va a ver en las secciones.