Anda di halaman 1dari 13

SEDIAAN BIOTEKNOLOGI FARMASI

RECOMBINANT BLOOD PRODUCT


AGEN TROMBOLITIK: RETEPLASE
Anggota Kelompok
– Ni Kadek Devi Klara Sari (161200030)
– Ni Kadek Dwi Fitri Sumandari (161200031)
– Ni Ketut Indah Cahaya Dewi (161200032)
– Ni Komang Intan Prima Asri (161200033)
– Ni Komang Kartika Saraswati (161200034)
– Ni Komang Sinta Dewi (161200035)
– Ni Komang Sri Wahyuni (161200036)
Reteplase
• Reteplase adalah suatu Tissue plasminogen activator (tPA) yang
merupakan salah satu agen trombolitik. T-PA adalah protease serin yang
berperan dalam fibrinolisis yang mengubah plasminogen menjadi
DEFINISI plasmin.

• Mekanismenya dengan cara memecah satu rantai plasminogen menjadi


dua rantai yang dihubungkan oleh ikatan disulfida dan menghasilkan
MEKANISME senyawa yang disebut plasmin

• untuk dewasa : untuk dosis pertama diberikan 10 unit (dengan


catatan waktu 2 menit) diberikan 10 mL. Dosis selanjutnya diberikan
DOSIS 10 unit (30 menit setelah dosis pertama disuntikan) sebanyak 10 mL
Up Stream Process

– Sel Host
Reteplase adalah nama non-hak milik internasional yang
diberikan kepada satu tPA manusia yang dimodifikasi yang
diproduksi dalam sel E. coli rekombinan dan dijual dengan
nama dagang Ecokinase, Retavase dan Rapilysin. E. coli
merupakan vector yang digunakan dalam rekayasa genetik ini

- Sumber Gen

(t-PA) dimurnikan dari cairan kultur sel melanoma manusia.


Kultur sel ini diperoleh dari sel melanoma paru dan
metastasis dari seorang pasien bernama Bowes oleh G.
Moore pada tahun 1974. Sel melanoma manusia secara aktif
mensintesis dan mensekresikan t-PA yang digunakan untuk
pembuatan poli (A) mRNA
Cont…

MEKANISME KLONING

Pengembangan produk ini didasarkan pada


pembentukan urutan pengkodean sintesis
nukleotida yang disingkat (355 asam
amino) tPA molekul. Analog ini hanya
berisi tPA domain yang bertanggung jawab
untuk selektivitas fibrin dan aktivitas
katalitik.
Cont…

EKSPRESI GEN
(Khodabakhsh F., Dehghani Z., et al. 2013).

Transformasi sel E. coli DH5a dengan


plasmid pET15b rekombinan. Sel-sel
yang ditransformasikan disebarkan
pada lempeng agar Luria-Bertani yang
mengandung 100 mg ampisilin per ml.
Setelah budidaya pada suhu 37°C
selama 24 jam, beberapa koloni dipilih
untuk preparasi mini plasmid
Cont…

PROSES FERMENTASI
(Khodabakhsh F., Dehghani Z., et al. 2013).
• Klon tunggal sel E. coli Top10 yang mengandung
plasmid rekombinan dikultur dalam 5 ml medium pada
suhu 37°C.
• Kemudian, 1 ml kultur ini diinokulasi ke dalam 100 ml
medium Luria-Bertani yang dilengkapi dengan ampisilin
• Berbagai konsentrasi L-Arabinose kemudian
ditambahkan
• Sel diinkubasi pada suhu 37°C
• dipanen dengan sentrifugasi pada 5.000 g pada suhu
4°C selama 10 menit dan produk akhirnya disimpan
pada suhu -20°
Down Stream Process
– Proses Pemisahan Protein dengan Sel
Protein periplasmik adalah protein yang disekresikan ke
ruang periplasmik yang terletak di antara membran luar dan
dalam E. coli. Sekresi yang tepat hanya mungkin terjadi jika
protein yang diinginkan memiliki peptida sinyal terminal-N
yang dibelah setelah translokasi. Sel E. coli hasil kultur yang
mengandung plasmid rekombinan disentrifugasi dan pelet
yang diperoleh disuspensikan kembali dalam 30mM Tris

– Pemurnian Protein
1. Ultrafiltrasi
2. Ion-exchange chromatography
3. Size-exclusion chromatography
Cont…

– Modifikasi Protein
Hal ini umumnya melibatkan:
1. Penambahan berbagai eksipien (zat selain bahan
aktif yang, misalnya, menstabilkan produk akhir atau
meningkatkan karakteristik produk akhir dengan cara
lain).
2. Penyaringan produk akhir melalui filter absolut 0,22
mm untuk menghasilkan produk steril, diikuti
pengisian aseptiknya ke dalam wadah produk akhir.
3. Freeze-drying (lyophilization) jika produk dipasarkan
dalam bentuk serbuk.
Analisis Pemurnian Protein

– Analisis spektrofotometri dari uji aktivitas


trombolitik (SATA) dirancang untuk pengukuran
lisis bekuan darah, dikembangkan dengan
menggunakan pereaksi parsial waktu
tromboplastin. Pereaksi ini murah dan mudah
diakses, bila digunakan dengan benar,
menginduksi pembekuan darah lengkap cepat
(dalam beberapa menit) dari sampel plasma atau
darah lengkap.
KESIMPULAN
– Reteplase adalah suatu Tissue plasminogen activator (tPA) yang merupakan salah
satu agen trombolitik.
– Pada Up Stream Process, host yg digunakan yaitu E. coli yg memiliki keungtungan
berupa hasil panen yang tinggi, kemudahan perawatan dan genetika yang
ditandai dengan baik. Sumber gen diperoleh dari cairan kultur sel melanoma
manusia.
– Pada Down Stream Process tedapat :
a. Proses Pemisahan Protein dengan Sel,
b. Pemurnian Protein yang menggunakan Teknik ultraFiltrasi, Kromatografi
pertukaran ion, serta Size-exclusion chromatography
c. Modifikasi Protein
– Analisis Pemurnian Protein menggunakan pereaksi parsial waktu tromboplastin
(PTT) bersama dengan kalsium klorida untuk induksi seragam dan bekuan yang
sama persis.