TEKNIK DIAGOSTIK

VIROLOGI
Jurusan Analis Kesehatan
Poltekkes Kemenkes Banjarmasin
2019
 SPESIMEN LAB.VIROLOGI
• Beberapa aturan praktis dlm pengelolaan spesimen di
laoratorium:
1. Antibodi virus biasanya tidak ada dalam serum sampai sekitar
10 hari setelah timbulnya gejala.
2. Untuk virus yang tidak diuji IgM spesifiknya, sampel akut
diambil sesegera mungkin setelah timbulnya gejala dan
spesimen kedua diambil 10 hari setelah timbulnya gejala, hal
ini memungkinkan untuk mendeteksi peningkatan antibodi
spesifik.
3. Virus yang menyebabkan ruam makulopapular (mis. Virus
campak) biasanya menghasilkan antibodi IgM spesifik dalam
beberapa hari setelah timbulnya ruam.
 SPESIMEN LAB.VIROLOGI…
4. Ketika mendiagnosis hepatitis akut, HBsAg akan hadir pada
awal gejala infeksi HBV, tetapi HAV IgM tidak terdeteksi
hingga setidaknya 5 hari setelah timbulnya gejala.
5. Jika mengirim spesimen untuk kultur virus, kirim dgn
menggunakan tranport medium virus. Jangan mengirimkan
dlm bentuk swab kering untuk pemeriksaan virus.
6. Spesimen darah EDTA lebih disukai untuk diagnosis
molekuler (akan tetapi semua perlu disesuaikan dgn pedoman
pemeriksaan yg dipegang oleh teknisi lab.)
 TEKNIK SEROLOGI
Prinsip Teknik Serologi
• Pengujian dapat bersifat kualitatif atau kuantitatif.
• Biasanya tes serologi yang dilakukan adalah dengan mendeteksi
keberadaan IgM atau IgG untuk membuat diagnosis.
• Jika diagnosis bergantung pada pendeteksian titer antibodi yang
meningkat atau tinggi, maka pengujian perlu mengukur tingkat
respons antibodi (kuantitatif).
• Antibodi 'Titer' dinyatakan sebagai kebalikan dari pengenceran
serum tertinggi di mana antibodi terdeteksi.
 TEKNIK SEROLOGI…
• Banyak tes kuantitatif telah dikembangkan dengan
mengeksploitasi fungsional sifat respons antibodi (mis. fiksasi
komplemen, hemaglutinasi, netralisasi tes).
• Semua teknik serologis yang mendeteksi antibodi didasarkan
pada prinsip penambahan antigen virus spesifik pada serum
pasien. Jika antibodi spesifik virus ada di serum maka itu akan
mengikat antigen membentuk kompleks antigen / antibodi.
• Sebuah sistem indikator (tergantung tekniknya) dapat digunakan
untuk mendeteksi apakah sebuah ikatan kompleks telah
terbentuk. Teknik-teknik ini dapat dibalik untuk mendeteksi
keberadaan antigen virus, seperti HBsAg dalam serum pasien.
UJI DIAGNOSTIK PADA TEKNIK SEROLOGI
 ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY (ELISA) /
ENZYME IMMUNOASSAY ASSAY (EIA)
• Ada beberapa variasi pada teknik tetapi langkah-langkah penting
ditunjukkan sbb:
1. Antigen menempel pada dasar mikrotiter well (fase padat).
2. Serum pasien ditambahkan ke mikrotiter well. Jika ada antibodi
spesifik dalam serum itu akan menempel pada antigen. Kelebihan
serum kemudian dicuci.
3. Antibodi anti-human yang terikat dengan enzim ditambahkan untuk
mengikat antibodi ini / kompleks antigen. Enzim yang berlebih dicuci
4. Substrat untuk enzim ditambahkan, perubahan warna menunjukkan
reaksi positif karena aksi (pada substrat) dari enzim yang telah terikat
pada kompleks antigen / antibodi.
 ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY
(ELISA) / ENZYME IMMUNOASSAY ASSAY (EIA)

