Kelompok 4

KIMIA ANALITIK
INSTUMEN

A N G E S T I D I T YA ( 0 0 4 ) V I N N I S R I D AYA N T I ( 0 3 0 )

R E G I N A T H E R E S YA ( 0 6 0 )

LARA (062) S U LV I A N A P U T R I ( 0 7 4 )
Spektofotometri
• Terdiri dari spektrometer dan fotometer

• Spektrofotometer yaitu menghasilkan sinar dari spektrum dengan panjang gelombang tertentu
sedangkan fotometer adalah alat pengukur intensitas cahaya yang ditransmisikan atau yang di
adsorpsi.

• Spektrofotometer merupakan suatu metode analisis yang didasarkan pada pengukuran serapan
sinar monokromatis oleh suatu larutan berwarna pada panjang gelombang spesifik dengan
menggunakan monokromator Prisma atau kisi difraksi dengan detektor fototube .

• Pada umumnya ada beberapa jenis spektrofotometri yang sering digunakan dalam analisis
secara kimiawi antara lain: spektrofotometri vis, spectrophotometer UV dan spektrofotometri uv-
vis.
Instrumen Spektofotometri
• S u m b e r c a h a ya

S u m b e r c a h a ya p a d a s p e k t r o f o t o me t e r h a r u s m e m i l i k i p a n c a r a n r a d i a si ya n g s t a b i l d a n i n t e n s i t a s n ya t i n g g i
s u m b e r c a h a ya p a d a s p e k t r o f o t o me t e r u v- vi s a d a d u a m a c a m : L a m p u Tu n g s t e n ( W o l f r a m) d a n L a m p u
D e u t e r i u m.

• M o nok r om a t or

M o n o k r o ma t o r a d a l ah a l a t ya n g a k a n m e m e c a h c a h a ya p o l i k r omat i s m e n j adi c a h aya t u n gg al a t a u

m o n o k r o ma t i s d e n g a n k o m p o n e n p a n j a n g g e l o m b a n g t e r t e n t u

• Kompartemen sampel

K o m p a r te me n i n i d i g u n a k a n s e b a g a i t e m p a t d i l e t a k k a n n ya k u ve t . K u ve t m e r u p a k a n wa d a h ya n g d i g u n a k a n
u n t u k m e n a r u h s a m p e l ya n g a k a n d i a n a l i s i s

• Detektor

D e t e k t o r a k a n m e n a n g k a p s i n a r ya n g d i t e r u s k a n o l e h l a r u t a n . S i n a r k e m u d i a n d i u b a h m e n j a d i s i n ya l l i s t r i k
o l e h a m p l i f i e r d a n d a l a m r e c o r d e r d a n d i t a mp i l k a n d a l a m b e n t u k a n g k a - a n g ka p a d a r e a d e r a t a u k o m p u t e r

• Vi s u a l D i s p l a y

M e r u pak an s i s t em b a c a ya n g m e m p e r a g a k a n b e s a r n ya i s ya r at l i s t r i k , d i n ya t ak an d a l a m b e n t uk p e r s e n
t r a n s mi t a n m a u p u n a b s o r b a n .
Prinsip Kerja Spektrofotometri UV-Vis
• Spektrofotometri UV-Vis merupakan gabungan antara spektrofotometri UV dan visible. Alat ini
menggunakan dua buah sumber cahaya yang berbeda yaitu sumber cahaya UV dan sumber
cahaya visible. Larutan yang dianalisis diukur serapan sinar ultraviolet atau sinar tampaknya
konsentrasi larutan yang dianalisis akan sebanding dengan jumlah sinar yang diserap oleh zat
yang terdapat dalam larutan tersebut .

• Spektrofotometri UV-Vis mengacu pada hukum Lambert Beer, apabila cahaya monokromatik
melalui suatu media (larutan) maka sebagian cahaya tersebut akan diserap, sebagian
dipantulkan dan sebagian lagi akan dipancarkan .

