Uji Protein

Muhammad Radifar, S.Farm.,M.Biotech.

DIII Analis Kesehatan
STIKes Guna Bangsa Yogyakarta
2018
Macam Uji Protein & Asam
Amino
 Uji Ninhidrin (Analisis asam amino bebas)
 Uji Biuret (Analisis ikatan peptida)
 Analisis sulfur dalam asam amino (sistein)
 Denaturasi protein
 Pengendapan protein pada titik isoelektrik (pI)
 Reaksi Xantoprotein (Triptofan, tirosin, fenilalanin)
 Reaksi Millon (Tirosin)
 Reaksi Hopkin-Cole (Triptofan)
 Uji Ninhidrin
 Uji yang khusus mendeteksi asam amino
 Protein juga dapat terdeteksi bila dihidrolisis dahulu
 Menghasilkan CO2, senyawa aldehida, dan kompleks ungu
 Uji Biuret
 Uji biuret berdasarkan terbentuknya kompleks Cu2+ dan
biuret yang berwarna ungu.
 Uji biuret memberikan hasil yang positif saat Cu2+
berinteraksi dengan ikatan peptida (ikatan antara amina
dan karboksilat) pada protein.
 Meski namanya uji biuret namun pada kenyataannya
dalam reagen tidak menggunakan biuret.
 Warna yang dihasilkan memiliki λmax 540 nm, dan
intensitas warnanya sebanding dengan konsentrasi
protein.
Analisis sulfur

 Gugus sulfihidril dapat bereaksi dengan Pb asetat

dalam suasana basa, menghasilkan endapan PbS
(timbal sulfida) yang berwarna hitam.
Denaturasi Protein

 Protein dapat mengalami denaturasi saat terkena

suhu tinggi atau pH ekstrim
 Denaturasi protein umumnya terlihat dari
terbentuknya koagulasi berwarna putih
Pengendapan protein pada pI

 Muatan total protein mempengaruhi tingkat polaritas

protein, semakin netral maka protein semakin
nonpolar.
 pI merupakan titik pH di mana protein bermuatan
netral
 Saat protein berada dalam lingkungan pH yang sama
dengan pI-nya maka protein menjadi cenderung non
polar dan dapat mengendap dalam aquadest
 Reaksi Millon
 Reaksi ini khusus untuk mendeteksi gugus
fenol yang dibawa oleh tirosin.
 Gugus fenol dapat bereaksi dengan
reagen Millon membentuk senyawa merah-
pink.
 Reagen Millon ialah merkuri sulfat dalam
asam sulfat pekat atau merkuri nitrat dalam
asam nitrat pekat
 Adanya endapan kuning bukan berarti
reaksi positif, melainkan timbul karena HgO
terbentuk oleh suasana yang terlalu basa.
Reaksi Xantoprotein

 Senyawa aromatik (tirosin, fenilalanin, triptofan) dapat

mengalami nitrasi menjadi senyawa berwarna kuning
hingga jingga.
 Nitrasi dilakukan menggunakan asam nitrat pekat.
 Reaksi Hopkin-Cole
 Reaksi ini terjadi akibat reaksi antara triptofan dalam
protein sampel dengan asam glioksilat dan asam
sulfat pekat membentuk senyawa berwarna ungu.
 Asam glioksilat terbentuk dari asam asetat glasial
yang terkena sinar matahari.
 Larutan uji + asam asetat glasial, asam sulfat pekat
ditambahkan hati-hati hingga terbentuk 2 lapisan.
Pada perbatasan akan muncul warna ungu.
Sekian & Terima kasih