Anda di halaman 1dari 27

NAMA­NAMA KELOMPOK 2 :

• ERNIKE KAFIAR
• LINDA TRI UTAMI
• RISDAYANTI 
PABUNTANG
• SAHRUL GUNAWAN
LATAR BELAKANG
 Spektrofotometri merupakan salah satu metode 
dalam kimia analisis yang digunakan untuk 
menentukan komposisi suatu sampel baik secara 
kuantitatif dan kualitatif yang didasarkan pada 
interaksi antara materi dengan cahaya. Sedangkan 
peralatan yang digunakan dalam spektrofometri 
disebut spektrofotometer.
 Para kimiawan telah lama menggunakan bantuan 
warna sebagai bantuan dalam mengenali zat­zat 
kimia. Spektrofotometri dapat dianggap sebagai 
suatu perluasan pemeriksaan visual yang dengan 
studi lebih mendalam dari absorpsi energi radiasi 
oleh macam­macam zat kimia memperkenankan 
dilakukannya pengukuran ciri­ciri serta 
kuantitatifnya dengan ketelitian lebih besar.
Dengan semakin kompleksisitas berbagai keperluan 
saat ini, analisis kimia dengan mempergunakan 
metoda fisik dalam hal identifikasi dari berbagai 
selektifitas fungsi polimer campuran, pemodifikasi 
dan aditif digunakan untuk plastik dan elastomer. 
Spektroskopi infra merah, metoda pengukuran 
fotometer UV, gas dan liquid kromatografi dan 
spektroskopi masa bersama sama dengan dari 
metoda pengukuran termoanalisis (DSC­TGA) 
merupakan alat yang teliti sebagai pilihan untuk 
analisis kwalitatif dan kwantitatif bahan.
PENGERTIAN
 
 Spektrofotometer merupakan alat yang digunakan untuk 
mengukur absorbansi dengan cara melewatkan cahaya 
dengan panjang gelombang tertentu pada suatu obyek kaca 
atau kuarsayang disebut kuvet. Sebagian dari cahaya 
tersebut akan diserap dan sisanya akan dilewatkan. Nilai 
absorbansi dari cahaya yang dilewatkan akan sebanding 
dengan konsentrasi larutan di dalam kuvet.

 Sesuai dengan namanya adalah alat yang terdiri dari 
spektrometer dan fotometer. Spektrometer menghasilkan 
sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu dan 
fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang 
ditransmisikan atau yang diabsorpsi. Jadi spektrofotometer 
digunakan untuk mengukur energi secara relatif jika energi 
tersebut ditransmisikan, direfleksikan atau diemisikan 
sebagai fungsi dari panjang gelombang.
 Kelebihan spektrofotometer dibandingkan fotometer adalah 
panjang gelombang dari sinar putih lebih dapat terseleksi 
dan ini diperoleh dengan alat pengurai seperti prisma, 
grating ataupun celah optis. Pada fotometer filter, sinar 
dengan panjang gelombang yang diinginkan diperoleh 
dengan berbagai filter dari berbagai warna yang mempunyai 
spesifikasi melewatkan trayek panjang gelombang tertentu.

 Pada fotometer filter, tidak mungkin diperoleh panjang 
gelombang yang benar­benar monokromatis, melainkan 
suatu trayek panjang gelombang 30­40 nm. Sedangkan pada 
spektrofotometer, panjang gelombang yang benar­benar 
terseleksi dapat diperoleh dengan bantuan alat pengurai 
cahaya seperti prisma. Suatu spektrofotometer tersusun 
dari sumber spektrum tampak yang kontinyu, 
monokromator, sel pengabsorpsi untuk larutan sampel atau 
blangko dan suatu alat untuk mengukur perbedaan absorpsi 
antara sampel dan blangko ataupun pembanding.
BAGIAN ATAU KOMPONEN SPEKTROFOTOMETER

Secara garis besar spektrofotometer terdiri dari 4 bagian penting yaitu 
:

 Sumber Cahaya
 
Sebagai sumber cahaya pada spektrofotometer, haruslah memiliki 
pancaran radiasi yang stabil dan intensitasnya tinggi. Sumber energi 
cahaya yang biasa untuk daerah tampak, ultraviolet dekat, dan 
inframerah dekat adalah sebuah lampu pijar dengan kawat rambut 
terbuat dari wolfram (tungsten). Lampu ini mirip dengan bola lampu 
pijar biasa, daerah panjang gelombang (l ) adalah 350 – 2200 
nanometer (nm).