• Sinar dari sumber cahaya akan dibagi menjadi dua berkas oleh cermin yang berputar pada
bagian dalam spektrofotometer. Berkas pertama akan melewati kuven berisi blanko, sementara
berkas kedua akan melewati kuven berisi sampel blanko dan sampel akan diperiksa secara
bersamaan. Adanya blanko berguna untuk menstabilkan absorpsi akibat perubahan voltase dari
sumber cahaya.
 STUDI PERBANDINGAN
A N A L I S I S V I TA M I N E M I N YA K
S AW I T M E R A H
T E R S A P O N I F I K A S I A N TA R A
METODE SPEKTROFOTOMETRI
U V- V I S D A N K C K T
Latar Belakang

Minyak Sawit Merah merupakan salah satu produk dari

pengolahan minyak sawit mentah yang mengandung
karoten dan vitamin E yang cukup tinggi. Penentuan
vitamin E dapat dilakukan dengan menggunakan
Kromatografi Cair Kinerja Tinggi (KCKT) dan
Spektrofotometer Uv-Vis.
KCKT

KCKT adalah metode yang banyak digunakan untuk

menetapkan tokoferol dan tokotrienol dalam sediaan
makanan maupun nutrisi lainnya. Semua bentuk tokoferol dan
tokotrienol dapat dipisahkan dan ditetapkan kadarnya dengan
metode KCKT baik dengan menggunakan kolom fase normal
maupun fase terbalik.

KCKT memiliki kekurangan antara lain biaya

analisis yang relatif mahal dan membutuhkan
keterampilan khusus dalam proses
pengoperasiannya.
Spektrofotometri
Uv-Vis
spektrofotometri UV-Vis merupakan instrumen yang paling
sering digunakan di laboratorium kimia analisis, salah
satunya untuk menentukan konsentrasi suatu senyawa
tunggal maupun campuran.

Penelitian ini bertujuan untuk membandingkan antara

metode Spektrofotometri UV-Vis dan KCKT dalam
menentukan konsentrasi vitamin E dalam sampel minyak
sawit merah yang telah tersaponifikasi
Metode Penelitian
Bahan : Alat :
Bahan yang digunakan dalam
Alat yang digunakan adalah seperangkat
penelitian ini adalah minyak
sawit merah yang diperoleh alat spektrofotometer UV-Vis (Cecil
dari laboratorium penelitian CE 2021 2000 Series), kuvet,
J u r u s a n K i m i a F M I PA U n t a d , mikropipet, peralatan gelas yang umum
standar vitamin E yaitu α-
tokoferol (Merck) (>96%), digunakan di laboratorium, penangas air,
etanol 95%, natrium hidroksida, corong pisah, neraca analitik,
antioksidan BHT (Butil seperangkat alat KCKT.
H i d r o k s i To l u e n ) , 2 - p r o p a n o l ,
heksan, metanol, akuades,
natrium klorida.
Prosedur Penelitian
1 . S a p o ni f i k a s i M i nya k S a w i t M e r a h d a n E k s t r a k s i Vi t a m i n E

S e b a n ya k 2 0 mL mi n ya k s a wi t me r a h d i s a p o n i f i k a s i s e l a ma 45 me n i t d a l a m e r l e n me ye r t e r tu t u p
d e n g a n p e n a mb a h a n 2 0 mL e t an o l ( 9 5 % ) , 6 0 mL Na O H 0 , 2 5 M d a n 5 0 mL B HT 0 , 3 M. E r l e n me ye r
d i t e mp a t k a n d a l a m p e n a n g a s a i r s u h u 7 0 o C d a n d i k o c o k s e t i a p 5 - 1 0 me n i t s e l a ma p r o s e s
s a p o n i f i k a s i . S e t e l a h p r o s e s s a p o n i f i k a s i , e r l e n me ye r d i d i n g i n k a n d a l a m p e n a n g a s e s d a n
d i t am bahk an 1 5 0 m L N a C l 0 , 0 2 M .

