Anda di halaman 1dari 23

JOURNAL READING

HIPERBARIK OKSIGEN
MENGURANGI CEDERA
EKSPERIMENTAL (SPINAL CORD)
DENGAN MEREGULASI EKSPRESI
HMGB1 / NF-κB

Pembimbing
dr. NI KOMANG SRI DEWI UNTARI, M.Kes, Sp.S

Disusun oleh
BRILIAN DINANTI 201704200213
• Hasil
Abstrak
• Desain penelitian Setelah SCI, peningkatan signifikan dalam mRNA
dan protein ekspresi diamati untuk HMGB1 dan NF-
menyajkan pemahaman tentang efek oksigen κ B (P <0,01) dibandingkan dengan kelompok
hiperbarik (HBO)terhadap cedera sumsum tulang
kontrol. Kadar HMGB1 mRNA dan ekspresi protein
belakang / Spinal Cord Injury (SCI), yang bertujuan
untuk menemukan dinamika protein kelompok menurun setelah intervensi HBO. Penurunan itu
mobilitas tinggi B1 (HMGB1) dan faktor inti κB (NF- terlihat signifikan pada hari ke 7 dan 14 (P <0,05)
κB) setelah intervensi HBO pada tikus dengan SCI pasca-HBO. Di kelompok SCI + HBO, penurunan
akut. signifikan pada kadar NF-κB mRNA dan ekspresi
• Objektif protein juga terlihat pada hari ke 3, 7, dan 14 (P
<0,05). Setelah intervensi HBO, peningkatan yang
Terapi HBO dapat mengurangi kerusakan sekunder signifikan terlihat di skor Basso, Beattie, dan
yang berhubungan dengan prognosis SCI. Bresnahan (BBB-score) pada hari ke 7 dan 14 (P
Menggunakan model hewan untuk menandai efek
<0,05).
terapi HBO pada SCI.
• Metode • Kesimpulan

Tikus dikategorikan menjadi kelompok kontrol, Intervensi HBO dapat mengurangi kerusakan
kelompok kontrol + HBO, SCI, dan SCI + HBO. sekunder SCI yang disebabkan oleh respon
Tingkat ekspresi HMGB1 dan NF- κ B diukur pada inflamasi melalui regulasi ekspresi HMGB1 / NF- κ
hari ke-1, 3, 7, dan 14 setelah SCI. B, dan membantu perbaikan fungsi neurologis.
Pendahulu
an
• Cedera sumsum tulang belakang / Spinal Cord Injury (SCI) adalah cedera yang parah dan
biasa terjadi dalam kehidupan modern, dapat disebabkan oleh banyak faktor, termasuk
karena trauma, usia, infeksi, dll.
• Klasifikasi :
1. cedera primer
2. Cedera sekunder
• Cedera sekunder mengacu pada serangkaian efek seluler dan "kaskade" molekuler, terjadi
beberapa menit setelah kerusakan primer.
• Respons inflamasi berperan penting pada terjadinya SCI  respon inflamasi yang
berlebihan  menghambat proses normal perbaikan dan regenerasi saraf  timbul
manifestasi klinis.
• Manajemen cedera sekunder pada SCI berdampak langsung pada perbaikan klinis.
• Strategi terapi SCI : kesatuan perawatan yang komprehensif (obat konvensional,
pembedahan, dan terapi HBO).
• High-mobility group protein box 1 (HMGB1) adalah mediator inflamasi
lambat pada cedera dan inflamasi steril.
• Ditemukan di nukleus sel radang yang tidak aktif (monosit/makrofag)
Kerusakan jaringan dan
Peningkatan HMGB1
infeksi merangsang Pelepasan HMGB1 dari
ekstraseluler, berikatan
sitokin (TNF-α) utk nukleus ke dalam
dengan TLRs dan RAGE
mengaktifkan sel sitoplasma sel radang.
di membran sel terdekat
radang.

Merangsang TNF-α,
Proses inflamasi Faktor inti κB (NF- κB)
interleukin (IL) -1, dan
berlebihan teraktivasi
faktor inflamasi lainnya
Metodologi
penelitian
160 tikus Sprague- Model SCI yang Tikus di masing- ditempatkan di ruang hewan

Skor BBB
Model hewan

Persiapan Sampel

Oksigen Hiperbarik
Dawley (SD) sukses ditandai masing kelompok oksigen hiperbarik (HBO) 6
dengan tikus yg jam setelah operasi  cuci
dewasa yang sehat, dimatikan pada oksigen selama 5 menit,
menyeret tubuh
berusia 8 minggu bagian depan, perut
waktu tertentu yang tekanan meningkat selama 10
Model tikus SCI di tanah, hilangnya telah ditentukan. menit agar stabil pada 2,5
Jaringan sumsum ATA  pemberian oksigen
ditentukan dengan fungsi motorik
tulang belakang (4-6 selama 45 menit dan
metode Allen tungkai belakang, penurunan tekanan selama
Weight-Dropping punggung kaki di mm) dikumpulkan 15 menit. Ventilasi terus
tanah, hilangnya dari pusat daerah menerus dipertahankan
fungsi menahan yang cedera dan selama intervensi HBO
beban, dan retensi diawetkan dalam dengan kecepatan aliran
urin, dengan skor BBB oksigen 8 hingga 10 L / mnt
0.
nitrogen cair untuk
dan konsentrasi oksigen bilik
analisis. di atas 95%. Intervensi
dilakukan dua kali sehari di 3
hari pertama dengan interval
8 jam, dan dikurangi menjadi
satu kali setiap hari
setelahnya.
Metodologi
penelitian
Total RNA diekstraksi Protein dibuat dari jaringan Lima bidang pada Semua hasil disajikan