 Monokromator
 
Monokromator adalah alat yang berfungsi untuk menguraikan 
cahaya polikromatis menjadi beberapa komponen panjang gelombang 
tertentu (monokromatis) yang bebeda (terdispersi).
 Cuvet
  Cuvet spektrofotometer adalah suatu alat yang digunakan sebagai 
tempat contoh atau cuplikan yang akan dianalisis.  Cuvet biasanya 
terbuat dari kwars, plexigalass, kaca, plastic dengan bentuk tabung 
empat persegi panjang 1 x 1 cm dan tinggi 5 cm. Pada pengukuran di 
daerah UV dipakai cuvet kwarsa atau plexiglass, sedangkan cuvet 
dari kaca tidak dapat dipakai sebab kaca mengabsorbsi sinar UV. 
Semua macam cuvet dapat dipakai untuk pengukuran di daerah sinar 
tampak (visible).
 Detektor

Peranan detektor penerima adalah memberikan respon terhadap 
cahaya pada berbagai panjang gelombang. Detektor akan mengubah 
cahaya menjadi sinyal listrik yang selanjutnya akan ditampilkan oleh 
penampil data dalam bentuk jarum penunjuk atau angka digital.
Dengan mengukur transmitans larutan sampel, dimungkinkan 
untuk menentukan konsentrasinya dengan menggunakan hukum 
Lambert­Beer. Spektrofotometer akan mengukur intensitas cahaya 
melewati sampel (I), dan membandingkan ke intensitas cahaya 
sebelum melewati sampel (Io). Rasio  disebut transmittance, dan 
biasanya dinyatakan dalam persentase (% T) sehingga bisa dihitung 
besar absorban (A) dengan rumus A = ­log %T.
 PRINSIP KERJA
Prinsip kerja spektrofotometer adalah bila 
cahaya (monokromatik maupun campuran) jatuh 
pada suatu medium homogen, sebagian dari sinar 
masuk akan dipantulkan, sebagian diserap dalam 
medium itu, dan sisanya diteruskan. Nilai yang 
keluar dari cahaya yang diteruskan dinyatakan 
dalam nilai absorbansi karena memiliki hubungan 
dengan konsentrasi sampel.
Prisinp kerja dari spektrofotometer dapat di 
gambarkan sebagai berikut :
 
CARA KERJA SPEKTROFOTOMETER

Sinar berasal dari dua lampu yang berbeda, yaitu 
lampu wolfram untuk sinar Visible (sinar tampak = 38 
– 780nm) dan lampu deuterium untuk sinar Ultra 
Violet (180­380nm) pada video lampu yang besar. Pilih 
panjang gelombang yang diinginkan/diperlukan. 
Kuvet, ada dua karena alat yang dipakai tipe double 
beam, disanalah kita menyimpan sample dan yang 
satu lagi untuk blanko. Detektor atau pembaca cahaya 
yang diteruskan oleh sampel, disini terjadi 
pengubahan data sinar menjadi angka yang akan 
ditampilkan pada reader.
Yang harus dihindari adanya cahaya yang masuk 
ke dalam alat, biasanya pada saat menutup tenpat 
kuvet, karena bila ada cahaya lain otomatis jumlah 
cahaya yang diukur menjadi bertambah.
KALIBRASI ALAT SPEKTROFOTOMETER
Kalibrasi yang dimaksud ini adalah men­seting blank 
alat spektrofotometer, sebelum digunakan untuk 
analisis. Secara umum sbb :

 Nyalakan alat spektrofotometer
 Isi kuvet dengan larutan blanko (aquades)

 Diseting/diatur panjang gelombang untuk kalibrasi.

 ­>keterangan: 0%T itu diukur saat kuvet dalam 
keadaan kosong. 100%T itu diukur saat kuvet dalam 
keadaan terisi larutan.
 Kuvet berisi larutan blanko dimasukkan ke 
spektrofotometer
 lalu tekan tombol 0 ABS 100%T, tunggu sampai 
keluar kondisi setting blank (dalam bentuk teks)
CARA PERAWATAN SPEKTROFOTOMETER
Cara Perawatan dan Penyimpanan Alat :

 Sebelum digunakan, biarkan mesin warming­up 
selama 15­20 menit.
 Spektrofotometer sebisa mungkin tidak terpapar 
sinar matahari langsung, karena cahaya dari 
matahari akan dapat mengganggu pengukuran.
 Simpan spektrofotometer di dalam ruangan yang 
suhunya stabil dan diatas meja yang permanen.
 Pastikan kompartemen sampel bersih dari bekas 
sampel.
 Saat memasukkan kuvet, pastikan kuvet kering.

