MEDIA DAN REAGENSIA

PEMERIKSAAN JAMUR
 Pendahuluan
• Media : adalah suatu substansi yang
mengandung nutrisi yang diperlukan untuk
pertumbuhan

• Reagensia ; Suatu larutan yang diketahui

formulanya yang digunakan untuk
mengetahui suatuhasil dari suatu reaksi.
 Klasifikasi Media
• Menurut susunannya media Jamur terbai 3
• 1. Media alami
• Komposisi tdk dapat diketahui secara pasti
• setiap waktu karena komposisi bahan dapat
• berubah-ubah.
• Contoh : Kentang
Jagung
Serangga
 Klasifikasi Media
• 2. Media Semi Sintetik
• Media yang menggunakan bahan campuran
• berupa bahan pertanian dan kimia yang
• komposisinya dapat diketahui
• Contoh: Potato Dektrose agar (PDA)
• 3. Media Sintetik
• Media yang komposisinya telah diketahui
• Contoh : Sabaroud Dextrose Agar (SDA)
• Czapek agar (CZA)
 Klasifikasi Media menurut fungsinya
• 1 Media Isolasi
• Sabaroud Dextrose agar
• Sabaroud Dextrose agar modifikasi
• 2. Media Differeansial
• Potato Dextrose agar
• Malt Extract agar
• Eosin Mthylene blue agar
• Brain Heart Infosion
• Urea agar
Rice Cream agar
Chrome agar
•
 Agar Saboraud Dextrose (SDA)
Bahan :
• Dextrose............ 20 g
• Neopepton........10 g
• Agar................... 20 g
• Air Destilasi........1000 ml
 Cara pembuatan :
• Sterilkan dalam otoklaf pada suhu 120 C
selama 10 menit.
• Sesuaikan pada pH akhir 6,8- 7,0
•
 SDA Modifikasi& Fungsinya
SDA modifikasi
Media SDA dtambah dengan antibiotika
• 1. 0,5 g Actidione (sikloheksimid) /liter
• 2. 20 unit penicillin /ml atau 0,005 %
• 3. 40 unit streptomycin/ml
• Ke tiga antibiotika menghambat
pertumbuhab Asperillus fumigatus.
Crytococcus neoforman & Allescheria boydii
 SDA Modifikasi & Fungsinya
• 4. 0.005 % Chloramphenicol/l
• Menghambat pertumbuhan bakteri
• Fungsi bahan
• Dextrose sebagai sumber Carbon
• Pepton + sumber Nitrogen
• Agar untuk memadatkan media
• Aqudest pelarut
 Catatan:
• Tambahkan secara aseptik antibiotika
pada media dasar bila suhunya telah 50
C. Aduk sampai rata tanpa menimbulkan
• gelembung.
 Agar Larutan Czapek
Fungsi : Isolasi mikroba acidofilic (jamur)
Bahan :
• Air.............................................1000 ml
• NaNO3......................................3 gr
• K2GOI4..................................... 1 gr
• MgSO4 . 7H2O..........................0,5 gr
• KCL........................................... 0,5 gr
• FeSO4 . 7H2O........................... 0,01 gr
• Sukrosa.................................... 30 gr
• Agar.......................................... 15 gr
 Metode:
• Tambahkan sukrosa sebelum sterilisasi
akhir.
• Sterilkan pada tekanan 15 pond (121 C)
selama 20 menit.
• Setelah dingin tuangkanlah kedalam
cawan petri steril sebanyak 25
ml/cawan.
 Agar Darah
Fungsi : Untuk pembiakan Histoplasma