Western Blot
Isolasi RNA dan RT-PCR

Pewarnaan Imunohistokimia

Analisis statistik
sumsum tulang belakang
dari jaringan yang dan konsentrasinya setiap slide, 3 slide sebagai nilai rata-rata ±
cedera menggunakan ditentukan menggunakan untuk masing-masing standar deviasi dan
TriZol BCA Protein Assay Kit. tikus, dan 6 tikus di dianalisis menggunakan
Setelah protein dan transfer
CDNA untai pertama elektroforesis, membran masing-masing analisis varian 1 arah.
disintesis dengan diinkubasi dengan antibodi kelompok, dipilih Korelasi antara variabel
primer semalaman pada secara acak dan penelitian diuji
transkripsi terbalik suhu 4°C (antibodi HMGB1
menggunakan M-MLV poliklonal kelinci, diamati di bawah menggunakan koefisien
reverse transcriptase Perusahaan Acam, mikroskop cahaya korelasi Pearson. P <0,05
Cambridge, MA. Antibodi (pada perbesaran 100× dianggap secara statistik
PCR real-time NF- κ B poliklonal kelinci,
dan 400×) signifikan; P <0,01
Perusahaan Santa Cruz,
dilakukan dengan Santa Cruz, CA). Membran dianggap sangat signifikan.
Line-Detektor urutan dicuci dan kemudian
Pengujian
imunohistokimia Semua perhitungan
gen diinkubasi berlabel
dilakukan menggunakan
horseradish-peroxidase dilakukan
antibodi sekunder menggunakan software SPSS versi 16.0
dipaparkan pada solusio
chemiluminescent ECL,
ImageJ.
dikembangkan, dipindai,
dan dilakukan analisis
grayscale
Sample
Group
1. Kelompok kontrol

2. Kelompok kontrol + HBO

3. Kelompok SCI

4. Kelompok SCI + HBO


Hasil
penelitian
• Model SCI dan Skor BBB
mampu berdiri dan berjalan
- kelompok kontrol dengan kaki belakang dengan
- kelompok kontrol + HBO skor BBB 20 – 21 poin

kelumpuhan lengkap di kedua


ekstremitas bawah, dengan skor BBB 0
- kelompok SCI hingga 1 (sesuai standar perilaku SCI
tungkai belakang tikus)
- Kelompok SCI + HBO

Model hewan dengan dampak cedera sumsum tulang belakang berhasil terjadi (Gambar 1).
Gambar 1. Skor BBB untuk fungsi motorik tungkai belakang pada setiap kelompok
berbeda poin waktu. Setelah pembentukan model SCI tikus, Skor BBB dinilai pada
kelompok kontrol, kontrol + HBO, SCI dan SCI + HBO (n = 6 untuk setiap kelompok)
pada fungsi motorik tungkai belakang pada hari ke 1, 3, 7, dan 14.
Hasil
penelitian
• HBO Mengurangi Ekspresi HMGB1 dan NF- κB dalam Jaringan SCI
Tidak ada perbedaan yang signifikan antara kelompok kontrol dan
kelompok kontrol + HBO (kelompok kontrol). Dibandingkan dengan
kelompok kontrol, tingkat mRNA dan ekspresi protein HMGB1
secara signifikan lebih tinggi pada hari ke 1, 3, 7, dan 14 setelah SCI
(P <0,01).
Dibandingkan dengan grup SCI, tingkat mRNA dan ekspresi protein
dari HMGB1 berkurang pada kelompok SCI + HBO, meskipun
perbedaannya tidak signifikan pada hari ke 1 dan 3, menjadi
signifikan pada hari ke 7 dan 14 (P <0,05) (Tabel 1; Gambar 2).
Ekspresi HMG1 mRNA dan protein pada kelompok kontrol, kontrol +
HBO, SCI, dan SCI + HBO pada poin waktu yang berbeda.
Hasil
penelitian
• HBO Mengurangi Ekspresi HMGB1 dan NF- κB dalam Jaringan SCI
Tidak ada perbedaan signifikan kadar NF-κB mRNA pada hari ke 1
dan 3, dan tidak ada perbedaan yang signifikan kadar protein NF-κB
pada hari 1; namun, terdapat perbedaan yang signifikan pada hari
ke 7 dan 14 untuk NF-κB mRNA (P <0,05), dan perbedaan yang
signifikan pada hari-hari ke 3, 7, dan 14 untuk protein NF-κB (Tabel
2; Gambar 2).
Ekspresi NF-κB mRNA dan protein pada kelompok kontrol, kontrol + HBO,
SCI, dan kelompok SCI + HBO pada poin waktu yang berbeda.
Gambar 2. Ekspresi
HMGB1 dan NF-κ B dalam
kelompok eksperimen. A,
Tingkat ekspresi HMGB1
dan NF-κ B mRNA (n = 9)
dibandingkan dalam
kelompok kontrol, kontrol
+ HBO, SCI, dan SCI + HBO
pada hari 1, 3, 7, dan 14.
B, Tingkat ekspresi protein
HMGB1 dan NF-κ B dalam
kelompok di atas.
Hasil
penelitian
• Imunohistokimia menunjukkan lebih sedikit sel dengan HMGB1 dan NF-B
positif pada kelompok kontrol (kelompok kontrol dan kelompok kontrol +
HBO).
• Pada kelompok cedera(SCI), jumlah sel dengan HMGB1 dan NF-κB positif
secara bertahap menurun setelah terapi HBO.
• Peneliti menyimpulkan bahwa intervensi HBO menurunkan ekspresi mRNA dan
protein HMGB1 dan NF-κ B pada SCI eksperimental, khususnya selama fase
subakut (Gambar 3).
Gambar 3. Ekspresi
HMGB1 dan NF-κ B
dalam kelompok
eksperimen. A, NF-κB
pewarnaan
imunohistokimia dalam
kontrol dan SCI: kontrol,
kontrol + HBO, SCI, SCI +
HBO. B, pewarnaan
imunohistokimia HMGB1
dalam kontrol dan SCI:
kontrol, kontrol + HBO,
SCI, SCI + HBO.
Hasil
penelitian

