3.1.

PROCEDIMIENTO DE RECOLECCIÓN DE DATOS

A. ANALISIS DE SUELO:

PARAMETROS QUIMICOS (DIAGRAMA DE FLUJO)

MATERIA ORGÁNICA

Pesar la muestra antes de llevar a

la mufla.

Pesar la muestra de la tierra

después de sacar la mufla.

Seguir el mismo procedimiento

para los siguientes puntos.
 Pesar 2 gramos de la muestra de
pH DEL SUELO suelo en balanza analítica.10 ml
de agua destilada

Diluimos la muestra ya pesada en

10 ml de agua destilada en un vaso
precipitado

Dejamos reposar por 30 minutos

Después de esperar dicho tiempo

pasamos a medir el pH con el
peachimetro y anotamos los
resultados
OBTENCION DEL GLOMUS INTRARRADICES

AISLAMIENTO E
IDENTIFICACIÓN DE EXTRACCIÓN DE
HONGOS MUESTRA DE SUELO
AUTÓCTONOS

Marcar con un marcador la pala

Regla de una medida de 20 cm.

Se extrae un terrón de suelo con

una pala de forma piramidal.
Pala, agua destilada.
Antes lavada con agua
destilada.
 Se extrae la parte central del
terrón con un cuchillo y se quita
Cuchillo la parte orgánica. El cuchillo
debe estar lavado antes con
agua destilada.

Coger la muestra del terrón

aproximadamente 500 gr.

Se almacena en
una bolsa de
Bolsa de cierre hermético cierre hermético.
 Se almacena
en el cooler.

Cooler

Se transporta al
laboratorio.

AISLAMIENTO DEL
HONGO AUTÓCTONO

Extraer una
Muestra de suelo porción de la
muestra de suelos
colectada.
 Diluir la muestra de suelo en 80
Agua destilada, probeta, biker y pipeta ml de agua destilada.

Se transporta hacia la
Estufa. estufa.

Se deja hervir durante 5

minutos.

Dejar enfriar a temperatura

ambiente.
Agar saboraud dextrosa, balanza analítica. Se pesa Agar saboraud dextrosa

Agua destilada Se le diluye en agua destilada.

Se transporta hacia la
Estufa. estufa.

Se le deja hervir hasta que

desaparezcan los cúmulos de
Agar.
 Se transporta hacia el
autoclave a una presión
de 1.2 a 15 minutos.

Se saca del
autoclave para
llevarlo hacia la
mesa de trabajo.

Esterilizar la mesa
Ron de quemar y mechero casero. de trabajo con ron
de quemar y colocar
un mechero en el
centro.
 Colocar 6 placas esterilizadas
Estufa. en el área esterilizada.

Servir el Agar en 4 placas.

Esperar que el agar se

solidifique.

Se extraerá con
ayuda de la pipeta
Asa de Drigalski, muestra diluida, pipeta. 0.1 ml de la muestra
diluida para realizar
la siembra por
superficie.
 Se realizará la siembra por
superficie en 2 placas Petri con
Agar saboraud dextrosa.

Se extraerá con ayuda

del asa de kolle una
Muestra diluida, pipeta. película de la muestra
diluida para realizar
la siembra por estría.

Se realizará la siembra por

estría en 2 placas Petri con
Agar saboraud dextrosa de
manera cuadrantal.
 Se extraerá con ayuda
de una pipeta 1ml de
la muestra diluida
Muestra diluida, pipeta. para realizar la
siembra por
incorporación.

Se adicionará el 1ml de
muestra hacia 2 placas y
después verter el agar,
dejar solidificar
realizando movimientos
de vaivén.

Se transporta hacia la
incubadora.
Se almacena en
la incubadora
durante 5 días en
23 °C.

Se observará la
esporulación de
hongos y se
identificará el
hongo a estudiar.
 IDENTIFICACIÓN
DEL HONGO
AUTÓCTONO

Pasado los 5 días se obtendrá

cultivos de hongos, se extraerá
una cepa en una lámina
portaobjeto.

Se le agregara azul de
lactofenol hasta cubrir toda la
cepa de hongo.
Se esperará 10 minutos para
que el colorante tiña bien la
cepa.

Se enjuagará con agua destilada

hasta quitar el colorante.

Se transporta hacia el
microscopio.
 Se observará en el
microscopio a objetivo
40X y se determinará
mediante el atlas de
hongos
microscópicos.

CARACTERIZACIÓN DEL GLOMUS INTRARRADICES

A. TAXONOMÍA
TAXONOMIA
REINO Hongos
DIVISIÓN Glomeromycota
CLASE Glomeromicetos
ORDEN Glomerales
FAMILIA Glomeraceae
GENERO Glomus
ESPECIE Intraradices
A. DESCRIPCIÓN
Glomus son hongos que desarrollan esporocarpos generalmente irregulares,
hipogeos o en ocasiones epigeos y con restos vegetales, normalmente de
pequeño tamaño, no excediendo los 2 cm de diámetro.
El peridio presenta, en algunas especies, una superficie algodonosa, pero puede
estar totalmente ausente en algunas.
Gleba muy homogénea ya que consiste únicamente en esporas e hifas
entremezcladas.

