Anda di halaman 1dari 11

JURUSAN AGROEKOTEKNOLOGI

FAKULTAS PERTANIAN
UNIVERSITAS SULTAN AGENG TIRTAYASA

OPTIMALISASI TRANSFORMASI GEN FOLAT PADA PADI VARIETAS


MIRA-1 (Oryza sativa L.) DENGAN PEMBERIAN BERBAGAI
KONSENTRASI HIGROMISIN PADA KONDISI CAHAYA YANG
BERBEDA

USULAN PENELITIAN

ISWI ATSIRI
NIM. 4442150046

PEMBIMBING I PEMBIMBING II PENELAAH


Dr. Susiyanti, SP., MP. Prof. Dr. Nurmayulis, Ir., MP. Sulastri Isminingsih, SP., M.Si.
LATAR BELAKANG
solving
problems
BIOFORTIFIKASI
FOLAT
LOW LATAR BELAKANG Pemanfaatan bioteknologi
untuk meningkatkan folat
Rendahnya pada tanaman

problems
solving
PENELITIANTRANSFORMASI
kandungan folat
pada padi

HIGH
Tingginya GEN
malnutrisi folat dengan perantara
Agrobacterium tumefaciens

HOW PADI MIRA-1


PERAKITAN TANAMAN
Upaya untuk TRANSGENIK
meningkatkan Transgenik dengan secara in vitro dan
folat? Kandungan Folat in planta
RUMUSAN MASALAH
ruh

01 Konsentrasi Higromisin
Apakah pemberian konsentrasi higromisin yang berbeda memberikan
masi
penelitian
hipotesis

pengaruh yang berbeda terhadap efisiensi transformasi gen folat pada


tujuan
padi varietas Mira-1?
engan
a
ra-1
misin
a
02 Kondisi Cahaya
Apakah kondisi cahaya yang berbeda memberikan pengaruh yang
berbeda terhadap optimalisasi transformasi gen folat pada padi
varietas Mira-1?
aya

03 Interaksi
Apakah terdapat interaksi antara konsentrasi higromisin dengan kondisi
cahaya yangdigunakan terhadap optimalisasi transformasi gen folat
pada padi varietas Mira-1?
METODE PENELITIAN

03 04
WAKTU PENELITIAN RANCANGAN PENELITIAN
Desember 2018 s.d Metode In Vitro 06
01 Februari 2019 dan In Planta PERLAKUAN
JENIS Petak Utama: Kondisi
PENELITIAN Cahaya (Gelap, Terang)
Anak Petak: Konsentrasi
Eksperimen Higromisin (25, 50, 75
ppm)
Diulang sebanyak 3
ulangan

02 05
LOKASI PENELITIAN RANCANGAN LINGKUNGAN
Laboratorium Kultur Jaringan dan Bioteknologi
Split-plot Design dengan RAK
Jurusan Agroekoteknologi, Fakultas Pertanian,
sebagai rancangan dasar
Universitas Sultan Ageng Tirtayasa
METODE PENELITIAN

Rancangan Respon

Transformasi secara Transformasi secara


In Vitro In Planta

Efisiensi Transformasi Efisiensi Transformasi


𝐣𝐮𝐦𝐥𝐚𝐡 𝐤𝐚𝐥𝐮𝐬 𝐭𝐚𝐡𝐚𝐧 𝒉𝒊𝒈𝒓𝒐𝒎𝒊𝒔𝒊𝒏 𝐣𝐮𝐦𝐥𝐚𝐡 𝐤𝐞𝐜𝐚𝐦𝐛𝐚𝐡 𝐭𝐚𝐡𝐚𝐧 𝒉𝒊𝒈𝒓𝒐𝒎𝒊𝒔𝒊𝒏
(%) = x (%) = x
𝐣𝐮𝐦𝐥𝐚𝐡 𝐤𝐚𝐥𝐮𝐬 𝐚𝐰𝐚𝐥 𝒕𝒓𝒂𝒏𝒔𝒇𝒐𝒓𝒎𝒂𝒔𝒊 𝐣𝐮𝐦𝐥𝐚𝐡 𝐤𝐞𝐜𝐚𝐦𝐛𝐚𝐡 𝐚𝐰𝐚𝐥 𝒕𝒓𝒂𝒏𝒔𝒇𝒐𝒓𝒎𝒂𝒔𝒊
100% 100%