• Pola Ekspresi dari HMGB1 dan NF- κB Setelah SCI Dengan Intervensi
HBO
Setelah intervensi HBO, ekspresi mRNA dan protein HMGB1 berkurang
pada jaringan yang cedera; ekspresi puncak mRNA HMGB1 pada
kelompok SCI + HBO menurun dari hari ke 3 post-injury. Ekspresi mRNA
NF-κB jg menurun secara bertahap setelah intervensi HBO.
 menunjukkan bahwa HBO dapat menurunkan puncak ekspresi
HMGB1 dan mengurangi ekspresi NF-κB dalam jaringan sumsum tulang
belakang yang cedera (Gambar 4).
Gambar 4. Tingkat
ekspresi mRNA
HMGB1 dan NF-κB
pada titik waktu
yang berbeda
setelah SCI dengan
dan tanpa
pengobatan HBO.
Ekspresi mRNA (A);
ekspresi protein
(B).
Hasil penelitian
• Korelasi Antara Ekspresi Skor HMGB1 dan NF-B dan BBB
Ekspresi NF-κB mRNA pada hari 1 berkorelasi negatif dengan skor BBB hari
ke 3 (P <0,05), dan ekspresi NF-κB mRNA pada hari ke 3 berkorelasi positif
dengan skor BBB hari ke 3 (P <0,05) pada kelompok SCI (Tabel 3).
Ekspresi NF-κB mRNA pada hari ke 3 berkorelasi negatif dengan skor BBB
pada hari ke 7 pada kelompok SCI + HBO (P <0,05 (Tabel 4)).
Ekspresi protein HMGB1 pada hari ke 1 berkorelasi negatif dengan skor BBB
pada hari ke 7 pada kelompok SCI (P <0,05).
Data ini menunjukkan bahwa tingkat ekspresi HMGB1 dan NF-κB terkait
erat dengan skor BBB setelah terapi HBO.
Hubungan antara HMGB1
dan skor BBB pada
Hubungan antara NF-κB dan kelompok SCI
skor BBB pada kelompok SCI
dan SCI + HBO
Kesimpulan
• Intervensi HBO memberikan dampak komprehensif pada ekspresi
HMGB1 / NF-κB dan menurunkan respon inflamasi sekunder.
• HMGB1 memainkan peran penting dalam proses ini.
• Ada kemungkinan intervensi HBO meningkatkan proses perbaikan
yang terlambat pada SCI melalui efek regulasi dari HMGB1 pada
respon inflamasi.
• Penelitian lebih lanjut akan diperlukan untuk mengeksplorasi
mekanisme bagaimana HBO dapat melemahkan respon inflamasi
pada SCI.
Poin-Poin Utama
• Kontrol SCI secara langsung melalui jalur respon inflamasi yang berperan
penting pada tingkat cedera sekunder.
• Pada SCI, didapatkan peningkatan HMGB1 dan NF-κB mRNA serta ekspresi
protein yang signifikan dibandingkan dengan kelompok kontrol.
• HMGB1 dan NF-κB mRNA dan level ekspresi protein menurun setelah
intervensi HBO.
• Setelah intervensi HBO, peningkatan yang signifikan terlihat pada skor BBB hari
ke 7 dan 14.
• Intervensi HBO dapat mengurangi kerusakan sekunder SCI yang disebabkan
oleh respons inflamasi melalui regulasi menurunkan ekspresi HMGB1 / NF-κB,
dan mempromosikan perbaikan fungsi neurologis.
Terimakasih 

Anda mungkin juga menyukai