CATÁLISIS ENZIMÁTICA

MSC. DAISSY LORENA RESTREPO SERNA

CONCEPTOS

 Enzima: Son proteínas que catalizan reacciones químicas en los seres vivos.
Las enzimas son catalizadores, es decir, sustancias que, sin consumirse en una reacción,
aumentan notablemente su velocidad
 Sustrato: Sustancia sobre la que actúa una determinada enzima
CINÉTICA MICROBIANA

 El crecimiento microbiano es un proceso auto catalítico

 No habrá crecimiento sin la presencia de al menos una célula viable y la tasa de crecimiento aumentará de
acuerdo a la biomasa viable presente

 Una celula bacteriana se divide por fisión binaria para producir dos células hijas

 En el tiempo (t), una sola célula se dividirá para producir dos células; después de que haya transcurrido otro
tiempo de duplicación estarán presentes cuatro células; después de otro tiempo ocho y así sucesivamente

 Por tanto, la tasa de aumento así como el número total de células se duplica cada tiempo de duplicación que
transcurre
CICLO DE CRECIMIENTO DE POBLACIONES
CINÉTICA ENZIMÁTICA

La cinética estudia las velocidades de las reacciones y la forma en que éstas cambian en respuesta a
modificaciones experimentales.

Las enzimas aumentan la velocidad sin modificar la constante de equilibrio de la reacción

𝑲𝟏
𝑬+𝑺 𝑬+𝑷
𝑲𝟏
CINÉTICA ENZIMATICA

• Las catálisis enzimática es esencial

para sistemas vivos.
• Permite que procesos químicos no
favorables energéticamente se lleven a
cabo en condiciones biológicas:
Medio acuoso, pH neutro,
temperatura y presión bajas.

• Cuando la enzima se desnaturaliza,

pierde su estructura y por lo tanto su
actividad catalítica. 6
CINÉTICA ENZIMÁTICA

 Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas

 La velocidad de una reacción catalizada por una enzima depende de:

 La concentración de moléculas de sustrato [S]

 La temperatura
 La presencia de inhibidores
 pH del medio, que afecta a la conformación (estructura espacial) de la molécula enzimática
CINÉTICA ENZIMÁTICA

 La velocidad de reacción aumenta a medida que lo hace la concentración de sustrato hasta que llega al
punto de saturación
REACCIÓN CATALIZADA POR ENZIMAS
EFECTO DE LA CONCENTRACIÓN DE SUSTRATO
PARTES DE LA ENZIMA

 Sitio catalítico
 Sitio de unión
¿CÓMO ACTÚAN LAS ENZIMAS?
¿CÓMO ACTÚAN LAS ENZIMAS?
¿CÓMO ACTÚAN LAS ENZIMAS?
¿CÓMO ACTÚAN LAS ENZIMAS?
FORMACIÓN DEL COMPLEJO ENZIMA-SUSTRATO
FORMACIÓN DEL ESTADO DE TRANSICIÓN
FORMACIÓN DEL COMPLEJO ENZIMA-PRODUCTO
FORMACIÓN DEL PRODUCTO
¿CÓMO ACTÚAN LAS ENZIMAS?

Dos modelos de la interacción enzima-sustrato.

En este ejemplo, la enzima cataliza una reacción de fragmentación.
(a) Modelo de cerradura-llave. En este primer modelo, el lugar activo de
la enzima ajusta el sustrato de la misma manera que una cerradura a una
llave.
¿CÓMO ACTÚAN LAS ENZIMAS?

(b) Modelo del ajuste inducido. En este perfeccionamiento del modelo de

cerradura-llave, tanto la enzima como el sustrato sufren una distorsión al
unirse. Se fuerza al sustrato a adoptar una conformación que se aproxima al
estado de transición; la enzima mantiene el sustrato en tensión.
EFECTO DEL PH Y LA TEMPERATURA EN LAS REACCIONES
ENZIMATICAS
INHIBIDORES
 TEORÍA DE LA ACCIÓN ENZIMÁTICA

L. Michaelis M. Menten

 En 1913 propusieron una ecuación de velocidad que explica el

comportamiento cinético de las enzimas
K1 K2
E+S ES E + P
K-1
 MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

• Las reacciones catalizadas enzimáticamente ocurren en dos etapas:

Primera etapa, se forma el complejo enzima-sustrato.
Segunda etapa, el complejo enzima-sustrato se transforma en el producto,
liberando el enzima.

