MICROBIOLOGÍA Y LA

TÉCNICA ASÉPTICA

Estudiantes:
Andrade Glenis
Molina Francis
Zerda Alexandra

Caracas, Julio 2019

 Clasificación de los Microorganismos
Taxonomía: creada botánico sueco Carl von Linneo

- Siglo XIX solo se conocían dos reinos.

-En 1866 Enrst Haeckel creó un tercer reino, protista.
-El microscopio permitió conocer las células eucariotas y
procariotas.
-En 1969 R. H. Whittaker propuso 5 reinos: Monera, protista,
fungí, vegetal y animal.
-En 1978 Carl Woese describió tres tipos de células por
encima del reino las bacterias, arqueobacterias y eucariotas.
Clasificación de los Microorganismos

Se clasifican en:
 Bacterias (pared celular, forma, nutrición, respiración y
temperatura)
 Clamidias.
 Virus.
 Hongos.
 Protozoarios.
Bacterias
Se pueden clasificar según:

Pared celular
Bacterias
Se pueden clasificar según:

Forma
Bacterias
Se pueden clasifica-:

Por su fuente de alimentación o nutrición

 Bacterias autótrofas: producen su propio alimento.

Fotosíntesis: luz solar, agua CO2

 Bacterias heterótrofas: no producen su propio alimento.

Bacterias
Por su respiración celular

 Bacterias aerobias: son aquellas bacterias que requieren de

oxígeno para su desarrollo.

 Bacterias anaerobias: Son las bacterias que no necesitan el

oxígeno para subsistir: pueden sobrevivir con muy poco o con
nada de oxígeno
Bacterias
Por la temperatura en la que crecen

 Bacterias Psicrófilas Estas bacterias se desarrollan en bajas temperaturas,

desde -10°C hasta unos 20°C.

 Bacterias Mesófilas Las bacterias mesófilas se caracterizan por crecer en

ambientes con temperatura similar a la corporal; es decir, entre 15°C y
40°C. Sus hábitats más habituales son los organismos humanos y de
algunos animales.

 Bacterias Termófilas son aquellas bacterias que se desarrollan en altas

temperaturas, superiores a 45°C.

 Bacterias Hipertermófilas
Son las bacterias que crecen en temperaturas extremadamente altas,
superiores a los 100°C. Suelen multiplicarse rápidamente.
Clamidias
Existen tres especies de clamidias
Cuando se multiplica
dentro de una célula infectada
produce una microcolonia d
organismos llamada cuerpos
de inclusión.
Clamidia tracomatosa

Clamidia pneumoniae

Clamidia psitacosis
Virus
Microorganismo compuesto de material genético protegido por un
envoltorio proteico, que causa diversas enfermedades introduciéndose como
parásito en una célula para reproducirse en ella.
Hongos
Es un organismo eucariota que pertenece al reino fungí y son parásitos o
viven sobre materias orgánicas en descomposición.

Se clasifican en:

 Hongos filamentosos.
 Hongos dismorficos.
 Levaduras

La levadura es un hongo unicelular que produce enzimas capaces de

provocar la fermentación alcohólica de los hidratos de carbono.
Protozoarios
Son un conjunto de microorganismos que se hallan en ambientes
húmedos o acuáticos se consideran animales unicelulares
primitivos
Conjuntivitis bacteriana aguda
 Estafilococos aureus.
 Neumococos
 Estreptococos piogenes.
 Haemophilus influenzae.

Conjuntivitis bacteriana hiperaguda

 Gonococos.

Blefaroconjuntivitis bacteriana crónica

 Estafilococos aureus.
 Neumococos
 E coli.
Conjuntivitis por inclusión, cronica, tracoma,
linfogranuloma venéreo y neonatal
 Clamidia tracomatis.