Bahan :
• Brain heart Infusion...........37 g
• Agar....................................15 g
• Air destilasi.........................1000 ml
 Cara pembuatannya :
• Sterilkan dalam otoklaf pada suhu 121C
selama 15 menit,
• pindahkan botol tersebut dari otoklaf dan
dinginkan dalam pendingin air hingga suhu
50 C.
• Tambahkan secara aseptik 50 ml darah
kelinci atau domba dan aduklah sampai
merata.
 Agar Ekstrak Maltosa
Bahan :
• Air Destilasi....................................1000
ml
• Ekstrak Maltosa............................. 20 gr
• Pepton........................................... 1 gr
• Dektrosa ( Glukosa)....................... 20 gr
• Agar............................................... 20 gr
 Cara pembuatan :
• Tambahkan dektrosa sebelum sterilisasi
akhir.
• Lakukan sterilisasi pada tekanan 15
pound (121 C ) Selama 20 menit.
• Setelah dingin, tuangkan kedalam
cawan petri sebanyak 21 ml/cawan
 Potato dextrose agar(PDA)
Fungsi : Meningkatkan pertumbuhan spora &
pigmen
Bahan :
• Potongan Kentang..............................200 gr
• Air Destilasi hingga..........................1000 ml
• Dektrosa..............................................10 gr
• Agar.....................................................15 gr
• Aquadest...................................................... 1 liter
 Cara Pembuatan :
1. Didihkan kentang dalam air pada suhu 60 C
Selama 1 jam.
2. Saringlah dengan menggunakan kertas saring.
3. Tambahkan dektrosa agar, larutkan dengan
pemanasan.
4. Saringlah dengan menggunakan kain dan ayakan.
 Cara Pembuatan
5. Tambahkan air hingga 1000 ml
6. Isikan kedalam tabung dan masukan
kedalam otoklaf pada suhu 121 C; 15 psi,
selama 10 menit.
7. Biarkan dingin dengan cara dimiringkan
menggunakan benda yang tebal kira-kira 1
cm.
 Agar Tepung Beras/Rice
cream agar
Fungsi untuk identifikasi spesies candida
Bahan :
• Beras Putih............................ 8 gr
• Air Destilasi........................... 25 ml

Cara : Letakan pada cawan petri dan masukan

otoklaf pada suhu 121 C selama 20 menit.
 Agar Morfologi Ragi
(Wickerham)
Bahan :
• Agar
Morfologo Ragi (bacto 0393-15)..........17,5 gr
• Air Destilasi.....................................1000 ml
 Cara pembuatan :
• Panaskan hingga mendidih untuk
melarutkan media secara sempurna.
• Lakukan sterilisasi dalam botol dengan
otoklaf pada suhu 121 C selama 15
menit.
• Dinginkan sampai suhu 50-52 C,
tuangkan kedalam cawan petri, kira-kira
20 ml/cawan.
 Agar Urea Christensen
Media : Identifikasi
Bahan :
• Pepton......................................... 0,1 gr
• Dextrosa...................................... 0,1 gr
• NaCl............................................ 0,5 gr
• KH2PO4...................................... 0,2 gr
• Agar............................................. 1,5 gr
• H20.............................................. 100 gr
• Phenolred................................... 0,0012 gr
(0,012/1)
 Cara pembuatan :
• Bahan-bahan dicampurkan dan diencerkan
dalam tempat air.
• Sesuaikan pH 6,8 , Tabung dalam 4,5 ml
aliquots dan masukan dalam otoklaf dengan
tekanan 15 pound selama 10 menit.
• Kemudian pada setiap tabung tambahkan 5
ml larutan Urea Filter Seitz 20 %.
• Miringkan dan biarkan mengeras. Kuning
orange.................merah muda.
 Basal Fermentation Broth
Bahan :
• Ekstrak bubuk ragi......................... 55 gr
• Pepton.......................................... 7,5 gr
• Air Destilasi...................................1000
ml
 Cara pembuatan :
• Tambahkan Bromthymol blue secukupnya
untuk memberikan warna hijau yang cukup
rata.
• Masukan 6 ml kedalam tabung yang
berukuran 150 x 12 mm yg berisi bahan dg
ukuran 50 x 6 mm. Sterilisasikan dalam
otoklaf. Tambahkan 1 ml larutan glukosa 6 %
yang steril kedalam 1 tabung.
 Cara pembuatan
• Pada tabung kedua tambahkan 1 ml maltosa6
% dengan cara yang sama ( yang disterilkan
dengan filtrasi Seitz).
• Teruskan proses untuk tiap-tiap gula yang
digunakan. Digunakan larutan Raffinosa 14%.
 Media Asimilasi Karbohidrat
Konsentrasi 10%
Bahan :
• Basa Nitrogen............................... 6,7 gr
• Air Destilasi................................. 100 ml
• Metode :
• Lakukan sterilisasi dengan filtrasi.
• Isikan dalam botol bertutup,
• Penyimpanan masukan dalam lemari es.
 Media Asimilasi Nitrat ( Wicherman)
Media Konsentrasi Tenfold
Bahan :
• Basa karbon ragi.......................11,7 gr
• Air Destilasi.............................. 100 ml
• Cara membuatnya:
• Lakukan sterilisasi dengan filtrasi.
• Masukan dalam botol yang bertutup.
• Simpan dalam lemari es
 Agar Dua Persen
Bahan :
• Agar..............................................20 gr
• Air Destilasi.................................. 1000 gr

