Anticuerpos antinucleares

Andrés Felipe Canro Cabra

Universidad Militar Nueva Granada
Hospital Militar Central
2019.
Contenido temático
• Definición.
• Técnicas de medición.
• Consenso de 2015 para clasificación de los patrones de positividad de
ANAs.
 Definición

La forma de expresión de los ANA es variable

y su especificidad también.
Dirigidos contra componentes
Grupo diverso de anticuerpos cuya detección
macromoleculares celulalres cuya
es de utilidad en la evaluación de un grupo
localizacion es prominentemente nuclear
amplio de pacientes con enfermedades
(DNA, RNA, proteínas al igual que complejos
reumatológicas. Muchos aspectos de los ANA como
entre proteínas y ácidos nucleicos).
marcadores de enfermedad siguen en la
incertidumbre o en la controversia.
Técnicas para detección de ANAs

Técnica inicial (en desuso)

Técnica de la célula del lupus
eritematoso (LE cel).
Imagen tomada de: http://pasionbiologica.blogspot.com/2015/01/fundamento-el-lupus-
eritematoso.html

Detección de célula
Incubación de Se coloca una fagocitando núcleo de otra
una muestra de gota de sangre Tinción de célula (marcador indirecto de
sangre del en una lámina Wirght la opsonización mediada por
paciente de vidio ANA)
Técnicas para detección de ANAs

La inmunofluorescencia se desarrolló con la finalidad de realizar una prueba

mas sensible para la detección de ANA y mas reproducible.

Involucra la incubación del suero o plasma del paciente, con una línea
Inmunofluorescencia celular específica (HEp-2/HEp-2000) y se realiza detección de los
anticuerpos usando un segundo anticuerpo anti IgG marcado que se fija al
indirecta primero

Sensibilidad variable de acuerdo a enfermedad autoinmune referida siendo

hasta del 95-99% en enfermedades como el LES.
Técnicas para detección de ANAs

La inmunofluorescencia indirecta es sujeto a variabilidad

dependiendo del Kit usado, condiciones de fijación celular, la
concentración celular de los antígenos y la especificidad de los
reactantes anti IgG

Técnica que depende del observador (positividad se define de

acuerdo al grado de tinción) – bajos títulos pueden dar como
falsos negativos de acuerdo a la experticia del observador o a
la concentración de antígenos en la muestra (HEp-2 expresión
de Ro60) .
Técnicas para detección de ANAs.
ELISA

Uso de anti A pesar de que no

IgG unido a Se adiciona sustrato
para la enzima permite determinar
enzima (FA o de forma adecuada
peroxidasa) la especificidad de
Posibilidad de
los ANA, permite
realización de
identificación de la
estudios
identidad de los Acs
Reacción de cuantitativos
mediante el patrón
anticuerpo de fijación.
con antígeno
(ANA) Representación
Antigénica. (Gran
Incubación de variedad de
antígeno en una placa antígenos para gran
plástica (fijación a una variedad de
superficie) anticuerpos)
El consenso de 2015

Se propone el consenso en 2015 dado que a pesar

de que se han realizado consensos previos en 2001,
2003 y 2009 persisten problemas en la
estandarización inter-laboratorio y en la forma en
como se realiza el reporte del resultado

Discusión sobre los

patrones nucleares,
66 representantes de 15
nucleolares,
Iniciativa del ICAP países participaron de la
citoplasmáticos o
discusión.
mitóticos y patrones
complejos.
Clasificación de los anticuerpos antinucleares.
Patrones de
expresión Nucleares
clasificados como
mandatorios o que
requieren mayor
nivel de experticia

Algunos
Citoplasmáticos
anticuerpos van
dirigidos contra
epitopes
citoplasmáticos

Anticuerpos dirigidos contra

componentes Mitóticos
macromoleculares que se
expresan principalmente en el
núcleo
Clasificación de los anticuerpos antinucleares.
 Patrones nucleares
Homogéneo
Patrones de acuerdo a
reactividad del
nucleoplasma
Los patrones nucleares son definidos
Moteado (Speckled)
como cualquier tinción en la fase nuclear
de las células HEp-2, independiente de la
positividad en las células mitóticas.

NOMENCLATURA BASADA EN EN LA
REACTIVIDAD OBSERVADA EN EL Centrómero/
NUCLEOPLASMA Y LOS COMPONENTES
Patrones de acuerdo a
SUBNUCLEARES
reactividad de
componentes
subcelulares
Nucleolar
Patrones nucleares – patrón de reactividad del
nucleoplasma
PATRÓN HOMOGÉNEO
- Caracterizado por tinción homogénea y difusa del
nucleoplasma con tinción nucleolar presente de
forma usual o no teñido de forma ocasional.
- En las células en metafase se evidencia en el plato de
cromatina una tinción hialina y de apariencia
homogénea .
- Tinción citoplasmática usualmente negativa.
SE CORRELACIONA CON ANTICUERPOS DIRIGIDOS CONTRA
COMPONENTES DE LA CROMATINA. Anti DNA Bicatenaria
(dsDNA), Anti-histonas y/o Anti-nucleosomas
PATRÓN MOTEADO
- Característica distintiva de del patrón moteado es la
presencia de tinción positiva granular del
nucleoplasma en la interfase con patrón moteado
citoplasmático en las células en metafase
- Patrón grueso se caracteriza por la presencia de
patrón de tamaño intermedio sin tinción de
nucléolo y la cromatina mitótica
- Patrón fino – tinción granular fina y uniforme
que puede o no teñir el nucléolo.
Patrones nucleares – patrón de reactividad de
componentes subcelulares
PATRÓN CENTROMÉRICO PATRÓN NUCLEOLAR

- Subconjunto del patrón punteado nuclear fino

(indistinguibles).
- Caracterizado por la presencia de múltiples puntos,
discretos y uniformes distribuidos en la totalidad del - - Patrón de tinción restringido a los nucléolos de las
núcleo. Las células mitóticas muestran el patrón células en interfase.
puntiforme y moteado en alineación con el material - Subdivisón en 3 subtipos (Homogéneo, punteado y el
cromosómico condensado. grumoso)
- Nucleolo negativo para la tinción.
- Usualmente corresponde a anticuerpos reactivos
contra proteínas de los cinetocoros cromosomales
Patrones nucleares – asociación con antígenos
y enfermedades
 Patrones citoplasmáticos
Fibrilar

Moteado (Speckled)
Los patrones nucleares son definidos
como cualquier tinción en la fase
citoplasmática de las células HEp-2,
independiente de la positividad en las Reticular/mitocondrial
células mitóticas o en la fase nuclear.

Polar

Bastones y anillos (R&R)

Patrones citoplasmáticos
Patrones citoplasmáticos
Patrones mitóticos
Patrones mitóticos

Patrón caracterizado por

Tinción de la totalidad de los
tinción de los polos del huso
husos mitóticos en las células
en las células en metafase y en
en metafase (desde el polo
interfase se evidencia un único
hasta la cromatina
punto.

Patrón en Puente intercelular y

Patrón de aparato mitótico
nuclear.
(tinción moteada en interfase y
de los husos mitóticos en la
metafase y anafase)
su localización suele teñir
estructuras del final de la
telofase y citocinesis (surco de
clivaje, región medio corporal)