DNA REKOMBINAN
Nama Kelompok :
TRI SUNDARI
USI DAMAYANTI
NOPA SURIANI
RIZKANI
2.1 TEKNOLOGI DAN APLIKASI DNA REKOMBINAN
1.Digetion
2.Ligasi
3.Transformasi
4.Screening
Digetion
Merupakan proses pemotongan suatu untai ganda
DNA, baik vektor maupun gen targetnya dengan
menggunakan satu atau lebih enzim restriksi yang
sama atau berbeda jenis nya
Ligasi
Ligasi adalah suatu proses penggabungan fragmen
DNA yang saling berlinier dengan menggunakan
ikatan kovalen
Transformasi
Transformasi merupakan tehnik dasar dalam biologi
molekuler yang bertujuan untuk memasukan DNA
asing kedalam host, dan selanjutnya menggunakan
host tersebut untuk memperbanyak jumlas plasmid
secara in vivo. Metode transformasi kimiawi lebih
sering digunakan dalam pengerjaan kloning gen
screening
tahapan selanjutnya yang penting dilakukan adalah
proses screening untuk mengetahui koloni host yang
telah dimasuki oleh DNA asing (DNA target).
Jenis kloning
Menyangkup 5 langkah :
1. Isolasi
2. Fragmentasi
3. Ligasi
4. Transfeksi
5. Seleksi
PERSIAPAN DNA DALAM MELAKUKAN KOLONING
Menyangkup 5 langkah :
1. Memurnikan DNA
2. Memecah DNA
3. Memindahkan gen
4. Seleksi DNA
Manipulasi DNA
Setelah sampel murni DNA dibuat, langkah selanjutnya
dalam eksperimen cloning gen adalah pembentukan
molekul DNA rekombinan. Untuk menghasilkan
molekul rekombinan, vektor dan DNA yang akan diklon
harus dipotong pada tempat-tempat tertentu dan
kemudian digabungkan menjadi satu dengan cara yang
terkontrol.
Pemotongan dan Penggabungan Molekul DNA
Endonuklease
2. Ligase
3. Polimerase Fosfotase Alkali