UJI NETRALISASI Uji netralisasi adalah pengujian serologi terhadap virus dengue yang paling spesifik dan sensitive. Protocol yang paling sering digunakan dalam laboratorium adalah uji penetralan reduksi plaque cairan serum. Pada umumnya titer penetralan antibody meningkat pada saat yang sama atau sedikit lebih lambat dai pada titer antibidi HI dan ELISA tetapi jauh lebih cepat daripada titer antibody CF dan betahan minimal selama 48 tahun. NT dapat digunakan untuk pembelajaran seroepidmiologi karena penetralan antibody besifat tahan lama. Pengujian ini tidak digunakan secara rutin oleh sebagian besar laboratorium Karena dibutuhkan biaya yang mahal, waktu yang lama, dan teknik yang sulit . Tes netralisasi ini berguna untuk : Menentukan titer zat anti netralisasi Menentukan tipe virus yang berhasil diisolasi
Contoh pemeriksaan virus polio :
Titrasi virus pada biakan jaringan Identifikasi virus yang diisolasi dalam biakan jaringan dengan tes netralisasi Cara titrasi virus pada biakan jaringan
Prinsip : virus bila ditanam pada biakan jaringan akan
menimbulkan CPE (cytopathogenic effect). Dicari pengenceran virus tertinggi yang menyebabkan CPE 50 % atau setengahnya dari biakan jaringan yang ditanami virus yang disebut 1 TCD50 (tissue culture dose)
Bahan : Biakan jaringan ginjal kera Larutan Hanks Suspensi virus Alat : Mat pipet Rak tabung Mikroskop
Cara kerja : Sediakan tabung-tabung biakan jaringan Periksa pertumbuhan selnya dengan mikroskop Cuci jaringan dengan Hanks Isi tiap tabung dengan 1-2 ml mediumnya (misalnya earles medium) Buat cairan dari suspensi-suspensi virus sebagai berikut : 10-1 10-2 10-3 10-4 dst dengan buffer fhosfat-Nacl 0,85 % PH 7,2 atau larutan Hanks Tanam tiap-tiap tabung cairan dengan 4 tabung dengan 0,1 ml Eramkan pada suhu 37oC selama 7-14 hari Sediakan 4 buah tabung kontrol yang tidak ditanami virus,dan dieramkan juga bersama-sama Setelah dieramkan periksa ada tidaknya CPE Hitung berapa 1 TCD50 Pembacaan : Pembacaan tes netralisasi ini dilihat ada tidaknya CPE, yaitu sel yang mula-mula berbentuk kumparan, kemudian berubah menjadi bulat berkelompok. Inti menjadi besar, struktur inti menjadi kasar dan sebagian inti kelihatan lebih gelap.
Cari nilai 1 TCD50 yaitu pengenceran virus tertinggi yag
masih menyebabkan CPE 50 % pada tabung yang ditanami virus. Maka untuk mencari nilai 1 TCD50 nya dihitung dengan cara Red dan Muench Perhitungan Red dan Muench :
10-7 0 4 0 8 0% Lanjutan 1 TCD50 = 10-5 + 10-80-20 = 10-5 + 10-0,5 = 10-5,5 Cara identifikasi virus yang baru diisolasi dalam biakan jaringan dengan tes netralisasi Prinsip : Mencampur antigen dan anti serum dengan kekuatan tertentu dalam volume daya anti serum untuk menetralisasi daya infeksi virusnya. Bahan : 1. Biakan jaringan ginjal kera 2. Larutan Hanks 3. Anti serum spesifik Alat : 1. Mat pipet 2. Rak tabung 3. Mikroskop Cara kerja : 1. Sediakan tabung-tabung biakan jaringan 2. Cuci dengan larutan hanks, dan berikan mediumnya 3. Serum spesifik diinaktifasi pada suhu 56oC selama 30 menit 4. Buat pengenceran serum dengan larutan Hanks (10-1, 10-2, dst) 5. Encerkan virus yang baru diisolasi hingga mengandung 100 TCD50 dengan larutan Hanks 6. Campur sama banyak serum dengan antigen 7. Encerkan campuran virus dan serum pada suhu 4oC selama 1 malam seatau pada suhu kamar selama 1 jam 8. Tanam tiap campuran virus serum ke dalam 4 buah tabung biakan jaringan masing-masing 0,2 ml 9. Eram serum tabung pada suhu 37oC selama 1-2 minggu 10. Periksa terjadinya CPE Pengamatan : Bila CPE oleh virus yang baru diisolasi tidak dapat dicegah oleh serum yang digunakan, maka virusnya harus di tes lagi terhadap serum yang lainnya. Bila CPE yang ditimbulkan oleh virus yang baru diisolasi dapat dicegah oleh serum spesifik (anti serum polio) maka virus tersebut adalah virus polio.
