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ESTERILIZACION Y MEDIOS DE

CULTIVO
CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO

ANTISEPSIA: eliminación de microorganismos patógenos de tejidos vivos.

DESINFECCION: eliminación de microorganismos patógenos de objetos


inanimados

ESTERILIZACIÓN: eliminación por separación o muerte de todo


microorganismo viable de un objeto.
METODOS DE ESTERILIZACION

 FISICOS  QUIMICOS

Calor: Seco - humedo Distintas sustancias:

Radiaciones óxido de etileno


Glutaraldehído
Filtración Formaldehído

Ultrasonido
MECANISMOS DE ACCION

1- Alterando el DNA:

2- Alterando proteínas y enzimas

3- Alterando la membrana celular


1- DNA:
- radiaciones (UV, ionizantes)
_ alquilantes (glutaraldehído,
formaldehído y óxido de etileno)
2. Proteínas y enzimas:
Calor ; ácidos y álcalis
Oxidantes : peróxido de hidrógeno Iodo
Metales pesados: mercurio
3- Membrana celular
Alcoholes
Fenoles
Agentes tensioactivos (amonios
cuaternarios, jabones, detergentes)
ESTERILIZACION

FISICOS
 CALOR: Seco -Incineración
- Flameado
- Aire caliente

- Húmedo: - Vapor (autoclave): Fluente


A presión
CALOR HUMEDO
autoclave
 VAPOR FLUENTE : 121º C x 15 min a presion de 1atm
para sustancias termolábiles* a más de 100º C

 VAPOR A PRESION:
más utilizado y más seguro: todo tipo de material de laboratorio (medios,
instrumental, ropa, etc)

*Dícese de la sustancia que se descompone o se desnaturaliza por el calor,


perdiendo, generalmente, su actividad.
ESTERILIZACIÓN: CALOR HÚMEDO AUTOCLAVE

Válvula de drenaje
VAPOR DE AGUA

PUERTA

Medio de cultivo

Fuente de calor

121ºC: 30 min
132-134ºC: 3 min (vapor
saturado)
Vapor a presión

121º C x 15 min

134º C x 7 min

Las temperaturas alcanzadas son:


1 at : 121º C; 1,5 at : 126º C y 2 at : 134º C
AIRE CALIENTE

 Horno de Pasteur o Estufas:


material de vidrio, metales, objetos
termoestables

160º C x 2 hs
170º C x 1 hs
180º C x 15minutos
Esterilización.
a.Flameado: es un procedimiento simple y eficaz, consiste en la exposición de un
objeto a efecto de la llama hasta la incandescencia. Se esteriliza de esta forma, p.
ej. ansas de cultivo de siembra.
Microbiología
ESTERILIZACIÓN: CALOR SECO
FLAMEADO: se lleva al rojo el
material de metal como ansas, lancetas,
agujas de disección.

AIRE CALIENTE (Estufas):


Esterilizante
160ºC/ 2 horas
Sirve para esterilizar material de
vidrio.
El papel y el algodón no pueden ser
esterilizados a más de 160°C
INCINERACIÓN: para destruir
material descartable contaminado.
ACONDICIONAMIENTO DE
MATERIAL
Empacado del material.

• Lava el material de laboratorio, principalmente


la cristalería con detergente, enjuaga con
abundante agua de la llave y en seguida con agua
destilada.
• Secar el material utilizando papel absorbente
para acelerar el secado.
• Empaca el material correctamente.
CAJAS DE PETRI: Corta el papel kraf, en forma de
rectángulos adecuados para la cantidad de 2 a 3
cajas. Colócalas en la parte central y Envuélvelas
según te indique tu profesor.
Se toman los extremos de Papel y se unen. Se
hace un nuevo doblez recargando ligeramente en
la caja para marcarlo, Los extremos se doblan en
forma triangular. Ya en forma triangular se doblan
hacia atrás quedando listas para esterilizar.
PIPETAS: Introduce una pequeña porción de algodón en el cuello de la pipeta,
procurando que quede lo suficientemente apretada. Con tiras de papel de 3 cm
de ancho envuélvelas, comenzando por la punta y en forma de espiral gira
hacia arriba hasta el final de la pipeta.
MATRACES:
Elaborar con algodón y gasa unos
tapones para los matraces, que
ajuste en estos, sobre estos
colocar un gorrito hecho con
papel Kraf
Frascos Autoclavables