 Lakukan kalibrasi panjang gelombang dan 
absorban secara teratur.
Hal­hal yang harus diperhatikan :

 Larutan yang dianalisis merupakan larutan 
berwarna
 Panjang gelombang yang digunakan adalah 
panjang gelombang yang mempunyai absorbansi 
maksimal. 
 Kalibrasi Panjang gelombang dan Absorban
JENIS – JENIS SPEKTROFOTOMETER

Spektrofotometri terdiri dari beberapa jenis 
berdasar sumber cahaya yang digunakan. 
Diantaranya adalah sebagai berikut:
 Spektrofotometri Vis (Visible)
 Spektrofotometri UV (Ultra Violet)
 Spektrofotometri UV­Vis
 Spektrofotometri IR (Infra Red)
ANALISA KUANTITATIF SEDIAAN OBAT CAIR DAN 
INJEKSI (STERIL)
 
 A. Penentuan kadar Vitamin C metode 
spektrofotometri
 

Vitamin C atau asam askorbat, merupakan vitamin yang dapat 
ditemukan dalam berbagai buah­buahan dan sayuran. Vitamin 
C dapat disintesis dari glukosa atau diekstrak dari sumber­
sumber alam tertentu seperti jus jeruk. Vitamin pertama kali 
diisolasi dari air jeruk nipis oleh Gyorgy Szent tahun 1928. 
Vitamin C bertindak ampuh mengurangi oksigen, nitrogen, 
dan sulfur yang bersifat radikal. Vitamin C bekerja sinergis 
dengan tokoferol yang tidak dapat mengikat radikal lipofilik 
dalam area lipid membrane dan protein. Pengobatan dengan 
vitamin C dapat memulihkan kadar zat besi dalam tubuh. Ada 
beberapa metode yang dikembangkan untuk penentuan kadar 
vitamin C diantaranya adalah metode spektrofotometri UV­Vis 
(panjang gelombang 265 nm) dan metode iodimetri. 
Metode Spektrofotometri dapat digunakan untuk 
penetapan kadar campuran dengan spektrum yang 
tumpang tindih tanpa pemisahan terlebih dahulu. 
Karena perangkat lunaknya mudah digunakan 
untuk instrumentasi analisis dan mikrokomputer, 
spektrofotometri banyak digunakan di bidang 
analisis kimia sedangkan iodimetri merupakan 
metode yang sederhana dan mudah diterapkan 
dalam suatu penelitian.
Gambar 1. Asam Askorbat/Vitamin C

 BM : 176,13
 Sinonim : Acidum Ascorbicum, Asam askorbat, 3­okso­L­gulofuranolakton
 Definisi
Asam askorbat mengandung tidak kurang dari 99,0% dan tidak lebih dari 100,5% 
C6H8O6.
 
 Pemerian
Hablur atau serbuk putih atau agak kuning. Oleh pengaruh cahaya lambat laun 
menjadi berwarna gelap. Dalam keadaan kering stabil di udara, dalam larutan cepat 
teroksidasi. Melebur pada suhu lebih kurang 190 0 C.
 
 Kelarutan
  Mudah larut dalam air, agak sukar larut dalam etanol, tidak larut dalam kloroform, 
dalam eter dan dalam benzena.
 Baku pembanding
Asam askorbat BPFI. Spektrofotometri adalah sebuah metode 
analisis untuk mengukur konsentrasi suatu senyawa berdasarkan 
kemampuan senyawa tersebut mengabsorbsi berkas sinar atau cahaya. 
Spektrofotometri adalah alat yang terdiri dari spektrofotometer dan 
fotometer. Spektrofotometer menghasilkan sinar dari spektrum dengan 
panjang gelombang tertentu, sementara fotometer adalah alat 
pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau diabsorpsi. 

Istilah spektrofotometri berhubungan dengan pengukuran energi 
radiasi yang diserap oleh suatu sistem sebagai fungsi panjang 
gelombang dari radiasi maupun pengukuran panjang absorpsi terisolasi 
pada suatu panjang gelombang tertentu (Underwood 1994). Secara 
umum spektrofotometri dibedakan menjadi empat macam, yaitu : 
a) Spektrofotometer ultraviolet 
b) Spektrofotometer sinar tampak 
c) Spektrofotometer infra merah
d) Spektrofotometer serapan atom Spektrum elektromagnetik terdiri 
dari urutan gelombang dengan sifat­sifat yang berbeda. 
 