Conjuntivitis mocopurulenta.
 Herpes Zoster.
Queratitis
 Estafilococos aureus.
 Neumococos
 Pseudomonas aeruginosa
 Estreptococos
 Moraxella
 Herpes simple.
 Herpes zoster
 Hongos

Queratoconjuntivitis epidérmica y Fiebre faringo conjuntival

 Adenovirus

Uveítis anterior (iris, cuerpo ciliar)

 Herpes simple.
 Hongos

Iridociclitis
 Bacilo koch
Uveítis posterior(corides)
 HIV.
 Protozoo (toxoplasma gondii)
 Citomegalovirus.
Endoftalmitis
 Estafilococos aureus.
 Neumococos
 Pseudomonas aeruginosa
 Hongos

Orzuelo
 Estafilococos

Aparato lagrimal
 Estafilococos aureus.
 Meningococos.
 Estreptococos piógenas.
 Pseudomonas aeruginosa
 Hongos.
 Herpes zoster.
 Tracoma
 Bacilo de koch
Infección: Invasión y
multiplicación de microorganismos
nocivos en los tejidos corporales.
características de un
microorganismo patógeno: la
capacidad de ser trasmisibles, la
adhesión a las células del hospedador,
invadir los tejidos y la capacidad de
evadir el sistema inmunitario del
hospedador.
En la transmisión de una enfermedad
intervienen los siguientes elementos:
Mecanismos de
transmisión de
microorganismos
1) Dispersión de partículas de
secreciones contaminadas con
microbios: el estornudo de una
persona en el estado agudo de un
resfriado produce una dispersión de
partículas contaminadas con
millones de virus infectantes

2) Contacto Directo: es la
transferencia de un agente Inmediata
infeccioso de una persona a otra a
través de contacto físico estrecho.
mediato
 3) Contacto Indirecto: transferencia
de microbios de un hospedero a
otro mediante un objeto inanimado

4) Por el uso común de un vehículo:

Implica la transferencia de
microbios de una fuente inanimada,
o reservorio, a muchas personas

5) vectores : son insectos que transportan el agente. Si

intervienen necesariamente en el ciclo biológico del
agente, se denominan activos. Si intervienen como
simples vehículos casuales, se denominan pasivos.
 Control de los agentes
Microbianos por la técnica
aséptica
Procedimientos utilizados para prevenir la
diseminación de microbios infecciosos a
personal o pacientes en el consultorio
medico.

Normas
Higiénicas

Lavarse las manos

Uso de guantes

Esterilizar
instrumentos
Evitar tocar lesiones
 Lavado de manos
 Este procedimiento no elimina todos los
microorganismos, pero reduce
sustancialmente el riesgo de transmisión de
microbios patógenos.

 Se debe practicar inmediatamente

antes y después de cualquier
procedimiento o contacto que puede
haber recontaminado las manos.
La desinfección.
Produce la destrucción de agentes infecciosos o
contaminantes presentes y objetos y
ambientes.(vegetativas pero no de esporas).

Esterilización.
Procedimiento en el cual se utilizan métodos
químicos o físicos para eliminar toda posibilidad de
vida microbiana, incluidas esporas y bacterias
altamente termo resistente.
 Métodos de esterilización.

Físicos. Químicos líquidos.

 Agua hirviendo. Glutaraldehido.

 Calor seco (hornos). Peróxido de hidrogeno.
 Calor húmedo (autoclave). Formaldehido.

Químicos gaseosos.

 oxido de etileno.
 radiaciones electrónicas
 Manipulación de material estéril.

La esterilidad del material va a depender de aspectos

fundamentales
 Manipulación: debe ser mínima y necesaria.
 Transporte: deben ser carros abiertos.
 almacenamiento: temperatura adecuada, estante de
madera.

Esterilizando material contaminado

 Los instrumentos médicos y otros artículos
reusables, se esterilizan primero lavándolos con
agua y jabón para quitar la grasa o materia proteica
y luego se almacenan para ser esterilizados y
reusados.
 Los artículos desechables descontaminar antes de
ser desechados.
Identificación de microorganismo.