 Botella de vidrio para esterilización


Fabricada en vidrio borosilicato 3.3.
Autoclavables a 121 a140 ºC.
Graduada en serigrafía blanca.
Tapón en polipropileno copolímero a rosca en color azul. Estriado para un mejor
manejo. El cuello de la botella posee un anillo para evitar el goteo.
Ideal para reactivos químicos y medios de cultivo
Métodos de
cultivo
CULTIVO DE MICROORGANISMOS

Laboratorio Medio de cultivo

Medio de Cultivo:
Medio que proporcione substancias nutritivas para los
microorganismos y que les permita desarrollarse, puede
ser considerado como tal.
• Las bacterias se pueden cultivar en el laboratorio gracias a los denominados
cultivos de bacterias.

• Un cultivo de bacterias es una técnica que aprovecha la capacidad de división


celular que tienen las bacterias para obtener gran cantidad de bacterias a partir de
unas pocas.

Bacterias obtenidas
durante su cultivo

Bacterias
introducidas en el
cultivo
• Para realizar un cultivo de bacterias es necesario preparar un medio de cultivo.
• Un medio de cultivo es una mezcla de nutrientes, por ejemplo, de azúcares,
proteínas, sales, vitaminas, agua, etc.
Ejemplo de un cultivo sólido
• Para conseguir un cultivo sólido, se añade a la mezcla de nutrientes y agua una
sustancia que le de una consistencia gelatinosa.

• El medio se prepara en las llamadas placas petri, que son unas cajas de vidrio o
cristal.
Placa petri Células
Medio de
cultivo sólido
Medio de
cultivo sólido

En este medio de cultivo, las


células crecen adheridas a la
superficie.
 Importancia del cultivo de microorganismos:
 Obtención de cultivos puros.
 Análisis morfológico, fisiológico, genético y otras características.
 Producción.
 Conteo de colonias (UFC)
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Los medios de cultivo se
clasifican en dos grandes
grupos
1.- Medios de cultivo vivos o animados,
formado por células vivas; huevo
embrionario para el desarrollo de
microorganismos muy exigentes (Virus,
Chlamydias, Rickettsias).
2.- Medios de cultivo muertos o inanimados,
formados por mezclas de sustancias nutritivas
para el desarrollo de microbios menos
exigentes (Bacterias, Hongos); éstos crecen en
medios vivos pero no como una exigencia. 1
Los medios de cultivo pueden clasificarse según
su consistencia en:

 Líquidos. Contienen los nutrientes antes citados, a


los cuales se les adiciona una sustancia capaz de
mantener el pH adecuado. Entre
 los más empleados están: el caldo nutritivo y el
caldo peptona.
2. Sólidos. Se obtienen agregando agar, sustancia
polisacárida e inerte obtenida de algas marinas del género
Gellidium, en una concentración de 1,5 a 2,0%, a un medio
líquido determinado.
Este conjunto, debidamente esterilizado, se vierte en una
caja de Petri o en un tubo de ensayo.

Las exigencias nutritivas y las condiciones fisicoquímicas son


similares a las de los medios líquidos.
Pero a diferencia de ellos, ofrecen la posibilidad de obtener
colonias aisladas, siempre que la cantidad del inóculo esté
suficientemente diluida.
En este caso se observa la existencia de colonias separadas
unas de otras.
3. Semisólidos. Son muy semejantes a
los medios sólidos, con la diferencia que a
estos se les disminuye la concentración
del agar agregado a 0,5%-2%. En 1 litro de
medio.
Se utilizan para la conservación de cepas
bacterianas y la observación y registro de
bacterias móviles .

