Kelompok 2

CRP (C-Reaktif Protein)

Linda Rospita Keraba (G1C219060)
Dinda Rara Rhaudatul Jannah (G1C219075)
Ayu Purnama Asih (G1C219077)
Angelia Pattipari (G1C219116)
Mitha Erlinayati (G1C219119)
Murni Sri Astuti (G1C219126)
Hamida Umasugi (G1C219200)
 CRP (C-Reaktif Protein)
• Tujuan : Pemeriksaan CRP bertujuan untuk
mendeteksi keberadaan CRP dalam serum
darah dan mengetahui kadar CRP dalam
serum darah.
• Prinsip :
CRP ELISA dengan Metode Direct Sandwich :
Diluent sampel dan reagen terkonjugasi (anti –
CRP biotin dan HRP) ditambahkan pada sumuran
yang telah dilapisi streptovidin. CRP dalam
sampel pasien membentuk sandwich antara dua
antibodi spesifik terhadap CRP. Protein yang
tidak terikat dan terkonjugat HRP dicuci dengan
wash buffer. setelah penambahan substrat TMB,
intensitas warna sebanding dengan konsentrasi
CRP dalam sampel.
 Alat Dan Bahan

Alat
• Mikropipet
• Tip
• ELISA Reader
 Bahan
• Microwells yang dilapisi Streptavidin
• Standar CRP : 6 botol yang siap digunakan
• CRP Konjugat : 1 botol siap digunakan
• Substrat TMB : 1 botol siap digunakan
• Stop Solution : 1 botol siap digunakan
• Sampel
• 20x wash konsentrat
• Aquabides
• Serum pasien
• Preparasi
1. Sampel dan kontrol diencerkan dengan
perbandingan 1:100
5µl sampel : 495 µl sampel diluent (Standar siap
digunakan)
2. Siapkan 1x wash buffer dengan
menambahkan 1 botol (25 ml, 20x) ke dalam
475 ml aquabides, simpan pada suhu kamar (20
-25˚C)
 Prosedur
@ 10µl standar dari sampel @ 100µl konjugat Inkubasi selama 60
dan kontrol yang telah reagen ke semua well menit, pada suhu ruang
diencerkan kedalam well (20-25˚C)

Buang cairan dari

Iinkubasi selama 15 menit @ 100µl substrat TMB ke
dalam suhu ruang
@ 50µl stop solution ke
semua well,
digoyangkan perlahan
semua well. Cuci
semua well
well 3x dengan
300 µl wash
buffer untuk 1x
pencucian
Dibaca absorbansi pada
ELISA Reader, Panjang
gelombang 450nm
 Interpretasi Hasil
• CRP Normal : 0,2-10 mg/L
 Kurva Standar CRP

Standard Conc. (mg/L) OD 450 nm

Standar 1 0 0,011
Standar 2 0,005 0,156
Standar 3 0,01 0,334
Standar 4 0,025 0,978
Standar 5 0,05 1,769
Standar 6 0,1 2,324