Practica de

espectrofotometría
molecular
Andrea Suarez Montoya
Ingeniería Biológica

Daniela García Ruiz

Ingeniería Biológica
Índice
 Introducción
 Objetivos
 ¿ Que es espectrofotometría?
 ¿Como funciona un espectrofotómetro?
 Ley de Beer
 Practica de laboratorio
 Conceptos
 Resultados
 Espectro de Absorción
 Curva de calibración
 Discusión
 Conclusiones
 Bibliografía
Colorimetría - Laboratorio Quimica Analitica
 Introducción
Los métodos ópticos de análisis
químico son los que miden la radiación
electromagnética que emana o
interactúa con la materia. Estos,
tienen como objeto, la medida de la
radiación que es emitida, absorbida, o
transmitida al interactuar con las
moléculas.


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Objetivos
 General
 Utilizar la técnica de espectrofotometría,
para determinar las partes por millón
de un determinado colorante de
alimentos.
 Específicos
 Comprender los conceptos de
espectrofotometría.
 Comprender la ley de beer y sus
limitaciones



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¿Qué es espectrofotometría?
 Se denomina espectrofotometría a la
medición de la cantidad de energía
radiante que absorbe un sistema
químico en función de la longitud de
onda, de la radiación, y a las mediciones
a una determinada longitud de onda.


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 Aplicaciones de la
espectrofotometría
 La principal aplicación de la
espectrofotometría es la
determinación de la concentraciones
ya sea de sustancias químicas o de
microorganismos presentes en una
solución


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¿COMO DETERMINAR CONCENTRACIONES
POR ESPECTROFOTOMETRÍA?

Para comenzar se deben definir 3

conceptos fundamentales:

 Absorbancia
 Transmitancia
 Concentración


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Para comenzar: Espectro de
absorción

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Curva de calibración

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Ley de Beer
 Laley de Beertiene en cuenta el área
y el número de partículas qué
atraviesa un haz de luz, deduciendo
de esto la energía que queda
atrapada. Con estas variables se
desarrollo la siguiente ecuación:
 A = ε·b·c


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 LIMITACIONES DE LA LEY DE
BEER
 Solodescribe el comportamiento de la
absorción en concentraciones mucho
menor a 0,01M


 Se observa una adhesión estricta a la

ley de Beer solamente cuando la
radiación es monocromática
verdadera


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¿Como funciona un
espectrofotómetro?
 El funcionamiento de un
 Espectrofotómetro

 consiste básicamente en

 iluminar la muestra con

 luz blanca y calcular la

 cantidad de luz que

 refleja dicha muestra en

 una serie de intervalos

 de longitudes de onda.

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 Practica de laboratorio

1- Se preparo una solución de 3- Con la longitud de onda hallada,
482,8 ppm de rojo ponceau calculamos la absorbancia de las
(4R), y a partir de esta se anteriores disoluciones para crear la
crearon, distintas disoluciones curva de calibración
de:
10ppm, 15ppm, 20ppm,

25ppm, 30ppm



4- Tomamos la absorbancia de la
2- Con la disolución de 15ppm, muestra, y con esta se puede
calculamos en el espectrofotómetro, determinar las ppm del colorante
en cual longitud de onda, se tiene
mayor absorbancia.

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Conceptos


 Colorante
 Colorante artificial o sintéticos
 Colorantes azoicos


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Colorante Rojo Ponceau (4R):
 Según el Ministerio de salud (resolución
numero 10593 de16 de Julio de 1985):


 Origen: 
Colorante sintético azoico.
 Función & características: 
Colorante rojo alimentario. Muy soluble
en agua.
 Ingesta diaria: 
Máximo 4 mg/kg de peso corporal.
 Efectos colaterales: 
Desde 1976 no se utiliza en Estados
Unidos. Se ha discutido su posible efecto
cancerígeno. Colorimetría - Laboratorio Quimica Analitica
Estructura química del 4R

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Espectro de absorción: sln 15
ppm

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Curva de calibración

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Resultados
Grupo 1
 Absorbancia de la muestra: 0,803
 Ppm diluida: 28.82 ± 3,035x10-5
Grupo 2:

 Absorbancia de la muestra: 0,757

 Ppm diluida: 27,07 ± 2,850x10-5
Grupo 3:

 Ppm diluida: 29,45± 3,101x10-5

Grupo 4:

 Ppm diluida: 29.07± 3,062x10-5

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Resultados

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Resultados
Concentraciones iniciales:



 Grupo 1: Ci: 1441,25 ppm
 Grupo 2: Ci: 1353,85 ppm
 Grupo 3: Ci: 1472,5 ppm
 Grupo 4: Ci: 1453,85 ppm

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Resultados
 Promedio partes por millón de colorante
diluido: 28,6055 ± 3,012x10-5 ppm
 Concentración inicial promedio:
 CixVi=CfxVf
 Cix1ml=28,6055x50ml
 Ci= 1430,27 ppm

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Conclusiones
 Se puede concluir que la
espectrofotometría es un método
bastante preciso pues los valores dieron
todos bastante cercanos.
 Podemos concluir que un error se pudo
haber dado al medir inexactamente los
volúmenes al preparar las soluciones.
 Podemos afirmar que la solución estudiada,
sobrepasa en 7 veces, la cantidad
permitida por en invima, entidad que
regula los alimentos y medicamentos.
 Colorimetría - Laboratorio Quimica Analitica


Bibliografía
 SKOOG, D.A y WEST D.M. Química analítica. 5ª ed.
España, 2002
 Instituto Nacional de Vigilancia de Medicamentos y
Alimentos – Invima
(http://web.invima.gov.co/portal/documents/portal/
documents/root//resolucion_10593_1985.pdf).
Citado Jueves 11-nov 1:35pm
 Dirección Nacional de Servicios Académicos Virtuales
(http://www.virtual.unal.edu.co/cursos/ciencias/200
1184/lecciones/Cap05/05_04_01.htm) Citado
Sabado 13-nov 7:35pm
 Sistema de Bibliotecas - Universidad Nacional de
Colombia – SINAB
(http://www.sinab.unal.edu.co/ntc/NTC1325.pdf).
Citado Jueves 11-nov 1:43pm
Colorimetría - Laboratorio Quimica Analitica
Fin
Gracias por la atención.