Kawasan gelombang penting di dalam penelitian 
biokimia adalah ultra lembayung (UV, 180­350 nm) dan 
tampak  (VIS, 350­800 nm). Cahaya di dalam kawasan 
ini mempunyai energi yang cukup untuk mengeluarkan 
elektron valensi di dalam molekul tersebut (Keenan 
1992).  Penyerapan sinar UV­Vis dibatasi pada sejumlah 
gugus fungsional atau gugus kromofor yang mengandung 
elektron valensi dengan tingkat eksutasi rendah. 
Cara kerja spektrofotometer dimulai dengan 
dihasilkannya cahaya monokromatik dari sumber sinar. 
Cahaya tersebut kemudian menuju ke kuvet (tempat 
sampel/sel). Banyaknya cahaya yang diteruskan maupun 
yang diserap oleh larutan akan dibaca oleh 
detektor yang kemudian menyampaikan ke layar 
pembaca (Hadi 2009) Salah satu contoh instrumentasi 
analisis yang lebih kompleks adalah spektrofotometer 
UV­Vis. 
 Perhitungan kadar vitamin C dalam sampel
Absorbansi sampel : 0,596
             y = 0,0379x – 0,0312
             0,506 = 0,0379x – 0,0312
0,5372 = 0,0379x
x = kadar vit. C = 14,17 ppm
Konsentrasi vitamin C dalam sampel sebenarnya :
                                      = pengenceran x 
konsentrasi
= 200 x 14,17 ppm = 2834 ppm
Konsentrasi sampel = 8000 ppm
Kadar vitamin C dalam sampel :
                          =(konsentrasi vitamin C dalam 
sampel/konsentrasi sampel) x 100%
= (2834/8000) x 100% = 35,43 %
PEMBAHASAN

 Vitamin c atau asam askorbat merupakan bahan farmasi 
yang banyak dikonsumsi sebagai antioksidan. Asam askorbat 
dalam sediaan farmasi dapat ditentukan dengan metode 
titrasi iodometri atau spektrofotometri untraviolet pada 
panjang gelombang 265nm.
  Pada praktikum ini akan dilakukan penentuan kadar 
vitamin c sediaan farmasi dengan metode spektrofotometri 
pada panjang gelombang maksimum (ditentukan terlebih 
dahulu). Digunakan larutan asam askorbat standar untuk 
membuat kurva kalibrasi. 
 Sampel berupa bahan farmasi vitamin C dengan merek 
dagang “vitacimin”, merupakan tablet vitamin c yang 
berwarna kuning. Sampel obat di larutkan dalam air sebagai 
larutan induk, asam askorbat dan bahan pengisi pada tablet 
vitacimin akan larut sempurna dalam 250mL air, vitamin c 
atau asam askorbat tersebut kemudian dapat ditentukan 
kadarnya dengan spektrofotometer UV. 
 Spektrofotometer UV merupakan instrument yang 
menggunakan sumber cahaya, sumber cahaya 
dapat berupa cahaya tampak ataupun ultraviolet, 
cahaya akan ditembakkan pada sampel (kuvet) 
dan banyaknya cahaya yang diserap sampel dapat 
terukut pada detektor. Pada praktikum digunakan 
cahaya ultraviolet. 
 Banyaknya cahaya yang diserap sampel pada 
panjang gelombang tertentu linear dengan 
kadarnya, isi sesuai dengan hukum lambert beer. 
Menurut International Journal of Basic & Applied 
Sciences IJBAS­IJENS Vol: 11 No: 
02 hal.110 bahwa penentuan kadar vitamin c 
menggunakan metode spektrofotometri sangat 
sensitive dengan deviasi relatif sebesar 0,81%. 
 Pada pengukuran sampel vitacimin ini, tidak diperhatikan 
faktor stabilitas asam askorbatnya, sehingga kadar yang 
terukur menjadi lebih kecil dari kadar sesungguhnya. 
Standar asam askorbat diukur pada panjang gelombang 
maksimum yang telah ditentukan sebelumnya, panjang 
gelombang maksimum asam askorbat standar pada 271nm. 
 
 Pada panjang gelombang tersebut dilakukan pengukuran 
absorbansi terhadap larutan sampel vitacimin. Dari 
pengukuran standar diperoleh kurva kalibrasi dengan 
persamaan y = 0,0379x – 0,0312 dan absorbansi sampel 
vitacimin sebesar 0,596 sehingga kadar asam askorbat 
sampel vitacimin sebesar 14,17 ppm.

 Kadar terukur tersebut dikalikan dengan faktor 
pengenceran (200x) sehingga kadar sesungguhnya adalah 
2834 ppm yang diperoleh dari larutan vitacimin 8000ppm.  
Jadi, kadar asam askorbat vitacimin dalam persen sebesar 
35,43%.
KESIMPULAN

Kadar asam askorbat tablet “vitacimin” sebesar 
35,43% yang di ukur pada panjang gelombang 
maksimum asam askorbat 271nm.
TERIMA KASIH