Kelompok 6
Amanah M I (1703093)
Dwi Lestari D (1700622)
Miftah Agung F (1704248)
Putu Chandra S (1700518
Biologi C 2017
Pendahuluan
Isolasi DNA adalah proses pengeluaran DNA dari tempatnya
berada (ekstraksi atau lisis) biasanya dilakukan dengan homogenasi
dan penambahan buffer ekstraksi atau buffer lisis untuk mencegah
DNA rusak (Yuwono, 2008).
Prisnsip utama dalam isolasi DNA ada tiga yakni penghancuran
(lisis), ektraksi atau pemisahan DNA dari bahan padat seperti
selulosa dan protein, serta pemurnian DNA sehingga nantinya akan
terbentuk ekstrak sel yang terdiri dari DNA dan RNA (Corkill dan
Rapley, 2008).
Tahap Isolasi DNA :
1. Isolasi Jaringan
2. Pelisisan dinding sel dan membran sel
dengan cara penggerusan (homogenasi) sehingga nanti
dinding sel dan membran sel akan lisis.
3. Pengektrasian dalam larutan
memisahkan senyawa DNA dari protein dan lipid.
4. Purifikasi ( Pemurnian)
membersihkan hasil ekstrak dari zat-zat lainnya.
5. Presipitasi
bertujuan untuk mengendapkan protein histon, sehingga
untai-untai DNA tidak lagi menggulung (coiling) dan berikatan
dengan protein histon, sehingga DNA menjadi terlihat.
Tujuan
1. Mengetahui cara mengisolasi DNA tumbuhan, hewan dan
bakteri.
2. Mengetahui hasil elektroforesiss DNA tumbuhan, hewan
dan bakteri.
3. Menghitung konsentrasi DNA dan Rasio DNA tumbuhan,
hewan, bakteri.
4. Mengetahui faktor-faktor yang mempengaruhi kuantitas
dan kualitas DNA hasil isolasi.
Alat & Bahan
No. Nama Alat Jumlah
Mikropipet (0,5-20 μl, 20-200 μl, 200-1000 Masing-masing 1
1.
μl) unit
2. Tips Steril 1000 μl, 200 μl, 20 μl Secukupnya
3. Microtube 1,5 ml Secukupnya
4. Tisu steril Secukupnya
1. Isolasi
5. DNA Centrifuge 1 unit
6. Tabel 1.1. Alat yang Digunakan Untuk Isolasi DNA1 unit
Micropestle
7. Jarum Inokulasi 1 unit
No. Nama Bahan Jumlah
Daun tanaman selada bokor (Lactuca
1. Secukupnya
sativa)
2. Kultur Bakteri Escherichia coli Secukupnya
3. Drosophila sp. 3-4 ekor
4. Buffer ekstraksi (SDS 1%, NaCl 0,5 M) 5 ml
5. Reagen presipitasi (Isopropanol) 5 ml
6. Reagen pencuci (Ethanol 70%) 5 ml
7. ddH2O 10 ml
8. Es Batu
Tabel 1.2. yang
Bahan dihaluskan
yang Digunakan Untuk Secukupnya
Isolasi DNA
Tabel 2.1. Alat yang Digunakan Untuk Uji Kuantitatif DNA
1. Isolasi DNA
Tumbuhan
2. Isolasi DNA
Hewan
3. Isolasi DNA
Bakteri
a. Secara Direct
Bagan Alir 3.a Langkah Kerja Isolasi DNA bakteri secara direct
b. Secara Indirect + Sentrifuge
Bagan Alir 3.b Langkah Kerja Isolasi DNA bakteri secara Indirect + Sentrifuge
c. Secara Indirect
Bagan Alir 3.c Langkah Kerja Isolasi DNA bakteri secara Indirect
4. Uji Kuantitatif DNA
Dihitung berapa ml
Disimpan pada
SDS 5% , NaCl 5M, Buffer larutan yang
botol atau tube
Ekstrasi, Isopropanol dan dibutuhkan lalu
falcon yang
Etanol 70% disiapkan dilarutkan dengan
telah disediakan.
aquades
1. DNA terisolasi
Warna larutan
1. Escherichia coli bening, tidak terlihat
adanya endapan
Gambar 4.1 Hasil Isolasi DNA
Bakteri
(Dok. Kelompok 6, 2019)
4.a. Hasil Uji Kuantitatif Isolasi DNA Bakteri