4
Prinsip Kerja Spektrofotometer UV-Vis
Sumber cahaya dipancarkan melalui
monokromator. Monokromator menguraikan sinar
yang masuk dari sumber cahaya menjadi pita-pita
Panjang gelombang yang diinginkan untuk
pengukuran zat tertentu. Dari monokromator
cahaya akan melewati kuvet berisi blanko dan
kuvet berisi sampel. Jumlah cahaya yang diserap
akan menghasilkan signal elektrik pada detector,
yang mana sinyal elektrik ini sebanding dengan
cahaya yang diserap sampel.
5
Apakah perhitungan kadar gula total dengan
spektrofotometer sama dengan hasil pengujian
kadar total padatan tersebut?
Berbeda.
Pada kadar gula total terdiri dari gula reduksi dan
non reduksi jadi kadar gula total merupakan total
karbohidrat .
Sedangkan pada total padatan terlarut, hasil total
padatan terlarut yang diperoleh dari refraktometer
bukan merupakan total karbohidrat, melainkan
kadar/ konsentrasi dari molekul karbohidrat yang
mempunyai indeks refraksi seperti gula-gula
sederhana, misalnya glukosa dan fruktosa.
6
METODE ANALISIS KADAR GULA TOTAL
✘ Metode Anthrone
Prinsip :
Anthrone 9,10 dehydro-9 ketoanthrocene bereaksi dengan
karbohidrat dalam asam sulfat pekat menghasilkan warna biru
kehijauan. Warna yang terbentuk diukur serapannya pada
sprektrofotometer dengan Panjang gelombang 630 nm.
7
Pengaplikasian : Penentuan kadar gula
pada apel
✘ Bahan
Larutan anthrone, Na oksalat, Pb asetat, CaCO3,
aquades, alcohol 80%, sampel (apel)
✘ Alat
Spektro UV-Vis, hot plate, timbangan analitik, labu
ukur, lemari asam, gelas ukur, alumunium foil, pipet
ukur, pipet tetes, Erlenmeyer, mortal martil, komputer.
✘ Pereaksi :
Pereaksi anthrone 0,1% dalam asam sulfat pekat
Larutan glukosa standar 0,2 mg/ml.
8
✘ Pembuatan kurva standar
Diambil (0,0),(0,2),(0,4),(0,6),(0,8), (1,0) ml larutan
standar glukosa
Ditambahkan 5ml anthrone
Ditutup tabung reaksi dengan alumunium foil
Panaskan selama 12 menit setelah air mendidih
Dinginkan dengan air mengalir
Tuang pada kuvet
Baca absorbansi 630nm
Dibuat kurva pada Ms.Excel
9
✘ Preparasi Sampel
Sampel yang telah ditimbang sebanyak 2gram
dihaluskan ditambahkan alcohol 80%.
Menambahkan CaCO3 hingga basa.
Menutup dengan alumunium foil.
Memanaskan dengan pendingin balik. Disaring
dengan kertas watman.
Filtrat diuapkan lagi untuk menghilangkan sisa
alcohol. Penambahan Pb asetat.
Disaring dengan kertas watman. Filtrat siap
digunakan
10
Penentuan kadar gula total pada apel.
Disiapkan 1ml sari apel
Ditambahkan 5ml anthrone
Tutup tabung reaksi dengan alumunium foil
Panaskan 12menit setelah air mendidih
Dinginkan dengan air mengalir
Dituang pada kuvet hingga batas
Dibaca absorbansi pada 630nm
Hitung konsentrasi gula total sampel
11
Vol. Larutan Gula Konsentrasi Gula Absorbansi
Standar (ml) (mg/ml)
0,0 0,0 0,436
Perhitungan konsentrasi :
12
Setelah dihitung pada Ms. Excel, dihasilkan kurva dengan persamaan :
y = ax + b
y = 6,395x + 0,4267
0,927 = 6,395x + 0,4267
0,927 – 0,4267 = 6,395 x
X = 0,078 mg
1 0,04 0,800
2 0,08 0,718
3 0,12 1,095
4 0,16 1,792
5 0,20 1,556
y = ax + b
14
Kesimpulan
15
Daftar Pustaka
Silalahi RJ. 2010. Penetapan kadar ketoprofen dalam sediaan tablet secara
spektrofometri ultraviolet (skripsi). Medan : Universitas Suatera Utara.