Toma de la muestra: las muestras deben tomarse

antes de iniciar el tratamiento empírico, ya que no
solamente el tratamiento puede fallar sino que
también puede interferir en el resultado del cultivo.
 Identificación de la microorganismos

Es un conjunto de técnicas y procedimientos que se aplican para

conocer l identidad de un microorganismo

Clasificación de los Métodos de Identificación Microbiana

 Criterios morfológicos: rasgos estructurales
 Tinción diferencial: sacar conclusiones en relación con la morfología de una bacteria,
examinando una lámina que fue sometida a un proceso de tinción diferencial. La mayor
parte de las bacterias, teñidas con Gram, las podemos clasificar como gram positivas o
gram negativas.
 Pruebas bioquímicas: as pruebas bioquímicas han sido ampliamente utilizadas para
diferenciar bacterias. Se fundamentan en demostrar : capacidad de fermentar azúcares,
la presencia de enzimas, la degradación de compuestos, la producción de compuestos
coloreados, etc. Bacterias fuertemente relacionadas pueden separarse en especies
diferentes .Catalasa, Citrato, Fenilalanina desaminasa, Indol, Lactosa, Oxidasa, Rojo de
Metilo .
 Tipificación con fagos: La interacción entre un virus bacteriano (fago) y
su célula bacteriana sensible es sumamente específica, ya que el proceso de
adsorción se encuentra mediado por receptores específicos tanto en el virus
como en la célula bacteriana puede ocasionar la lisis de las bacterias.se le
añade una alícuota de un fago específico. A una placa con medio de cultivo
sólido inoculado.
 Pruebas serológicas: Implican la utilización de preparaciones de
inmunoglobulinas específicas.Se basan en la reacción de un antígeno
presente en el agente microbiano con su anticuerpo correspondiente.

 Detección molecular: métodos basados en biología molecular donde se

detectan secuencias de ADN propias de un determinado agente microbiano.
PCR (Polymerase Chain Reaction) identificación de microorganismos que no
pueden ser cultivados por métodos con vencionales. Se aumenta la cantidad
de ADN hasta niveles detectables mediante electroforesis o mediante sondas
de ADN.
Toma de muestra

El exudado conjuntival debe obtenerse antes de la instauración de

tratamiento tópico con colirios. Se frota la conjuntiva tarsal con un hisopo de
Dacron o alginato cálcico conservado en medio de transporte de Amies. Se
debe obtenerse una segunda muestra sin medio de transporte para poder
efectuar un examen microscópico.
Si se sospecha infección por Chlamydia hay que tomar una torunda adicional y
colocar la muestra en el medio de transporte específico que utilice el
laboratorio. En caso de infección vírica la muestra debe introducirse en medio
de transporte adecuado para virus. Durante la toma de la muestra ha de evitarse
el contacto con el borde del párpado para no arrastrar microbiota colonizante.
 Raspado corneal La muestra debe tomarse antes de
instaurar el tratamiento antibiótico, sobre todo si es un colirio. No
existe consenso sobre el instrumento o el procedimiento a seguir
para la toma de muestra. Se pueden utilizar tanto espátulas de
Kimura, hoja BardParker, hojas de bisturí por el extremo no
cortante (número 15), agujas estériles. La espátula o la hoja de
bisturí permiten desbridar la capa superficial y acceder a los
microorganimos que invaden las capas más profundas. Se debe
raspar tanto el fondo de la úlcera como los bordes.
 Biopsia corneal Está indicada la toma de una biopsia corneal si la
infección no responde al tratamiento o si los cultivos de los raspados han sido
negativos y continúa la sospecha clínica de queratitis infecciosa. También está
indicada si la infección se localiza en las capas profundas del estroma inaccesibles
al raspado. La biopsia puede realizarse con el microscopio quirúrgico con una hoja
pequeña, utilizando trépanos de 2-3 mm de diámetro. Se lleva a cabo trepanación
no penetrante y con ayuda de cuchillete o espátula se finaliza la queratectomía
parcial.

Lente de contacto El cultivo de la lente de contacto tiene utilidad

en los casos de sospecha de infección por Acanthamoeba spp.
 Humor vítreo Las muestras para el diagnóstico microbiológico
deben tomarse antes de la instauración del tratamiento antibiótico,
especialmente si éste se administra mediante inyección intravítrea. Puede
obtenerse una muestra de humor vítreo, por aspiración con jeringa en el
quirófano o preferentemente por vitrectomía y lavado para evitar
tracciones vítreas. El análisis del humor acuoso tiene una escasa
sensibilidad para determinar la etiología de una vitritis.