H a s i l s a p o n i f i k a s i d i ma s u k k a n k e d a l a m c o r o n g p e mi s a h , b a g i a n a t a s a d a l a h f r a k s i mi n ya k ya n g
t a k t e r s a b u n k a n , d i t e n g a h a d a l a h f r a k s i mi n ya k ya n g t e r s a b u n k a n d a n b a g i a n b a wa h a d a l a h
f r a k s i a i r ( E S A , 2 0 0 2 ) . S e l a n j u t n ya , f r a k s i ya n g t a k t e r s a b u n k a n d i t a mb a h k a n d e n g a n 7 0 ml
me t a n o l d a n d i d i a mk a n h i n g g a t e r b a g i me n j a d i d u a f r a k s i . B a g i a n a t a s di a mb i l d i t a mb a h k a n
d e n g a n 2 0 m L 2 - p r o p a n o l ( 1 % ) d a l a m h e k s a na . Fr a k s i ya n g l a r u t h e k s a n ( ba g i a n a t a s ) d i a mb i l
u n t u k a n a l i s i s d e n g a n S p e k t r o f o t o me t e r U V- Vi s d a n K C K T.
2. Ana li sis Vi ta min E denga n
M e t ode Spe k t r ofotometr i U V- Vi s c. Penent uan Pan ja ng Ge lom ba ng Maks i mu m Laruta n baku
a . Pe m b uata n L a r u tan I n d u k d iuku r absorb ans in ya u ntuk m en entuka n pa nja ng ge lo mba ng
St a n d ar Vi t a m i n E Ko n s e ntr asi 1 0 0 m aks im um pad a kisar an 28 0 - 328 nm men ggu nakan
sp ektrofoto meter U V- Vis . Pa nja ng ge lo mb ang m aksi mum
ppm
ya n g d i p e ro le h d i t e ntuka n d a r i n i l a i a b s o rb an t e r ti ng gi .
M en i mban g 0,0 1 g vit am in E murn i ,
d . Pe mbuat an Kur va Standar Men gukur a bsorb ans i ser i
m e larutka nn ya d enga n heksa n dan
l arut an stand ar 1 2,5; 17,5 ; 2 5 dan 50 ppm pad a pan jan g
m e masukka n ke da la m l abu ukur
g elo mb ang m aks im um ke mudi an d ibuat kurva bak u, d im ana
1 00 m L dan d itam bahk an heksa n a bsorb an se ba gai ord in at d an kons entras i seb aga i abs is .
hingga tanda batas. D a r i k u r va b a k u i n i d i p e r ole h p e r s am aan l i n e a r y = a x + b .
b. Pe mbu atan Ser i Lar utan Stan dar e . Pe nentu an Kons entras i Sa mpe l Me lakuk an pe nguk uran
M en gence rkan larut an sta ndar in duk a bsorb ans i terh adap ekstrak vit am in E h asi l ekst raksi . Nil ai
1 00 pp m den gan heks an pa da a bsorb ans i yan g dip ero leh d igun akan untuk men gh itun g
m as ing mas ing l abu uku r 25 mL ko nsentras i vi ta mi n E deng an m eng gunak an pers am aan
d enga n konsentr asi 1 2,5; 17 ,5 ; 2 5 g aris li near regr esi d ari kurva ka li bras i/sta ndar ya ng tel ah
dan 50 ppm. d ibu at sehi ngg a b is a d iketah ui kons entrasi sa mp el min yak
s a wi t m e r a h .
3 . An a l i s i s Vi t a m i n E M e ng gun a k a n K C K T

a . P e mb uat an l ar ut an s t a n d a r L a r u t a n i n d u k d i e n c e r k a n d e n g a n met ano l hi ngga di per ol eh der et l ar ut a n

s t a n d a r 0 , 2 5 ; 0, 5 ; 2 , 5 ; 5 , 0 ; 2 5 ,0 d a n 5 0 , 0 p p m k e mu d i a n d i s a r i n g d e n g a n P TF E 0 , 4 5 µm d a n d i i n j e k s i k a n
k e s i s t e m K C K T.

