Introducción a las separaciones

cromatográficas

Cristian Marín Olivares

Química Analítica Instrumental II
21 Septiembre 2009
 Objetivo
• Este trabajo esta diseñado con el propósito de
conocer los mecanismos de separación que
utiliza la cromatografía, además de conocer las
clasificaciones generales que abarca esta técnica.
 Cromatografía
• “La cromatografía agrupa un grupo importante
y diverso de métodos que permite a los
científicos separar componentes estrechamente
relacionados en mezclas complejas, lo que en
muchas ocasiones resulta imposible por otros
medios.”

D. Skoog, J. Leary. Análisis Instrumental. Cuarta Ed. p.675

 Definición
Una correcta seria definición de esta técnica seria,
la dada por Keulemans:
• "Método físico de separación en el que los
componentes a separar se distribuyen en dos
fases, una de las cuales constituye un lecho
estacionario de gran desarrollo superficial y la
otra un fluido que pasa a través o a lo largo del
lecho estacionario (fase móvil)."
 Cromatografía
• El estudio de la cromatografía se basa
principalmente en el comportamiento de una
fase móvil y una estacionaria que establecen
algún tipo de interacción.
 Clasificación de los métodos
cromatográficos
• Son clasificados según:

1.Tipo de soporte (forma en que las fases se

ponen en contacto)
2.El estado físico de la fase
3.El mecanismo de separación
.
 clasificación

1.Tipo
de soporte

Plana Columna
 Definiciones
• Cromatografía plana:
Fase estacionaria: placa lisa sobre soporte de
papel.

Fase móvil: se desplaza a través de la fase

estacionaria por capilaridad o por gravedad.
 Definiciones
• Cromatografía en columna:
Fase estacionaria: interior de un cilindro de vidrio
de un diámetro pequeño.

Fase móvil: se hace pasar a través de presión o

por gravedad.
 clasificación

2.Referencia a la naturaleza
1.Tipo
de la fase móvil y
de soporte la fase estacionaria

Cromatografía
Cromatografía
de
Plana Columna
Líquidos
de gases
 Clasificación
• La fase móvil puede ser un gas o un líquido, y
la estacionaria u líquido o un sólido. Se pueden
establecer cuatro tipos de cromatografía:
1.gas-líquido
2.líquido-líquido
3.gas-sólido
4.líquido-sólido.
Interacción entre los distintos
estados de las fases
 **
• Los mecanismos por los que los diferentes
componentes son separados en los procesos
cromatográficos son variados. En algunos casos
participan más de un mecanismo en un mismo
proceso de separación por lo que dificulta su
clasificación.
 clasificación

3.Referencia
2.Referencia a la naturaleza
1.Tipo al
de la fase móvil y
de soporte mecanismo
la fase estacionaria
de retención

Exclusión o
Cromatografía penetrabilidad
Cromatografía adsorción afinidad
de
Plana Columna
Líquidos
de gases reparto
Intercambio
iónico
 Definiciones
• Cromatografía de reparto
Lecho líquido polar
Eluyente líquido apolar (hidrofóbico)

• Los componentes de la fase móvil son

retenidos por la fase estacionaria liquida en
función de su solubilidad en ella. Si las dos son
liquidas se tiene un proceso de extracción en
continuo.
Reparto
 Definiciones
• Cromatografía de adsorción:
Interacciones reversibles específicas entre soluto y fase
estacionaria
Gases o líquidos contenidos en la fase móvil son
retenidos por una adsorción selectiva en la superficie
del sólido que constituye la fase estacionaria. En la
interfase sólido-fase móvil hay un aumento de
concentración respecto a la inicial. Este mecanismo
controla la cromatografía gas-sólido y líquido-sólido.
Materiales adsorbentes: óxidos de aluminio, silicatos,
carbón activo, polisacáridos, ...
Separación por adsorción
 Definiciones
• Cromatografía de Intercambio Iónico:
La fase estacionaria constituida por un sólido (resina)
intercambiando iones con iones contenidos en la fase
móvil, liquida. El intercambio de iones sólido-solución
esta regulado por la afinidad química de los iones con
ambas fases y por sus respectivas concentraciones.
• Interacción de moléculas ionizadas con una matriz
cargada
Gel cargado negativamente  intercambio catiónico
Gel cargado positivamente  intercambio aniónico
Intercambio iónico
 Definiciones
• Cromatografía de exclusión por tamaño
Especies neutras de alto peso molecular
pueden ser separadas en virtud de su tamaño
donde la fase estacionaria es un gel hidrofílico
altamente poroso que retiene las moléculas de
menor tamaño al de los poros. Las moléculas
de mayor tamaño son retardadas en su paso
por pequeñas fuerzas de adsorción de la
superfie externa del gel que luego son excluidas
de la fase estacionaria.
Exclusión por tamaño
 Definiciones
• Cromatografía de afinidad

– Interacción específica y reversible con ligandos

inmovilizados en la fase estacionaria
– Este mecanismo es utilizado en la purificación
de enzimas y anticuerpos
Separación por afinidad
Tabla resumen
 Referencias
• http://www.profeonline.com/laboratorioquimico/mod_
12/docs/cromatografia_principios_clases.pdf

• http://exa.unne.edu.ar/depar/areas/quimica/quimica.a
nalitica/qa_arch_matdid/arch_teoria/Temas%20teoric
os/Profesorado/Cromatografia.pdf

• D. Skoog, J. Leary. Análisis Instrumental. Cuarta

Edicion McGrawHill
• Gracias por su atención