Exudado palpebral Para obtener este exudado se debe frota el

borde del párpado o de la zona ulcerada con una torunda de algodón o
alginato cálcico previamente humedecida en caldo TSB o BHI.
 Muestras del aparato lagrimal Si hay exudado purulento
procedente del canal o del saco lagrimal, hay que aspirarlo con jeringa.
También se puede aspirar el material obtenido en el curso de una
dacriocistotomía o canaliculotomía. Si se observan concreciones en el
canal deben extraerse con una espátula o cureta y a continuación se
extienden sobre un portaobjetos para su posterior tinción. Si se realiza la
extirpación del saco o de la glándula lagrimal, se debe introducir en suero
salino estéril para remitirlo al laboratorio.
 La tinción de Gram o coloración de Gram es un tipo de
tinción diferencial empleado en bacteriología para la visualización de bacteria,
sobre todo en muestras clínicas. Debe su nombre al bacteriólogo danés
Christian Gram quien desarrolló la técnica en 1884. Se utiliza tanto para poder
referirse a la morfología celular bacteriana, como para poder realizar una
primera aproximación a la diferenciación bacteriana, considerándose
bbacterias grampostivias a las que se visualizan de color morado, y bacterias
gramnegativas a las que se visualizan de color rosa, rojo o grosella.

Bacterias Escherichia coli (gram Bacterias grampositivas

negativas) vistas al microscopio de Bacillus anthracis (bacilos
tras ser teñidas con la tinción morados)
de Gram.
Procedimiento de la tinción de Gram
 Recoger muestras para ubicarlas en el microscopio.
 Hacer el extendido con un palillo de madera.
 Dejar secar a temperatura ambiente o fijarlas utilizando un mechero.
 Fijar la muestra con metanol durante un minuto o al calor (flameado tres veces aproximadamente).
 Agregar azul violeta (cristal violeta o violeta de genciana) y esperar un minuto.
 Enjuagar con agua no directamente sobre la muestra
 Agregar lugol y esperar un minuto aproximadamente.
 Agregar alcohol acetonay esperar entre 5 y 30 segundos según la concentración del reactivo (parte crítica de la
coloración). (las gram - se decoloran, las gram + no)
 Enjuagar con agua.
 Tinción de contraste agregando safranina o fucsina básica y esperar un minuto. Este tinte dejará de color rosado-
rojizo las bacterias gram negativas.
 Lavar levemente con agua.
 Para observar al microscopio óptico es conveniente hacerlo a 100x con aceite de inmersión.
Cultivos de microorganismos

Un cultivo es el crecimiento de poblaciones microbianas de forma controlada en un

medio artificial.

Medios de cultivos

Soporte que va a contener los nutrientes necesarios, así como unas condiciones
óptimas de pH y humedad que permite el desarrollo y crecimiento de
microorganismos.

En función de su consistencia
 Sólidos: al medio de cultivo sólido se le añade un agente gelificante o solidificante.
Se preparan y se dejan enfriar y luego se pueden pasar o bien a una placa o bien a
un tubo.
Los gelificantes más habituales son:

 Agar Agar: es un alga que se caracteriza por ser inerte frente a los microorganismos
y porque es líquido a la temperatura de ebullición y solidifica entre los 45-50ºC.
Gelatina.
 Líquidos o caldos: contiene los nutrientes y, en lugar de añadir el agar, tienen el
agua que se utiliza para diluir el medio de cultivo. Se preparan en tubo.
 Semisólidos: contienen agar (<5-10%). Se utilizan cuando queremos observar
movilidad bacteriana. Se hace en tubo y se utiliza la siembra en picadura con asa
recta.
En función de su composición

