ISOLASI DNA DAN RNA

KELOMPOK 7

Gusti Ayu Ditha Candradewi (P07134018059)

Ni Luh Putu Suci Handayani (P07134018063)
Ni Komang Ayu Widyantari (P07134018064)
Kadek Dita Pradnya Paramita (P07134018107)
Koming Risa Sridevi Novitasari (P07134018111)
I Made Kembar Karmayasa (P07134018112)
ISOLASI DNA
 DNA

DNA adalah asam nukleat yang mengandung materi genetik

dan berfungsi untuk mengatur perkembangan biologis seluruh
bentuk kehidupan. DNA terdapat di nukleus, mitokondria, dan
kloroplas.
 STRUKTUR DNA

DNA memiliki struktur helix

utas ganda, yang mengandung
komponen-komponen gula
pentosa (deoksiribosa), gugus
fosfat, dan pasangan basa.
Satu sel memiliki DNA yang
merupakan materi genetik dan
akan diturunkan pada
keturunannya.
 ISOLASI DNA

TUJUAN MENDAPATKAN DNA TANPA

DEBRIS SEL
 Prinsip Isolasi DNA

Sentrifugasi Presipitasi

• Teknik memisahkan campuran • Merupakan langkah yang

berdasarkan berat molekul dilakukan untuk mengendapkan
komponennya suatu komponen dari
• Molekul yang mempunyai berat campuran.
molekul besar akan berada di
bagian bawah tabung
• Hasil sentrifugasi akan
menunjukkan dua macam fraksi
yang terpisah, yaitu supernatan
di bagian atas dan pelet di
bagian bawah.
 TAHAPAN ISOLASI DNA
Penghancuran Membran dan
Dinding Sel
• Untuk mengeluarkan isi sel
• memiliki beberapa cara : Fisik dan
Kimiawi
• Fisik : menggerus sampel dengan
menggunakan mortar dan pestle
dalam nitrogen cair atau dengan
menggunakan metode freezing-
thawing dan iradiasi .
• Kimiawi : penggunaan detergen
yang dapat melarutkan lipid pada
membran sel sehingga terjadi
destabilisasi membran sel
Ekstraksi DNA
• Menggunakan chelating agent
seperti ethylenediamine
tetraacetic acid (EDTA) yang
berperan menginaktivasi enzim
DNase yang dapat
mendenaturasi DNA yang
diisolasi
• Dipisahkan dari kontaminan
komponen penyusun sel lainnya
seperti polisakarida dan protein
• Denaturasi protein dengan fenol
TAHAP EKSTRAKSI DNA

Deproteinisasi
• Menggunakan pelarut organik
fenol atau kloroform yang
mengandung 4% isoamil
alkohol
• Bergantung pada besarnya fase
antara kloroform-air.
• Dilakukan dengan membentuk
emulsi dari air dan kloroform.
TAHAPAN ISOLASI DNA
Presipitasi
• Menggunakan etanol atau
isopropanol
• Prinsip : menurunkan kelarutan
asam nukleat dalam air.
• DNA yang terpresipitasi akan
terpisah dari residu-residu RNA
dan protein yang masih tersisa.
• Garam-garam yang terlibat
dalam proses ekstraksi bersifat
kurang larut dalam isopropanol
sehingga dapat terpresipitasi
bersama DNA, oleh sebab itu
dibutuhkan presipitasi kembali
dengan etanol setelah
presipitasi dengan isopropanol
untuk menghilangkan residu
garam
Pencucian dengan Etanol
• Etanol dibuang dan pellet
dikeringanginkan, dengan
tujuan untuk menghilangkan
residu etanol dari pelet DNA.
• Penghilangan residu etanol
dilakukan dengan cara
evaporasi
• etanol dicampur dengan
ammonium asetat untuk
membantu memisahkan
kontaminan yang tidak
diinginkan seperti dNTP dan
oligosakarida yang terikat pada
asam nukleat
 TAHAPAN ISOLASI DNA

Penambahan Buffer TE

• Ditambahkan buffer TE ke dalam tabung yang berisi pellet

dan disimpan di dalam freezer dengan suhu sekitar -20ºC.
• Pelarutan kembali dengan buffer TE dapat memisahkan
antara RNA yang mempunyai berat molekul lebih rendah
dibandingkan DNA sehingga DNA yang didapatkan tidak
terkontaminasi oleh RNA dan DNA sangat stabil ketika
disimpan dalam keadaan terpresipitasi pada suhu -20ºC.
ISOLASI RNA
 ISOLASI RNA

Salah satu teknik dasar biologi molekular yang

digunakan untuk mengetahui ekspresi suatu gen baik
pada hewan maupun tumbuhan.
 ISOLASI RNA

KARAKTERISASI
ISOLASI RNA
MOLEKULAR GEN
 PRINSIP ISOLASI RNA

Ekstraksi RNA

Pemurnian RNA

Presipitasi RNA
KARAKTERISASI MOLEKULAR GEN
 KARAKTERISASI MOLEKULAR GEN

• Setelah isolasi RNA dilakukan, proses selanjutnya adalah

pengukuran konsentrasi RNA yang telah diisolasi
menggunakan spektrofotometri pada panjang gelombang
λ260.
• Dilakukan sintesis copy DNA (cDNA) menggunakan
Reverse Trancriptase PCR (RT-PCR). RT-PCR berbeda dengan
PCR biasa karena ada penambahan enzim Reverse
Trancriptase pada proses PCRnya.