b . b . P e n g e r j a a n s a mp e l S e b a n ya k 5 g r a m s a mp e l ya n g te l a h d i h o mo g e n k a n d i ma s u k k a n k e d a l a m
E r l e n me ye r 1 0 0 mL d a n me n a m b a h k a n e t a n o l 9 5 % s e b a n ya k 4 0 mL . K e mu d i a n me n a mb a h k a n a s a m
p i r o g a l a t s e b a nya k 5 0 mg d a n d i l e wa t k a n g a s n i t r o g e n s e b e l u m d i p a n a s k a n . S e t e l a h i t u me n a mb a h k a n
K O H 5 0 % s e b a n ya k 1 0 mL . l a r u t a n k e mu d i a n d i k o c o k d a n d i p a n a s k a n d a l a m wa t e r b a t h p a d a s u h u ± 8 0 o C
s e l a ma 4 5 m e n i t d a n d i k o c o k s e t i a p 1 0 me n i t . S e t e l a h l a r u t a n d i n g i n , d i t a mb a h k a n d e n g a n a s a m a s e t a t
g l a c i a l d a n d i d i n g i n k a n k e mb a l i h i n g g a s u h u r u a n g . K e mu d i a n me ma s u k k a n k e d a l a m l a b u u k u r 1 0 0 mL d a n
h i mp i t k a n l a r u ta n d e n g a n T HF- e t a n o l 9 5 % ( 1 : 1 ) d a n h o mo g e n k a n . S e t e l a h i t u d i d i a mk a n h i n g g a 1 j a m p a d a
s u h u r u a n g . L a r u t a n t e r s e b u t k e mu d i a n d i s a r i n g d e n g a n P TFE 0 , 4 5 µm d a n d i i n j e k s i k a n k e s i s t e m K C K T.
P e r h i t u n g a n k ad a r Vi t a mi n E d a l a m s a mp e l d e n g a n me n g g u n a k a n k u r va k a l i b r a s i s t a n d a r d e n g a n
p e r s a ma a n g a r i s : y = b x + a , d e n g a n r u m u s s e b a g a i b e r i k u t :
HASIL DAN
PEMBAHASAN
Hasil Saponifikasi Minyak Sawit Merah Dan Ekstraksi Vitamin E

S a pon if ik as i d an ekstr ak s i d i l akuk a n u ntuk mem i s ahk an

kom po ne n t er sa po nif ik a s i yan g d a pat m em pen g ar uhi
d et er mi n as i vi t ami n E. Pa d a t a ha p s apo n ifik a s i ,
pe m an as an pa d a suh u 70oC d i l akuk an untuk
mem per c e pat re a ks i . I ni m er u p ak a n kond i si o pt im al
k ar en a suh u ya n g l eb ih ti n gg i d a n wakt u ya n g r e l at if
l a ma ak an mer u s ak i somer v ita m in E , s ed an gk an wakt u
ya n g re l at i f s in gk at m enyeb abk an pe nur un an t in gk at
r e gen er a s i i som er. Pen amb ah an BH T b erfun g si
me nc e g ah oks id a si vit am in E o l eh ud ar a , ma u pun o l eh
pe m an as an d an N aC l b erfung s i m en gen da pk an s abun
s eh i n gga mud ah d i pis ahk an ant ara frak s i t ers ab unk an ,
f r a k s i t i d a k t e r s a b unka n d a n f r a k si a i r.

Gambar diatas merupakan hasil saponifikasi Pa d a t ah a p e kstr ak s i , m eta no l b erfu n gs i me n ar ik

