Analisis karbohidrat

B y

Nafisa Febriyani (17106040000)

Shela Jeny Prehatini (17106040000)
Risti Zahroh (17106040042)
Analisis Karbohidrat dengan metode asam fenol-
sulfat dalam format lempeng
 Metode Asam Fenol-Sulfat

D i a n tar a b an y a k m e tod e ko lor i m e tr i u n tu k

penentuan karbohidrat, metode asam fenol-
s u l f a t ​a d a l a h m e t o d e t e r m u d a h d a n p a l i n g
dapat diandalkan untuk mengukur gula netral
pada oligosakarida, proteoklikan, glikoprotein,
dan glikolipid.
Method
Optimasi metode berbasis
lempeng mikro
D a l a m re a k s i a s a m f e n o l - s u l f a t , f e n o l
mengalami sulfonasi insitu sehingga asam
f e n o l - s u l f o n a t y a n g t e r b e n t u k m e n u r u n ka n
i n t e n s i t a s w a rn a u n t u k g u l a h e k s o s a d a n
p e n t o s a . Pe n a m b a h a n a s a m s u l f a t p e ka t ke
s a m p e l d i i ku t i o l e h f e n o l ( a s a m s u l f a t - f e n o l )
m e n g h a s i l ka n h a s i l t e r b a i k . Pro t o ko l i n i
d i o p t i m a l ka n u n t u k m e g e t a h u i w a k t u
p e n g o c o ka n d a n v o l u m e a s a m s u l f a t d a n f e n o l .
Waktu
pengocokan
Untuk 50 ​μ​l sumur (100 nmol/sumur) pada 96-sumur
mikroplate ditambahkan secara cepat 150 ​μ​l asam
sulfat dicampur pada shaker selama 30 menit. Lalu
30 ​μ​l fenol 5% ditambahkan lalu Mikroplate
dipanaskan selama 5 menit pada suhu 90 ° C pada
waterbath. Setelah itu dikeringkan dan diukur dengan
Volume dan konsentrasi
asam sulfat
Untuk 50 ​μ​l sumur (100 nmol/sumur) pada 96-sumur
mikroplate ditambahkan secara cepat 150 ​μ​l asam
sulfat dicampur pada shaker selama 30 menit. Lalu
30 ​μ​l fenol 5% ditambahkan lalu Mikroplate
dipanaskan selama 5 menit pada suhu 90 ° C pada
waterbath. Setelah itu dikeringkan dan diukur dengan
 Volume fenol 5 %

Untuk 50 ​μ​l sumur (100 nmol/sumur) pada 96-sumur

mikroplate ditambahkan secara cepat 150 ​μ​l asam
sulfat dicampur pada shaker selama 30 menit. Lalu
100 ​μ​l fenol 5% ditambahkan lalu Mikroplate
dipanaskan selama 5 menit pada suhu 90 ° C pada
waterbath. Setelah itu dikeringkan dan diukur dengan
 Result
Optimalisasi kondisi reaksi
• lima faktor yang dilihat yaitu ukuran sampel, urutan penambahan,
waktu pengocokan antara penambahan asam sulfat dan fenol
terkonsentrasi, jumlah asam sulfat pekat, dan jumlah volume
fenol 5 %.
• Ukuran sampel 50 μl​ untuk memungkinkan penambahan asam
sulfat dan larutan fenol dalam jumlah yang cukup.
• Dari tiga sekuens yang diuji, sampel-fenol-asam sulfat dan fenol-
asam sulfat-sampel memiliki absorbansi yang lebih rendah
daripada sampel-asam sulfat-fenol,
Grafik waktu terefektif
Grafik konsentrasi
terefektif
Absorbansi relatif
8 macam gula yaitu Man, Xyi, Fuc, Gal, Glc, GlcN, GaIUA dan NeyAc.
Dan didapatkn hasil yaitu gula Xyl mendapatkan nilai absoebansi
terbesar yaitu 2.098 dan gula GlcN terkecil dengan nilai 0.039
Absorbansi
Spektrum
pada 490 nm sebagian
besar gula dapat diukur
pada atau mendekati
maksimum penyerapannya
dan spektrum yang
terabsorbansi Man, Xyl, Fuc,
Gal,dan Glc memiliki puncak
pada 491, 486, 482, 491,
dan 493 nm, masing-