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 Según la naturaleza de sus constituyentes
Medios naturales o complejos
Están constituidos por sustancias complejas de origen animal o
vegetal usualmente se complementan con el añadido de minerales y
otras sustancias. No se conocen todos los componentes del medio de
cultivo, ni las cantidades exactas en que están presentes. Ej. Extracto
de carne, extracto de levaduras.

 Medios sintéticos o definido


Se preparan a partir de ingredientes químicamente puros y por lo
tanto, Se puede conocer exactamente su composición cuali y
cuantitativa. Por su costo sólo se emplean en procedimientos
especiales.
Según su composición y utilización los
medios de cultivo se clasifican en:

Agar nutritivo
Agar sangre
Medio de Mac Conkey
Eosina Azul de
metileno
Medio de Stuart
Preparación de medios de cultivo

Pesar componentes sólidos:

encender colocar recipiente tarar


para pesar

colocar el componente
registrar la a pesar
lectura
Disolver con agua destilada: hidratar

componentes sólidos agregar agua

disolver
Preparación de medio sólido

medio líquido agregar agar

fundir al calor medio agarizado


Fraccionar y acondicionar para esterilizar

Fraccionamiento de
medio líquido

Fraccionamiento de
medio sólido
(en caliente)

Acondicionado
para esterilizar
Esterilizar en autoclave

Medios en “Pico de flauta”


Actividades………….
Técnicas de
Siembra
GENERALIDADE
S
 Para poder identificar las características morfológicas y fisiológicas, los

microorganismos deben ser separados de otras especies .

 El CULTIVO PURO O AXÉNICO es aquel que contiene un sólo tipo de

microorganismo.
CULTIVO
PURO
Los dos métodos
más frecuentes de
inoculación para
obtener un cultiv
puro son : o

Aislamient por
o por
agotamiento
estriación
 Aislamiento por
dilución en placa
Método para aislar cultivos
puros.

 Técnica de siembra por estrías


en placa

 Técnica por difusión en placa


Técnicas
de  Técnica de la placa vertida
aislamient
o  Técnica del enriquecimiento
del cultivo

 Técnica de las diluciones en


serie

 Aislamiento de una sola


bacteria
Técnicas de siembra por estrías en
placa
 Con un asa bacteriológica, se pasa una porción de la
muestra a la superficie de un medio de cultivo hecho a
base de agar y se siembra en el medio por estrías en
cuadrantes.
Siembra por aislamiento
Técnicas de siembra por difusión en placa

 Para sembrar por difusión en placa, por lo común se usa


una varilla de cristal estéril para esparcir la muestra.

 Esta operación hace posible adelgazar la muestra de tal


manera que en la superficie del agar quedan las bacterias
separadas unas de otras.
Técnica de siembra en superficie

1.: Colocar el inóculo en la placa de Petri 4: Extender el inóculo en la placa

2, 3: Esterilizar el asa de vidrio


EXTENSIÓN EN PLACA
Técnicas de siembra en placa

 Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en


tubo viene a ser un cultivo puro.

 Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada


cultivo se observa al microscopio o mediante cultivo para verificar
que es puro.
Técnicas de siembra en placa

 Una porción de una colonia que se pase a un medio de cultivo en


tubo viene a ser un cultivo puro.

 Después de una incubación apropiada, el desarrollo de cada


cultivo se observa al microscopio o mediante cultivo para verificar
que es puro.
Técnica de la placa
vertida
 El principio de la técnica de la placa vertida es la
dilución (adelgazamiento) de la muestra en tubos.

 El medio se mantiene al estado líquido a una


temperatura de 45 – 52º C para permitir que el
inóculo se distribuya adecuadamente en el medio.

 Esta técnica se hace en forma cualitativa o


cuantitativa.
Técnica de la placa vertida
Morfología de las colonias