• Perubahan warna pada ELISA dapat dideteksi dengan mata atau

diukur dalam spektrofotometer, dan intensitas warna dapat
menunjukkan berapa banyak antibodi yg ada dalam serum.
• Positif dan negatif kontrol ditambahkan ke uji untuk memastikan
kualitas sistem uji.
• ELISA memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang sangat tinggi (>
95%), beberapa bahkan mendekati 100%.
ENZYME-LINKED IMMUNOSORBENT ASSAY
(ELISA) / ENZYME IMMUNOASSAY ASSAY (EIA)
• Pengujian juga dapat dilakukan secara terbalik untuk
mendeteksi antigen virus hanya dengan melapisi fase
padat oleh antibodi (mono atau poliklonal) spesifik untuk
antigen yang akan diuji.
• Keuntungan ELISA adalah:
1.Dapat dilakukan dengan cepat, sebagian besar bisa
dilakukan dalam waktu 2-3 jam
2.Dapat dengan mudah diotomatisasi
3.Objektif - reaksi dapat dibaca dengan spektrofotometer.
 IMMUNOFLUORESCENCE TESTS (IFT)
• Tes ini menggunakan prinsip yang sama dengan ELISA, dimana
dapat digunakan untuk mendeteksi antibodi virus atau antigen
pada spesimen pasien.
• Namun, jika pada ELISA sistem detektor menggunakan enzim /
substrat, sedangkan IFT antibodi anti-human berlabel
fluorescein digunakan untuk mendeteksi reaksi positif, yang
muncul sebagai fluoresensi berwarna hijau apel di bawah
mikroskop cahaya.
• Tes imunofluoresensi juga merupakan tes serologis yang cepat,
tetapi kelemahannya adalah tes tersebut membutuhkan
interpretasi subyektif dan karenanya hasil bergantung pada
keahlian operator
IMMUNOFLUORESCENCE TESTS (IFT)

Tes antibodi
fluoresen
menunjukkan virus
gondong
LATEX AGGLUTINATION (LA)
• Di sini antigen atau antibodi diadsorpsi pada partikel
lateks dan reaksi positif ditunjukkan oleh aglutinasi
partikel.
COMPLEMENT FIXATION TEST (CFT)
• Tes ini didasarkan pada prinsip bahwa ketika kompleks
antigen / antibodi terbentuk, maka komplemen akan
mengikat kompleks shg tdk ada lagi komplemen bebas.
• Sel darah merah yang ditambahkan sebagai indikator.
• Tes fiksasi komplemen telah banyak digunakan di masa
lalu untuk membantu klinis diagnosa; Namun, karena
kompleksitas dan ketidakpekaan relatif, maka sekarang
sedang digantikan oleh tes yang lebih baru seperti ELISA
HAEMAGGLUTINATION (HA) &
HAEMAGGLUTINATION INHIBITION TESTS (HAI)
• Tes-tes ini untuk mendeteksi antibodi terhadap virus
(rubella, influenza) yang memiliki hemaglutinin antigen.
• Tes ini juga relatif tidak sensitif dan dapat memberikan
reaksi tidak spesifik, dan sebagian besar telah digantikan
oleh teknik yang lebih sensitif dan spesifik
NEUTRALIZATION TESTS (NT)
• Antibodi spesifik penetralisir virus, jika ada dalam serum,
akan menetralkan virus sehingga tidak dapat tumbuh
dalam kultur.
• Ini adalah teknik yang sangat spesifik tetapi tdk efosien
dan efektif sehingga perlu digantikan oleh teknik yang
lebih modern.
 WESTERN BLOT (WB)
• Protein virus spesifik ditransfer pada blotting paper dari suatu gel
(western blot).
• Pita antigen virus pada blotting paper berkembang warnanya jika
ada antibodi spesifik terhadap antigen dalam serum tersebut.
• Aktivitas enzim terikat digunakan untuk mendeteksi protein target
dan divisualisasikan dengan metode chemiluminescent atau
kromogenik.
• Keuntungan dari teknik ini adalah bahwa alat ini dapat
membedakan antibodi ygbdiarahkan melawan protein virus
spesifik dan karenanya teknik ini sangat spesifik.
WESTERN BLOT (WB)
TEKNIK MOLEKULER
• Teknik molekuler adalah teknik yang menggunakan
prinsip-prinsip biologi molekuler untuk mendeteksi genom
virus (RNA atau DNA). Penggunaan teknik ini sudah biasa
di virologi dan telah mengarah pada penemuan virus baru,
studi tentang resistensi virus, merancang obat antivirus
baru dan vaksin.
• Banyak digunakan di laboratorium diagnostik rutin untuk
membantu diagnosis virus.
 DETEKSI VIRUS
• Deteksi virus dalam sekresi pasien atau jaringan pasien
memberikan bukti langsung akan adanya infeksi saat ini atau
infeksi yang sedang berlangsung.
• Deteksi Ini bisa dengan:
1. Kultur virus (juga disebut sebagai kultur sel atau jaringan)
2. Mikroskop elektron - visualisasi partikel virus utuh
3. Deteksi antigen virus
4. Deteksi genom virus (RNA atau DNA) dengan teknik
molekuler.