regen- ferredoxin erate ( ox). C. pasteurianum DSMZ 525
pos- sesses sejumlah besar Feredoksin dan regenerasi ferredoxin ( lembu) dapat dicapai dengan menggunakan akseptor elektron yang berbeda. Fakta bahwa potensi redoks doxins ferre- ( - 400 mV) berada di kisaran H 2 elektroda ( - 414 mV, pada pH 7) mengungkapkan bahwa dalam kebanyakan olisms metab- energi di mana Feredoksin aktif, H 2 juga terlibat, baik sebagai substrat atau sebagai produk. Secara umum, NASes nitroge-dan hidrogenase adalah dua kelas enzim yang mampu produksi hidrogen di Clostridia. Dalam studi ini, ekspresi hydrogenase-1 (F502_18287), yang termasuk dalam kelompok [Fefe], adalah sangat up-diatur dalam kelebihan zat besi, acara- ing sampai fivefolds tingkat ekspresi yang lebih tinggi dalam fase pertumbuhan esensial exponen-bawah kondisi Fe + dibandingkan dengan Fe - kondisi. Setelah memasuki fase stasioner ekspresi hydrogenase-1 (H 2- ase) itu down diatur selama dua sampai threefolds di bawah kondisi Fe +, yang bisa menjadi mungkin dalam menanggapi penipisan kolam besi intraseluler dalam Fe + akhir. Namun, itu adalah untuk melihat bahwa regulasi hidro genase-1 PFORs (F502_18287) ekspresi agak di ment setuju- dengan yang dari iso-bentuk bawah dasar dari ferredoxin (flavodoxin) -tergantung PFOR2 dibandingkan dengan pola ekspresi ferredoxin yang -tergantung PFOR1. Oleh karena itu, menggoda untuk menunjukkan bahwa di bawah kondisi eksperimental intensitas diberikan hydrogenase-1 yang dikatalisasi reaksi tidak menjadi satu- satunya rute dari ferredoxin ( lembu) tion regenera-. The PFORs-katalis oksidasi piruvat untuk acetyl CoA mungkin ditambah dengan lainnya tetapi belum diketahui ferredoxin ( lembu) regenerasi reaksi (s) dikatalisasi baik oleh hidrogenase tak dikenal lainnya (setidaknya 5 gen dalam genom C. pasteurianum DSMZ 525 encode genases hidro) atau reduktase ferredoxin. Selain itu, juga telah melaporkan bahwa PFOR dapat mentransfer elektron gen- erated dalam reaksi dekarboksilasi langsung ke proton untuk menghasilkan molekul hidrogen. Sampel yang diperlukan untuk ini [Fefe] -hydrogenase. Namun, itu masih redoks hampir dua kali lebih tinggi dari tingkat ekspresi bawah Fe - disi con CoA Tambahan [Fefe] hydrogenase (F502_14390) juga diidentifikasi yang ETF) menunjukkan ekspresi Regulasi yang mirip dengan yang dari elektron hydrogenase-1 (F502_18287). Namun demikian hydrogenase ini tidak muncul sebagai tempat yang hanya berisi satu protein pada gel 2-D dan bifurcating karena itu tidak bisa diukur untuk perbandingan. Ekspresi yang lebih tinggi proteomik dari hydrogenase-1 (F502_18287) cided coin- dengan tinggi H 2 produksi dalam budaya fermentasi bawah kelebihan zat besi dan harus memberikan kontribusi untuk regenerasi ferredoxin ( merah) untuk ferredoxin Dalam sel-sel anaerob termasuk Clostridia, 90% dari Feredoksin dilaporkan untuk hadir dalam bentuk tereduksi, yang memungkinkan mereka untuk melayani sebagai donor elektron dalam reaksi berbeda- ent. Secara umum, ini dicapai dalam C. teurianum pas- oleh tiga reaksi redoks ferredoxin tergantung berikut: oksidasi piruvat menjadi asetil-CoA dan CO 2 ( - 500 mV), oksidasi format menjadi CO 2. - 430 mV, Dan berdasarkan flavoprotein elektron bifurkasi yang terlibat dalam pengurangan crotonyl-CoA ke butiril- CoA (Persamaan. 7 ). Di sisi lain, tion oxida- dari Fd merah oleh NAD dikecualikan karena tidak adanya ferredoxin: aktivitas NAD oksidoreduktase. Sana kedepan, produksi hidrogen melalui hydrogenase harus Selain itu, seperti yang dijelaskan dalam analisis keseimbangan redoks di atas, kemungkinan keterlibatan dari ferredoxin-depend- ent butiril-CoA dehidrogenase / elektron mentransfer flavoprotein kompleks (BCdH-ETF) di H 2 produksi diusulkan. Dalam BCdH-ETF katalis reaksi transfer electron flavoproteins (ETF) yang terlibat dalam pengurangan dari crotonyl-CoA kebutiril-CoA, ditambah dengan ferredoxin ( lembu) pengurangan oleh bifurcating elektron dari NADH (Gambar. 5 ) [ 28 . 37 ]. Dalam penelitian ini proteomik, dua ETF, yaitu ETF subunit alpha (F502_06282) dan subunit alpha / beta-seperti protein (F502_06287), yang identi- fied antara protein yang paling. berlimpah terlepas dari ketersediaan besi; Namun, kelimpahan mereka sedikit lebih tinggi (1,5-1,7 lipatan) pada fase akhir dari budaya Fe + dibandingkan dengan Fe - kondisi akhir. Ini mungkin puncak-cate peningkatan relatif di kolam renang ferredoxin teroksidasi yang diperlukan untuk melaksanakan reaksi BCdH-ETF dan juga memberikan kontribusi terhadap kuat H 2 produksi pada akhir fase pemikiran fer- dalam kondisi Fe. 1,3-PDO tingkat produksi. Penurunan Fd lembu tion frac- bawah Fe - Kondisi karena berkurangnya H 2- Kehadiran ase akan menurunkan Fd lembu ditambah sintesis butiril-CoA dikatalisis oleh kompleks BCdH-ETF, langkah penting dalam butirat dan terutama biosintesis butanol. Selain itu, antara asetil- CoA akan menguntungkan disalurkan ke Fd lembu- rute pembentukan asetat independen dari Fd lembu- tergantung rute pembentukan butirat, seperti yang ditunjukkan oleh peningkatan rasio butirat / asetat dari 1,3 di Fe - 1,5 pada Fe + (Gambar. 5 c). Akibatnya, tampaknya bahwa di bawah Fe - kondisi, Fd lembu langkah-langkah konversi tergantung berkurang dan mengakibatkan daya mengurangi bebas, sekutu usu- dibutuhkan untuk pembentukan butanol, bisa diarahkan demi keseimbangan redoks untuk produksi 1,3-PDO dan laktat. Memang, hasil keseluruhan 1,3-PDO dan tate lac- jauh lebih tinggi di bawah batasan besi daripada di bawah.