 Empíricos: son aquellos en los que no se conoce exactamente su

composición. Ya no se utilizan en los Laboratorios.
 Químicamente definidos: se conoce exactamente la composición y la
concentración de cada uno de los nutrientes que componen el medio de
cultivo.
 Complejos o indefinidos: Contienen sustancias altamente nutritivas,
pero de composición indefinida. Suelen llevar sustancias como extractos
de carne, peptona, extractos de levadura, bovril... La ventaja de este
medio de cultivo es que contiene muchos factores de crecimiento, por lo
que podemos cultivar en él gran número de microorganismos. El
inconveniente es que no conocemos lo que el microorganismoestá
consumiendo.
En función del uso que se le da
 Enriquecidos: son aquellos medios en los cuales a un medio base se le añaden
determinadas sustancias nutritivas que son necesarias para el crecimiento de un
microorganismo exigente. Ejemplo: agar-sangre.
 De enriquecimiento: se utilizan solamente cuando se sospecha que el
microorganismo de la muestra se encuentra en un número muy pequeño. Se le aporta
los nutrientes y se espera que crezcan de 6 a 8 horas.
 Diferenciales: incorpora determinadas sustancias que nos permiten diferenciar entre
dos tipos de microorganismos. Ej. El agar de sal y manitol: nos permite diferenciar en
el caso de los staphylococos, los que utilizan el manitol en su metabolismo de los
que no. Si lo utilizan originan ácidos, con lo que el pH disminuye y el indicador
cambia de color.
 Selectivos: llevan incorporadas determinadas sustancias qqe inhiben el crecimiento
de un microorganismo y facilita el crecimiento del microorganismo que nos interesa.
Ej. Agar de sal y manitol: el NaCl (5%) inhibe el crecimiento de ciertos m.o y facilita el
desarrollo de otros que crecen mejor en ese medio.
Transporte y mantenimiento: se utilizan cuando la muestra no se puede procesar
inmediatamente después de haberla tomado.
Preparación para un medio de cultivo

Pasos a realizar:

 Dependiendo del volumen de medio de cultivo que vayamos a preparar, pesar en un vidrio de
reloj la cantidad necesaria del medio de cultivo deshidratado.
 Medir en una probeta la cantidad de agua destilada necesaria.
 Añadir parte del agua a un erlenmeyer adecuado al volumen que vamos a preparar.
 Añadir al erlenmeyer el medio de cultivo.
 Agitar hasta la disolución parcial y calentar un poco.
 Añadir el resto del agua que nos servirá para limpiar la superficie del objeto utilizado para
pesar.
 Colocamos el erlenmeyer sobre el mechero, apoyado en una rejilla que permita la difusión del
calor y calentamos durante un tiempo que vendrá determinado en el prospecto del producto.
 Por último debe pasar por el proceso de esterilización.
 Todos los medios de cultivo se preparan en erlenmeyer, independientemente de si es sólido o
líquido. Lo que diferencia su preparación es la forma de esterilizar:
 Medios de cultivo sólidos en placa: se preparan y esterilizan en el erlenmeyer. Para la
esterilización se coloca un tapón de algodón envuelto en una gasa, tapado con papel y
sellado con una cinta adhesiva.
 Medios de cultivo sólidos o líquidos en tubo: se preparan en el erlenmeyer y se esteriliza en
el tubo. Los tubos se llenan con un volumen que oscila entre los 5-10 mL (utilizamos una
pipeta), se tapan con un tapón metálico y cubiertos con papel y cinta adhesiva. Se esterilizan
colocados en una gradilla, aunque para aumentar la superficie se suelen colocar de forma
inclinada.
Pruebas de sensibilidad determinan la susceptibilidad de un
microorganismo frente a los medicamentos antimicrobianos a partir de la
exposición de una concentración estandarizada del germen y depende de
agente microbiano que se desea evaluar.
Existen tres tipos:
 Cualitativos: generan información sobre si el agente microbiano es
susceptible, intermedio o resistente. Se realiza por el método de difusión
en disco se basa en la colocación de discos impregnados con
antibióticos en placas de agar inoculadas con el microorganismo que
esta probándose. Después la incubación se mide el diámetro del zona de
inhibición que rodea cada disco, cada combinación de microorganismos
antibiotico tiene medidas deferentes que implican que es susceptible,
intermedio o resistente
 Métodos semicuantitativos determinan la concentración mínima de un
antibiótico que inhibe el crecimiento de un microorganismo en particular, sus
resultados son valores numéricos que indican si un microorganismo es
sensible, intermedio, resistente o no susceptible , se usa en bacterias,
micobacterias y anaerobias.