Anda di halaman 1dari 18

ISOLASI DNA DAN RNA

KELOMPOK 7

Gusti Ayu Ditha Candradewi (P07134018059)


Ni Luh Putu Suci Handayani (P07134018063)
Ni Komang Ayu Widyantari (P07134018064)
Kadek Dita Pradnya Paramita (P07134018107)
Koming Risa Sridevi Novitasari (P07134018111)
I Made Kembar Karmayasa (P07134018112)
ISOLASI DNA
DNA

DNA adalah asam nukleat yang mengandung materi genetik


dan berfungsi untuk mengatur perkembangan biologis seluruh
bentuk kehidupan. DNA terdapat di nukleus, mitokondria, dan
kloroplas.
STRUKTUR DNA

DNA memiliki struktur helix


utas ganda, yang mengandung
komponen-komponen gula
pentosa (deoksiribosa), gugus
fosfat, dan pasangan basa.
Satu sel memiliki DNA yang
merupakan materi genetik dan
akan diturunkan pada
keturunannya.
ISOLASI DNA

TUJUAN MENDAPATKAN DNA TANPA


DEBRIS SEL
Prinsip Isolasi DNA

Sentrifugasi Presipitasi

• Teknik memisahkan campuran • Merupakan langkah yang


berdasarkan berat molekul dilakukan untuk mengendapkan
komponennya suatu komponen dari
• Molekul yang mempunyai berat campuran.
molekul besar akan berada di
bagian bawah tabung
• Hasil sentrifugasi akan
menunjukkan dua macam fraksi
yang terpisah, yaitu supernatan
di bagian atas dan pelet di
bagian bawah.
TAHAPAN ISOLASI DNA

Penghancuran Membran dan


Ekstraksi DNA
Dinding Sel
• Untuk mengeluarkan isi sel • Menggunakan chelating agent
• memiliki beberapa cara : Fisik dan seperti ethylenediamine
Kimiawi tetraacetic acid (EDTA) yang
• Fisik : menggerus sampel dengan berperan menginaktivasi enzim
menggunakan mortar dan pestle DNase yang dapat
dalam nitrogen cair atau dengan mendenaturasi DNA yang
menggunakan metode freezing-
diisolasi
thawing dan iradiasi .
• Kimiawi : penggunaan detergen • Dipisahkan dari kontaminan
yang dapat melarutkan lipid pada komponen penyusun sel lainnya
membran sel sehingga terjadi seperti polisakarida dan protein
destabilisasi membran sel • Denaturasi protein dengan fenol
TAHAP EKSTRAKSI DNA
TAHAPAN ISOLASI DNA

Deproteinisasi Presipitasi Pencucian dengan Etanol

• Menggunakan pelarut organik • Menggunakan etanol atau • Etanol dibuang dan pellet
fenol atau kloroform yang isopropanol dikeringanginkan, dengan
mengandung 4% isoamil • Prinsip : menurunkan kelarutan tujuan untuk menghilangkan
alkohol asam nukleat dalam air. residu etanol dari pelet DNA.
• Bergantung pada besarnya fase • DNA yang terpresipitasi akan • Penghilangan residu etanol
antara kloroform-air. terpisah dari residu-residu RNA dilakukan dengan cara
• Dilakukan dengan membentuk dan protein yang masih tersisa. evaporasi
emulsi dari air dan kloroform. • Garam-garam yang terlibat • etanol dicampur dengan
dalam proses ekstraksi bersifat ammonium asetat untuk
kurang larut dalam isopropanol membantu memisahkan
sehingga dapat terpresipitasi kontaminan yang tidak
bersama DNA, oleh sebab itu diinginkan seperti dNTP dan
dibutuhkan presipitasi kembali oligosakarida yang terikat pada
dengan etanol setelah asam nukleat
presipitasi dengan isopropanol
untuk menghilangkan residu
garam
TAHAPAN ISOLASI DNA

Penambahan Buffer TE

• Ditambahkan buffer TE ke dalam tabung yang berisi pellet


dan disimpan di dalam freezer dengan suhu sekitar -20ºC.
• Pelarutan kembali dengan buffer TE dapat memisahkan
antara RNA yang mempunyai berat molekul lebih rendah
dibandingkan DNA sehingga DNA yang didapatkan tidak
terkontaminasi oleh RNA dan DNA sangat stabil ketika
disimpan dalam keadaan terpresipitasi pada suhu -20ºC.
ISOLASI RNA
ISOLASI RNA

Salah satu teknik dasar biologi molekular yang


digunakan untuk mengetahui ekspresi suatu gen baik
pada hewan maupun tumbuhan.
ISOLASI RNA

KARAKTERISASI
ISOLASI RNA
MOLEKULAR GEN
PRINSIP ISOLASI RNA

Ekstraksi RNA

Pemurnian RNA

Presipitasi RNA
KARAKTERISASI MOLEKULAR GEN
KARAKTERISASI MOLEKULAR GEN

• Setelah isolasi RNA dilakukan, proses selanjutnya adalah


pengukuran konsentrasi RNA yang telah diisolasi
menggunakan spektrofotometri pada panjang gelombang
λ260.
• Dilakukan sintesis copy DNA (cDNA) menggunakan
Reverse Trancriptase PCR (RT-PCR). RT-PCR berbeda dengan
PCR biasa karena ada penambahan enzim Reverse
Trancriptase pada proses PCRnya.