K1 K3 • V1 = k1 [E] [S]
E+S ES E + P • V2 = k2 [ES]
K2
• V3 = k3 [ES]
 TEORÍA DE LA ACCIÓN ENZIMÁTICA

K1 K2
E+S ES E + P
K-1
Concentración

 El complejo ES se encuentra en
estado estacionario

 Bajo condiciones de saturación,

toda la enzima interviene en la
formación del complejo ES

 Cuando toda la enzima se

encuentra en forma de complejo ES,
la velocidad de la reacción es la
máxima posible (Vmáx)
Tiempo
SUPOSICIONES EN LOS ANÁLISIS DE CINÉTICA ENZIMÁTICA

 La producción del producto es lineal con el tiempo durante el intervalo de

tiempo utilizado
 La concentración de sustrato excede ampliamente la concentración de
enzimas. Esto significa que la concentración libre del sustrato es muy
cercana a la concentración que se agregó, y que la concentración del
sustrato es constante a lo largo de todo el ensayo.
 Una sola enzima forma el producto
 La creación espontánea de productos sin enzimas es insignificante.
 MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

• En equilibrio la V de formación de ES es igual a la velocidad de descomposición.

V1 = V2 + V3

k1[S] [E] = (k2 + k3 )[ES]

[E] = [ET] - [ES]

donde la expresión (k2+ k3)/k1 se ha sustituído por KM, o constante de Michaelis-Menten

MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

K1 K3
E+S ES E + P
K2

La velocidad de reacción = la velocidad de formación del producto:

𝑘3 𝐸𝑇 [𝑆]
v = v3 = k3 [ES] =
𝐾𝑀 +[𝑆]
La velocidad máxima (Vmax) se obtiene cuando el enzima está saturada
por el S.

Vmax = k3 [ET]
 MODELO CINÉTICO DE MICHAELIS-MENTEN

Si introducimos el parámetro Vmax en la ecuación general de la velocidad

obtenemos la expresión más conocida de la ecuación de Michaelis-
Menten:

𝑉𝑚𝑎𝑥 [𝑆]
𝑣=
𝐾𝑀 + [𝑆]
KM: CONSTANTE DE MICHAELIS
Km: concentración de sustrato a la cual la velocidad de la reacción es ½ Vmax
K1 K2
E+S ES E + P
K-1

K2 + K-1 K-1
Km = Si K2 <<< K-1 Km =
K1 K1
 Km índice de afinidad

Km alta poca afinidad K-1 > K1

Km baja alta afinidad K-1 < K1

 Valores de Km próximos a las [S] fisiológicas

 𝑘2 𝐸 0[𝑆]
𝑣0 =
INTERPRETACIÓN DE K2 𝐾𝑚 + [𝑆]

• k2 también conocida como kcat o número de recambio es la constante

de velocidad para el paso determinante de velocidad.

• kcat se define como el número de moléculas de producto formadas a

partir del sustrato por una enzima en una unidad de tiempo.

• El cociente
kcat , denominado como cociente de especificidad permite
K𝑚
comparar la eficiencia catalítica de diferentes enzimas o de la
transformación de dos sustratos diferentes por la misma enzima.
ECUACIÓN DE MICHAELIS-MENTEN

[S]
Vo = Vmáx
Km + [ S ]

[ S ] << Km
Vmáx
Vo = [S]
Km

[ S ] >> Km [ S ] = Km
Vo = Vmáx Vo = ½Vmáx
CÁLCULO DE KM Y VMAX POR ECUACIÓN DE LINEWEAVER-
BURK

Km [S]
Vmáx Vo = Vmáx
Km + [ S ]

1 Km + [ S ]
=
V0 Vmáx [ S ]

1
V0
= ( )
Km
Vmáx
1
[S]
+
1
Vmáx

y = a x + b
CÁLCULO DE KM Y VMAX POR ECUACIÓN DE EADIE-HOFSTEE

[S]
Vo = Vmáx
Km + [ S ]