Cara membuatnya:
• Panaskan sampai larut didalam otoklaf 121 C
selama 15 menit,
• bagilah 13,5 ml/tabung reaksi untuk menjadi
agar
 Agar Ekstrak Ragi
Bahan :
• Ekstrak Ragi.....................................1 gr
• Bufer Fosfat.....................................2 ml
• Agar................................................20 gr
• Air Destilasi................................1000 ml
 Cara pembuatan :
• Campurkan semua bahan tersebut.
• Masukan dalam otoklaf selama 15
menit pada temperatur 121 C.
• Bagilah 25 ml/ plate.
REAGENSIA
 KOH 10% dengan Glycerol
Fungsi : Untuk pemeriksaan mikroskopis
K OH melarutkan sel epitel
Glycerol membuat sediaan tdk cepat kering
Bahan :
• Kalium Hidroksida...............................10 gr
• Gliserol...............................................10 ml
Tambahkan air destilasi menjadi 100 ml
larutan.
 Lactophenol cotton blue
Sel jamur mycelium mudah menyerap warna
Larutan ini sehingga morfologi tampak lebih
jelas
Bahan :
• Kristal fenol..................................20 gr
• Asam laktat...................................20 gr
• Gliserol........................................ 40 ml
• Air Destilasi................................. 20 ml
 Cara pembuatan :
• Larutkan 0,05 gr “bubuk cina blue”
(Poirrer’s blue) dalam air destilasi.
• Tambahkan pada campuran tersebut,
fenol asam laktat dan gliserol.
 Teknik Pengecatan Gram
1. Buatlah sediaan dan fixasi dengan panas.
2. Tuangkan sediaan dengan kristal violet dan
tambahkan 5 tetes Na bikarbonat.
3. Cuci dengan air.
4. Warnai dengan gram jodium selama 2 menit.
5. Cuci dengan air.
6. Hilangkan warna sampai warna ungu tidak ada
disediaan.
 Teknik Pengecatan Gram
7. Cuci dengan air
8. Lakukan pewarnaan dengan safranin selama
15 menit.
9. Cuci dan keringkan.
 Pewarnaan wright
Bahan :
• Bubuk wright.................................0,3 gr
• Gliserol netral..................................3 ml
• Methyl alkohol, bebas aceton........97 ml
 Cara pembuatan :
• Haluskan bubuk wright dalam mortil.
• Tambahkan gliserol dan gerus terus sampai rata.
• Tambahkan methyl alkohol dan campurlah.
Biarkan selama semalam dalam tempat yang
tertutup rapat.
• Saringlah, Biarkan beberapa hari sebelum
dipakai.
• Simpanlah didalam botol yang berwarna gelap.
 Pewarnaan Modifikasi
Asam Kinyoun
1. Buatlah sediaan tipis dari kultur/biakan
2. Warnai sediaan dengan carbol fuchsin
selama 3-5 menit.
3. Cuci dengan air.
4. Hilangkan warnai dengan H2SO4 1% sampai
sediaan berwarna kemerahan (faint pink)
5. Cuci dengan air
 Buffer fosfat 0,2 m, pH 6,8
6. Lakukan pewarnaan dengan methylen blue
selama 1 menit.
7. Cuci dan keringkan.
 Hasil:
• Filamen Nocardia akan memberikan warna
merah dengan carbol fuchsin.
•
• Nocardia akan kehilangan bahan asamnya
bila dilakukan dengan biakan media rutin.
 A. Cairan Carbolfuchsin
Bahan :
• Fuchsin........................................4 gr
• Ethyl alkohol 95%........................20 ml

Larutkan bahan tersebut dalam alkohol

selama 24 jam, tambahkan :
Fenol (conc).................................8 ml
Air destilasi..................................100 ml
 B. Destaining Agent

Bahan :
• Asam sulfat..................................1 ml
• Air destilasi...................................99 ml
 C. Cairan Methylen Blue :
Bahan :
• Methylen blue..............................0,3 g
• Etil alkohol....................................30 ml

Encerkan dengan air destilasi sampai 100 ml.