Esporas clamidosporoides de elipsoidales a subglobosas, muy grandes, de 30 a

250 µm de diámetro, más o menos lisas, de amarillentas a parduscas,
generalmente originadas al final de una hifa, cuyo extremo comienza a dilatarse
hasta convertirse en la espora; el esporangiotecio aparece continuo a la hifa
generativa, sin un eusporio, y en la madurez el contenido esporal se separa de
la hifa mediante un falso septo u oclusión, creado por la pared esporal al
engrosarse.
C. SUPERVIVENCIA AMBIENTAL
El hongo micorrízico (Glomus intraradices) contribuye a la inmovilización del metal en las raíces de las
plantas o en el suelo (Fito estabilización). Esto muestra que el resultado de la micorrización de plantas con
fines de fitorremediación de suelos contaminados depende de la combinación planta–hongo–metal y está
influenciado por las condiciones del suelo.
El hongo micorrízico puede mostrar mayor captación de metales pesados degradando y limpiando los
suelos contaminados. Glomus intrarradices es uno de los hongos micorrízicos que ha mostrado mayor
tolerancia a metales como Cd y Pb.

Por otro lado, es ampliamente conocido que los Glomus intrarradices pueden producir una gran cantidad
de micelio externo. También es conocido que la pared celular de este micelio está compuesta mayormente
por quitina y que este compuesto estructural provee una eficiente superficie para la adsorción de los
metales pesados del suelo.
Otros agentes potenciales de retención del Pb en el micelio de los HMA son las metalotioneinas.
Se ha documentado la acumulación de metales pesados, tales como Cd, Zn y Cu, en el interior del micelio
interno de Glomus intrarradices especialmente en gránulos de polifosfato en el interior de la vacuola.
A. METABOLISMO DEL HONGO
Este hongo puede crecer con gran facilidad. El lugar más frecuente en el que se desarrollan es el
suelo, a una temperatura de 3°C a 20°C.
Por otra parte, su pH varía entre 3.8, 5 y 8, se ven favorecido por cierto grado de humedad.
Son las células jóvenes quienes desarrollan la mayoría de la actividad metabólica del hongo,
liberando enzimas al medio y absorbiendo los nutrientes. La zona central, por otra parte, tiene
células en las que se acumulan las substancias de reserva que pueden ser necesarias para que el
micelio colonice nuevas zonas.
E. MECANISMOS DE TOLERANCIA A METALES
PESADOS POR LA SIMBIOSIS HMA-PLANTA

La fitoestabilizacion previene la dispersión de los MP en el suelo debido a la erosión y su lixiviación hacia

los mantos freáticos. Las especies vegetales tolerantes a los MP con sistemas radicales extensivos y con
buena cobertura del suelo, previenen la erosión (eólica e hídrica) y son adecuados para su aplicación en
estrategias de fitoestabilización. La inmovilización de los MP en la rizósfera es completada por la
precipitación de los MP en el suelo, la adsorción en las superficies de la raíz. Los HMA, por su parte,
favorecen la inmovilización de los MP en el suelo más allá de la zona de la rizósfera y, por consiguiente,
incrementan la fitoestabilización.

La absorción de Pb y su inmovilización en plantas micorrizadas es significativamente mayor que en

plantas no micorrizadas. De manera similar a las vacuolas vegetales, las vesículas de los HMA que se
forman en el tejido cortical de la raíz, pueden estar involucradas en la acumulación de compuestos
tóxicos y, por consiguiente, podría ser un mecanismo alternativo de detoxificación.
 PROPAGACIÓN DE
LOS HONGOS
AUTOCTONOS

Luego de haber identificado el

hongo autóctono por medio de
la tinción de azul de lactofenol
lo que se realiza es sembrar en
3 placas con agar nutritivo.

Se pesa Agar Nutritivo.

Agar Nutritivo, balanza analítica.
Se le deja hervir hasta que
desaparezcan los cúmulos de
Agar.

Se transporta hacia el
autoclave a una presión
de 1.2 a 15 minutos.

Se saca del
autoclave para
llevarlo hacia la
mesa de trabajo.
 Esterilizar la mesa
Ron de quemar y mechero casero. de trabajo con ron
de quemar y colocar
un mechero en el
centro.

Colocar 3 placas esterilizadas

en el área esterilizada.

Servir el Agar en 3 placas.

 Sembramos el hongo autóctono
por el método de superficie en las
3 placas

Se extraerá con ayuda de

Asa de Drigalski, muestra diluida, pipeta.
la pipeta 0.1 ml de la cepa
del hongo autóctono
diluida en 10 ml de agua
destilada para realizar la
siembra por superficie en
la primera placa
 Se extraerá con ayuda
de la pipeta 0.1 ml de
la cepa del hongo
Asa de Drigalski, muestra diluida, pipeta. autóctono diluida para
realizar la siembra por
superficie en la tercera
placa

Ya sembrados dejar
reposar hasta que se
solidifique haciendo
movimientos de
vaivén.
 Se transporta hacia la
incubadora.

Se almacena en la
incubadora durante 7
días a una
temperatura de 23 °C

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