■Penggunaannya luas
• FENOMENA INTERAKSI
ADSORB ANALIT DENGAN
SI PERMUKAAN PARTIKEL
PADAT FASE DIAM (S)
• PERBEDAAN
KELARUTAN ANALIT
PARTISI DALAM DUA MACAM
FASE CAIR YANG TAK
SALING CAMPUR
(IMISCIBLE) DALAM
FASE DIAM (S)
MEKANISME PEMISAHAN KCKT
• FENOMENA PERTUKARAN
ION ANTAR ANALIT DAN
ION FASE DIAM /RESIN
EXCHANGE PENUKAR ION : ANION
ATAU KATION
S S S S S S S S
S S S S S S S
S
tY
Respo Luas Puncak/Peak
ns Area (A)
Detekt tX
or
Tinggipuncak/peak
tM
height (h)
Wakt
u
Lebar puncak/peak
width (w)
Kemungkinan Rs
EFESINS SELEKTIFI KAPASITA
I TAS S
A KURAN KURANG KURANG
A G
B BAIK KURANG CUKUP
B
C KURAN BAIK CUKUP
G
C
D BAIK BAIK BAIK
D
INSTRUMENT KCKT
SKEMA INSTRUMENT KCKT
KOMPONEN UTAMA KCKT
POMP
A
DETEK
TOR INJEK TOR
KOM
PONEN
KOLO ELUEN
M
POMPA
2 3
1
4 5
Hubungan Polaritas Analit - tr
Urutkan waktu retensi (tr)....?
1 2
4
3
Urutkan waktu retensi (tr)....?
1 3
2
5 6
4
Urutkan waktu retensi (tr)....?
2
1 3
5 6
4
ELUEN/FASE GERAK
Syarat :
■ Murni,
■ Inert ( tidak merusak kolom dan analit),
■ Sesuai detektor yang dipakai
■ Melarutkan seluruh analit,
■ Viskositas rendah,
■ Memungkinkan mengisolasi kembali analit
■ Relatif murah
MACAM DETEKTOR
■ UV-detector
■ Flourescense-detector
■ Electrochemical-detector
■ Refractive-detector
■ Multipurpose-detector
■ Ftir-detector
■ Mass-spectra-detector
SYARAT DETEKTOR
■ Sensitif
■ Linier
■ Universal
■ Respon dapat diprediksi
■ Stabil, tidak terpengaruh oleh perubahan
kondisi
■ Non-destruktif
■ Murah/biaya opersaional rendah
TAHAPAN ANALISIS KCKT
PREPARASI SAMPEL
ISOLASI CLEAN UP
LARUTAN BAKU
BAKU EKSTERNAL BAKU INTERNAL
Kondisi KCKT
■Mengacu pada:
- Farmakope
- literatur (journal, buku, dsb)
- hasil penelitian yang pernah dilakukan
■ Apabila belum ada harus menentukan sendiri
dengan melakukan studi optmasi
■ Optimasi : pemilihan kolom dan fase gerak
(Segitiga Snyder atau Window Diagram)
Prinsip Pemilihan Kolom
Eluen non
Fase polar
normal
Analit polar
Kolom
Eluen polar
Fase
balik Analit non
polar
Contoh : Analit polar
■Campuran kalium sulfoguayakolat,
dekstrometorfan-HCl, difenhidramin-HCl
■Ditambahkan ion-pair : dietilamine atau
heksan sulfonat
■Polaritas akan menurun mendekati non-polar,
sehingga dapat digunakan kolom fase balik
■Kolom fase balik (non-polar) : lichrosorb CN
■Fase gerak/eluen: Metanol-dietilamine pH 5
atau metanol-heksan sulfonat pH 5.
Ion –Pair : Adrenalin injeksi
ADRENALI
N
SOSA (sodium
octanesulfonic
acid
KOLO
M ODS
Ion-Pair :
Ascorbic Acid Injection/Syrup
ASCORBIC
ACID
CETRIMID (AMONIUM
KUARTERNER)
KOLOM
ODS
2. Pemilihan detektor
PA y = bx +
a
Konsentrasi
analit
PAst
y = bx +
PAst.i a
Kons. Stand.
Metode Standar Internal..1 (cont.)
Standar +
internal
standar
Sampel +
internal
standar
3. Metode Standar Adisi/Spike
Luas
area/tinggi
puncak y = ax +
b
c2
c4
c1
c3
x=0 y = ax +
y=b b
(Tanpa ada
penambahan c2
) c4
c1
c3