s en yawa -s e nyawa po l ar yan g l ar ut di d a l amn ya
minyak sawit merah dan ekstraksi vitamin E s ed a n gk an ek str ak s i m en g gun ak an 2 pr o pa no l (1 % )
d a l am hek s an b erfu n gs i m en ar ik s en yawa pol a r d a lam
2 - pr o pa nol d a n s e n yawa n o n po l a r k e d a l a m h e k s a n .
 Hasil Analisis Konsentrasi Vitamin E dengan Metode
Spektrofotometri UV-Vis
Penentua n pa nja ng gelo mba ng Pe nggunaan he ksan se bagai pe lar ut
dan blanko dise babkan kare na he ksan
ma ksimum harus dila kuka n sebelum a nalisa .
me rupakan pe lar ut yang tidak be rwar na
Hal ini disebab ka n prepara si sa mpel da n dan tidak me ngandung ikatan rangkap
kondisi alat serta lin gkunga n disetia p pada str ukt ur mole kulnya se hingga tidak
akan me ngganggu analisis vit amin E juga
penelitia n b erbeda . Ber da sar ka n spektr um
sifat nya yang n on-polar baik un t uk
vita min E (Ga mbar 2 ) diper oleh titik ter tinggi me larut kan vitamin E yang juga be rsif at
kurva ialah pada panjang gelombang 298,5 nm. non-polar.
Me skipun sampe l yang dianalisis
be rwar na namun se n yaw a vitamin E dapat
me nye rap r adiasi pada panjang ge lombang
UV. Hal ini dise babkan vitamin E me miliki
gugus f ungsi yang dise but gugus kr o mof or
se hingga se nyawa ini dapat me nye rap
radiasi pada panjang ge lombang UV.
Nilai absor bansi sampe l yang
te ramati pada panjang ge lombang
maksimum ialah 2, 9736. Nilai absor bansi
sampe l diplot kan ke dalam pe r samaan
line ar se hingga dipe role h konse ntrasi
vitamin E se be sar 104,5 ppm.
Hasil Analisis Konsentrasi Vitamin E dengan Metode KCKT

Pa d a an a l is i s KC KT ini t id ak d i l akuk an p en g ukur an

pa n jan g ge lomb an g m aks imum dan pem i l ih a n l a ju
a l i r, pan jan g ge l omb an g yang d i g un ak an ya it u 290 nm
d e n g a n l a ju a l i r 1 m l /m e ni t .

B e rd as a rk an krom ato g r am d apa t di ket a hu i ad an ya v it am in

E d a l am s ampe l d en g an mem ba nd in gk an wa ktu r et ensi
s am pel yan g d idu ga m er u pak an v it ami n E de n g an l ar ut an
st a nd ar vit am in E . B erd as a rk an krom ato g ra m ( G am b ar 3
d an 4 ) d a pat d il i h at b ah wa waktu r et en s i s ampe l m a u pun 7
s er i l ar ut an st and a r re l at i f s am a ya itu untu k s am pe l 2 1,928
me n it se da n gk an untuk l ar ut an st an da r waktu r et ens i r at a-
r at a ya itu 21 ,668 m en it de n g an waktu an a l is is kur an g d ar i
25 men it . S eme nt ar a itu , waktu r ete ns i a nt ar a s am p e l d an
st a nd ar mem aka n waktu r e l ati f l am a . H a l in i d i seb abk an
pe n g gu n a an k ol om f a s a t er bal i k (RP ) d im an a f as a ger ak
ya n g d i gun ak an i a l ah s enyawa po l ar s ed an gk an f a se d iam
a d a l ah n on- po la r. B erd a s ark an h a s i l perh itun g an d i pe ro l eh
k o n s e ntra s i v i t a m i n E s e b e s a r 1 2 7 p p m
 Perbandingan Hasil Analisis Konsentrasi Vitamin E antara
Metode Spektrofotometri UV-Vis dan KCKT

