INSTRUMEN ANALISIS UNTUK

STANDARISASI HERBAL

Rini Prastiwi
• Standarisasi memfokuskan analisis
kuantitatif satu senyawa marker saja dan
kadar total golongan metabolit sekunder
tertentu yang diperkirakan ikut
bertanggung jawab pada aktifitas
farmakologi
• Metabolomik : proses penentuan metabolit
sekunder atau mikromolekul BM antara
50-5000.
• Metabolomik sinonim dengan metabolite
profiling : penentuan metabolit-metabolit
dengan karakter tertentu terkait dengan
penyakit , respon pengobatan,
metabolisme obat, perlakuan kimiawi.
• Metabolomik harus terekam seteliti dan
setepat mungkin
• Pemilihan metode instrumentasi yang
sesuai untuk kriteria sensitivitas dan
selektifitas, dan dapat mengakomodasi
dan mendeteksi berbagai senyawa
dengan range BM rendah ke tinggi atau
sesuai dengan tujuan analisis
• Untuk analisis metabolomik metode yang
memenuhi syarat :
• GC-MS
• LC-MS
• NMR
 GC-MS
• Senyawa yang volatif dan senyawa yang bisa diderivatisasi
menjadi volatil bisa ditetapkan
• Keuntungan :
- Resulosi sangat baik, dan bisa untuk pemisahan antar
komponen
- Dibutuhkan sampel sedikit < 10 μl
- Cocok untuk analisis senyawa yang mengandung minyak
atsiri, membedakan asal simplisia berdasarkan intensitas
luas area dan kemunculan atau hilangnya puncak
komponen tertentu
- Baik untuk analisis komponen terpenoid dan beberapa
fenil propanoid
- Bisa digunakan untuk menetapkan kandungan metabolit
sekunder volatil total dalam komponen herbal
 – Untuk analisis sampel ditimbang dan
dilarutkan dalam solven yang cukup volatil
– Analisis mutu minyak atsiri harus dilakukan
ekstraksi terlebih dahulu melalui destilasi
• Informasi yang diperoleh dengan cara ini :
– Puncak-puncak dengan luas area tertentu
dan waktu tinggal (RT)
– BM
– Pola fragmentasi elemen-elemen beserta
berat ion
 LC-MS
• Memiliki ring kadar yang lebih lebar
dibanding GC_MS
• Digunakan untuk memisahkan hampir
semua golongan metabolit sekunder
• Untuk analisis metabolit mikromolekul,
menggunakan sis tem terbalik
– Fase diam : non polar
– Fase gerak : polar (air, asetonitril, metanol,
pengasaman dengan asam formiat dan asam
fosfat untuk menaikkan pemisahan)
• Keuntungan: jumlah sampel yang
dibutuhkan sangat kecil dan cukup
dilarutkan dalam solven orgnik tertentu
• Kerugian :
– Sistem fase gerak isokratik tidak cukup, tapi
dapat diatasi dengan mengoprasikan LC
dengan kombinasi sistem gradien-isokratik-
gradien dan seterusnya sehingga setiap
komponen akan keluar dari kolom saling
terpisah dan masuk ke MS
• Informasi yang diperoleh :
- Sama dengan metode GC_MS
- Puncak dengan luas area tertentu
- RT dan BM
Contoh spektra LC-MS
Penggunaan CG_MS dan LC-MS
(sumber Halket et al., 2004)
 KCKT
• KCKT lebih banyak digunakan untuk keperluan identifikasi (analisis
kualitatif), kecuali jika KCKT ini dihubungkan dengan sebuah
spektrometri massa (Mass Spectrometer (MS)), maka
penggunaannya akan lebih memungkinkan dalam analisis
kuantitatif.
• Secara umum KCKT digunakan dalam kondisi-kondisi berikut:
- Pemisahan berbagai senyawa organik maupun anorganik, ataupun
spesimen biologis
- Analisis ketidakmurnian (impurities)
- Analisis senyawa-senyawa yang tak mudah menguap (non-volatil)
- Penentuan molekul-molekul netral, ionik maupun zwitter ion
- Isolasi dan pemurnian senyawa
- Pemisahan senyawa-senyawa dengan struktur kimia yang mirip
- Pemisahan senyawa-senyawa dalam jumlah kecil (trace elements)
 NMR
• Keuntungan NMR tidak sekedar
mengetahui senyawa yang ada tetapi juga
memungkinkan untuk mengetahui analisis
kadar total secara langsung. Dengan
membandingkan intensitas standar,
biasanya TMS (Tetra Metil silan) tanpa
perlu kurva baku
• Kelemahan : adanya batas deteksi yang
rendah, biasanya 0,5 mg. Perlu preparasi
sehingga mencukupi jumlah untuk deteksi
 NMR
1. Analisa kualitatif
2. Analisa kuantitatif
Mg cuplikan =

Aa = area puncak dari larutan cuplikan

As = area puncak dari larutan standar
ns = jumlah proton pada standar
na = jumlah proton pada cuplikan
Ma = BM cuplikan
Ms = BM standar

3. Elusidasi struktur
4. Penentuan adanya zat-zat tambahan, gugus fungsional dan zat pengganggu
• NUWUN...