𝑽𝒎𝒂𝒙 𝑽𝒎𝒂𝒙 𝑲𝒎 + 𝑺 𝑲𝒎 + 𝑺
= =
𝑽 𝑽𝒎𝒂𝒙 𝑺 𝑺

𝑽𝑲𝒎 𝑽[𝑺] 𝑽𝑲𝒎

𝑽𝒎𝒂𝒙 = + = +𝑽
[𝑺] [𝑺] [𝑺]

𝑽
𝑽 = −𝑲𝒎 + 𝑽𝒎𝒂𝒙
𝑺

𝒚 = 𝒂 𝒙 +𝒃
APLICACIONES INDUSTRIALES
Aplicación Enzimas utilizadas Usos
Producción de azucares desde el almidón,
como por ejemplo en la producción de
jarabe de maíz
Amilasas de hongos y En la cocción al horno, cataliza la rotura
plantas del almidón de la harina en azúcar. La
Procesado de alimentos fermentación del azúcar llevada a cabo
por levaduras produce el dióxido de
carbono que hace “subir” la masa
Los fabricantes de galletas las utilizan
Proteasas para reducir la cantidad de proteínas en la
harina
Para pre-digerir el alimento dirigido a
Alimentos para bebés Tripsina
bebés
APLICACIONES INDUSTRIALES

Aplicación Enzimas utilizadas Usos

Las enzimas de la cebada Las enzimas liberadas degradas el almidón y las proteínas
son liberadas durante la para generar azúcares sencillos, aminoácidos y péptidos
fase de molido en la que son usados por las levaduras en el proceso de
elaboración de la cerveza fermentación
Enzimas de cebada
Ampliamente usadas en la elaboración de cerveza para
producidas a nivel
Elaboración de sustituir las enzimas naturales de la cebada
industrial
cerveza
Eliminan la turbidez producida durante el almacenamiento
Proteasas
de la cerveza
Amiloglucosidasas y Produccion de cerveza baja en calorías y ajuste de la
pululanasas capacidad de fermentación
Acerolactatodecarboxilasa Incrementa la eficiencia de la fermentación mediante la
(ALDC) reducción de la formación de diacetilo
APLICACIONES INDUSTRIALES

Aplicación Enzimas utilizadas Usos

Zumos de frutas Celulasas, pectinasas Aclarado de zumos de frutos
Industria láctea Renina, derivado del Producción de queso, usada para hidrolizar proteínas
estómago de animales
rumiantes jóvenes (como
terneros y ovejas)
Lipasas Se introduce durante el proceso de producción del
queso Roquefort para favorecer la maduración
Lactasas Rotura de la lactosa en glucosa y galactosa
Digestión de Papaína Ablandamiento de la carne utilizada para cocinar
carne
EJERCICIO 1
Los siguientes datos experimentales fueron obtenidos durante un estudio de la
actividad catalítica de una peptidasa intestinal con el sustrato glicilglicina de
acuerdo a la siguiente reacción:
𝐺𝑙𝑖𝑐𝑖𝑙𝑔𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎 + 𝐻2𝑂 → 2 𝐺𝑙𝑖𝑐𝑖𝑛𝑎
[S] (mM) V0 (μM/min) Sabiendo que [E]=0.3μM, determina la
1.6 0.21 eficiencia catalítica de la enzima.
2.0 0.24
3.0 0.28
4.0 0.33
8.0 0.40
16.0 0.45
 EJERCICIO 2
Se determinó la velocidad inicial a varias concentraciones de sustrato para una
reacción catalizada enzimáticamente de acuerdo con los siguientes datos:

[S] /105(M) V0 /106(mol/min) a)Menciona si la reacción sigue una cinética de acuerdo al

modelo de Michaelis-Menten.
2.5 0.21
4.0 0.24 b) Si kcat es 8.0 𝑥 102, ¿Cuál fue la
concentración de enzima utilizada?
6.0 0.28
8.0 0.33 c)Calcula v0 cuando [𝑆] = 5.0 𝑥 10−5 y [𝑆] = 5.0 𝑥 10−1
16.0 0.40
d)Si se duplicara la concentración de la enzima, ¿Cómo
20.0 0.45 se verían afectados los valores de Km, kcat y Vmax?