P ri n s i p d as a r a n t a r a m e t o de S pe k t r o f o t om e t r i U V- Vi s D i as u m s i k a n b a h wa pe rb e d a an p an j an g ge l o m b an g
d e n gan m e t o de KC KT b e rb e d a . M e t o de S pe k t r of o t o m e t ri m ak s i mu m ini di s e b ab k an pe rb e d a an pe l a r u t yan g
U V- Vi s m e m i l i k i p ri n s i p d as ar a b s o rb an s i , s e da n gk an d i gu n ak an u n tu k m e l a r u tk an s ta n d ar, di m an a pe l a r u t
u n tu k KC KT m e m i l i k i p ri n s i p d as a r k r o m at o g r a fi . N a mu n KC KT yan g di gu n ak an i al ah m e tan ol s e dan gk an pa d a
d e te k t o r KC KT yan g di gu n ak a n p a da pe n e l i ti an ini s pe k t r o f o t om e t ri U V- Vi s pe l a r u tn ya a d al ah n - h e k s an .
m e n g gu n ak an de te k t o r U V- Vi s yan g p ri n s i pn ya sama S e l ai n i tu , pe rb e da an i n s t r u m e n yan g di gu n ak a n ju ga
d e n gan S p e k t ro f o t o m e t ri U V- Vi s yai tu pen gu k u r an d i p re di k s i m e n ye b ab k an pe rb e da a n p an j an g ge l o m b an g
d i d as a rk an pa da ab s o rb a n s i pa d a d u a re n t an g pan j an g m a k s i mu m .
ge l om b an g yai t u p an j an g ge l om b a n g s i n a r u l t r av i ol e t d an
B e r d as a rk an h as i l p e n e l i ti an yan g te l ah di l a k u k an
p a d a p a n j a n g ge l o m b a n g s i n a r t a m p a k .
m e t o de s pe k t r o fo t o m e t ri m e n gh a s i l k an k a d a r v i ta m i n
Pan j an g ge l o m b an g m ak si mu m yan g di pe ro l e h pada E yan g re l a ti f m e n de k a ti de n ga n h asi l KC KT d e n gan
KC KT i al ah 290 nm s e dan gk an p an j an g ge l o m b an g s e l i s i h k on s e n t ra s i 2 2 , 5 p p m . Pa d a pe n e l i ti an i n i , h al
m ak s i mu m p a da s pe k t r o f o t o m e tr i U V- Vi s i al a h 2 9 8 , 5 n m t e rs e b u t di s e b ab k an k a re n a s a m pe l yan g di a n al i s i s
yan g k e du an ya m as i h b e ra d a pada re n t an g p an j an g m e n g al a m i pe rl a k u an pe n d ah u l u an yan g s a m a a n t a r a
ge l om b an g U V. Pan j an g ge l o m b a n g m ak s i mu m in i re l evan m e t o de KC KT dan s pe k t r o fo t o m e t ri U V- Vis yai tu
d e n gan b e b e r apa pe n e l i ti t an yan g p e r n ah di l ak u k an yai tu d e n g a n c a r a s a p o n i f i k a s i d a n e k s t r ak s i .
p an jan g ge l om b a n g m ak s i mu m v i ta m i n E b e ra d a p a da
r e n t a n g 2 9 0 - 3 00 n m .
 Perbandinga n data konsentrasi samp el minyak
sawit merah tersap onifikasi dari masing -masing
metode pada penelitian ini disajikan dalam
Gambar 5.

Meskip un hasil analisis konsentrasi v ita min E

antara metode Sp ektrofotometri UV-Vis dengan
metode KC K T c ender ung mendekati, namu n bukan
berar ti dap at diklaim bahwa kandun gan v i tamin E
sec ara kuantit atif adalah va lid karena sej auh ini
belum ada la poran yang membuktikan tentan g
Berdasarkan h asil p enelitian yang dilakukan oleh Han analogi kedua metode tersebut yang divalidasi
& Choo (2012) dan Lampi (2013), panjang gelomban g dengan met ode p enetu an str uktur - IR ,
Spektrofotometer Massa dan RMI . Meskipun
maksimum v itamin E berkisar antara 298-300 nm
demikian adanya p endekatan metode yang
sehin gga dalam p enelitian ini diasumsikan senyawa
dilakukan se p er ti serap an p anj ang gelombang p ada
yang terserap adalah bena r mer up akan vitamin E.
Sp ektrofotometer UV-Vis dan KCK T
Meskip un demikian, kemung kinan senyawa lain yang
mengindikasikan bahwa adanya kandunga n
dapat terserap pada p anj ang gelomb ang tersebut masih vitamin E yang dapat dianalisis secara kuantitatif .
ada.
THANK YOU
Reporter name Report date