Lethal Dosis Higromisin Lethal Dosis Higromisin

Warna Kalus Tinggi Tanaman

Tekstur Kalus Jumlah Daun


ALAT DAN BAHAN

Alat Bahan
autoklaf, timbangan analitik, laminar air flow (LAF), benih padi varietas Mira-1, bakteri Agrobectarium
spektrofotometer, lemari pendingin, pH meter, tumefaciens strain LBA4404 yang mengandung pC1300-
sentrifuse, hot plate dan magnetic stirrer, hand sprayer, CGH1, higromisin, kanamisin, media LB (Luria Bertani),
gelas jam, erlenmeyer, gelas ukur, gelas beaker, tube 2 acetosyringone, cefotoxime, zat kimia penyusun media N6,
ml, tube corning, loop, jarum ose, pipet volumetrik, 2,4-D, casamino acid, L-prolin, alkohol 70%, agar, sukrosa,
pipet tetes, micropipet, mikrofilter, pinset, scalpel dan HCl 1 N, NaOH 1 N, aquades steril, aluminium foil, jarum
mata pisau, bunsen, cawan petri, kompor, panci, suntik, plastic wrap, kertas label, sodium hipoklorit, tween
pengaduk, corong, rak kultur, dan kamera dokumentasi. 20, detergen, dan tisu.

Cat-1 Intron
MCS
Hyg-R
t35S pr35S tNOS prUbi1 RB T-DNA
LB T-DNA

Gen OsCGH1

Kpnl Sacl
1.200 bp

Diagram Skematik Konstruk Plasmid Vektor Ekspresi pCambia1300-OsCGH1


PELAKSANAAN PENELITIAN

Transformasi secara in vitro

KULTUR BAKTERI
A. tumefaciens KO-KULTIVASI
STERILISASI
EKSPLAN
TRANSFORMASI 6
INDUKSI KALUS 4 GEN CGH1 KE
PERSIAPAN DAN
STERILISASI ALAT
2 EMBRIOGENIK KALUS PADI Dalam kondisi gelap
selama 3 hari
DAN BAHAN Media LB (Luria
Ethanol 70%, NaClO
15%, Tween, Aquades
3
Bertani) + Kanamisin
5
1 steril
+ Higromisin
Infeksi A. tumefaciens
Pembuatan stok N6, Media N6 untuk yang mengandung
antibiotik, media, dan induksi kalus+ kondisi pCAMBIA1300-CGH1
sterilisasi aqudes gelap dan terang Dalam larutan infeksi
+ acetosyringone
PELAKSANAAN PENELITIAN

SELEKSI KALUS
TAHAN PRE-REGENERASI
HIGROMISIN ANALISIS DATA
PENGAMATAN
7 EFISIENSI 9
TRANSFORMASI

10
Kalus tahan seleksi
Media N6 + 25, 50, 75
dipindahkan ke media
ppm higromisin +
kondisi gelap dan 8 pre-regenerasi
terang
PELAKSANAAN PENELITIAN

Transformasi secara in planta

PERENDAMAN KO-KULTIVASI
KULTUR BAKTERI BENIH INOKULASI A.
A. tumefaciens
tumefaciens PADA 6
STERILISASI 4 MERISTEM APIKAL
PERSIAPAN DAN
STERILISASI ALAT
2 EKSPLAN EMBRIONIK PADI Dalam kondisi gelap
selama 9 hari
DAN BAHAN Benih direndam dalam
Media LB (Luria
Bertani) + Kanamisin
3
air steril selama 2 hari
5
1 + Higromisin
pada kondisi gelap
dan terang Embrio padi disuntikkan
Pembuatan stok N6, Ethanol 70%, NaClO dengan jarum steril yang
antibiotik, media, dan 15%, Tween, Aquades telah dicelupkan ke
steril dalam inokulum A.
sterilisasi aqudes
tumefaciens
PELAKSANAAN PENELITIAN

AKLIMATISASI
PENCUCIAN ANALISIS DATA

7 SELEKSI KECAMBAH 9
TAHAN HIGROMISIN

10
Kecambah yang tahan
Benih yang berkecambah
diaklimatisasi ke
dicuci dengan cefotaxime
(300 ppm) selama 1 jam 8 media air selama 2
hari lalu dipindah ke
lalu dibilas aquades steril Kecambah ditumbuhkan media tanah
dalam aquades steril + 25,
50, 75 ppm higromisin +
pada kondisi gelap dan
terang
TERIMA KASIH

Designed by POWERPOINTSCHOOL