 Pewarnaan Asam Schiff Priodik(PAS)

 Pewarnaan Asam Schiff Priodik(PAS)

(Modifikasi untuk kulit,rambut,kuku,
cairan tubuh)

A. Bahan :
• Asam periodik................................. 5 gr
• Air Destilasi................................ 100 ml
 B. Cairan Fuchsin Basa
Bahan :
• Fuchsin basa .................................0,1 gr
• Etil alkohol 95% ............................ 5 ml
• Air Destilasi................................... 95 ml
 Cara membuatnya :
• Tambahkan alkohol kedalam air dan
campurkan.
• Secara hati-hati tambahkan fuchsin basa
kedalam larutan tersebut.
• Aduklah dengan menggerakan botol.
 C. Cairan Natrium Meta Bisulfat
(Na2S2O5)
Bahan :
• Natrium meta bisulfat.................... 1 gr
• IN HGI............................................ 10 ml
• Air destilasi.................................... 190 ml
• Bahan ini berwarna putih, jika ada
perubahan warna atau berbau maka harus
dibuat bahan yang baru. Jangan dimasukan
dalam tempat yang terbuat dari logam.
 Buffer fosfat 0,2 m, pH 6,8
• Larutan A :
KH2PO4.................................27,22 gr
Air Destilasi........................... 1000 ml
Sterilkan dengan otoklaf.
• Larutan B :
Na2HPO4 .7 H2O.............................53,62 gr
Air Destilasi......................................1000 ml
Strilisasikan dengan otoklaf.
 Buffer fosfat 0,2 m, pH 6,8
• Kira-kira 20 ml larutan A dan 80 ml
larutan B, dibutuhkan untuk
mendapatkan pH 10,5 , pH akhir
dapat diperoleh dari NaOH 10%
steril.
 Garam Bufer fosfat
• Larutan A (0,25 m) :
NaH2PO4 .H2O...........................34,49 gr
Air Destilasi.................................1000 ml

• Larutan B :
Na2H2PO4 . 12 H2O......................89,5 gr
atau
Na2HPO4......................................35,493 gr
Air Destilasi...................................1000 ml
 Cara membuatnya:
• Kedalam 200 ml dari 17% NaCl tambahkan
14,6 ml larutan A dan 145,6 ml larutan B.
• Gunakan air destilasi steril, tambahkan
sampai volume 4000 ml.
• pH seharusnya 7,2.
• Sterilkan masing-masing kedalam otoklaf.
 Bufer Fosfat untuk Media
Ekstrak Ragi
Bahan :
• Na2HPO4........................................40 gr
• Air Destilasi..................................300 ml
• KH2PO4........................................600 gr
• Larutkan Na2PO4 dalam air destilasi.
• Tambahkan KH2PO4.
• Cairan harus mempunyai pH 6,0.
• Aturlah dengan HCl 1 N atau NaOH jika perlu
 Reagen
Gomori methenamine-silver nitrat
1. Chromin acid solution,5 %
Chromium trioxide (CrO3 )....................5 gr
Aquadest..........................................100 ml

2. Methenamine-silver nitrate solution(stock)

Silver nitrate(5% AgNO3)......................5 ml
Methenamine(3% [CH2]6N4)...........100 ml
 Reagen
Gomori methenamine-silver nitrat
3. Sodium bisulfite, 1%
Sodium bisulfite (NaHSO3).......................1 gr
Aquadest................................................100 ml

4. Borax,5%
Sodium borate (Na2B4O7 10 H2O)...........5 gr
Aquadest................................................100 ml
 Reagen
Gomori methenamine-silver nitrat
5. Gold cloride,0,1%
Gold chloride(AuCl3. HCl.3H2O).................1 gr
Aquadest...............................................100 ml
Larutan ini dibuat ketika akan dipakai

6. Sodium thiosulfate, 2%
Sodium thiosulfate(Na2S203 . 5H2O).........2 gr
Aquadest................................................100 ml
 Reagen
Gomori methenamine-silver nitrat
7. Light green stock solution
Light green,S .F.(yellow)...........................0,2 gr
Aquadest................................................100 ml
Glacial acetic acid(CH3COOH) ................0,1 ml

Untuk Counter stain reagen ini (stock) di

encerkan dengan aquadest (1: 5)
SEKIAN