Oleh :
Rustini
(G20180034)
KROMATOGRAFI
Pola Spektrometer Massa
berdasarkan Cara Ionisasinya
Pola
No Cara Ionisasi Sampel Spekt. Massa Sifat Sampel Spektrum
1 Electron Bombardment EI-MS Volatile Banyak Fragmen
11
ELECTRON IMPACT (EI)
(TUMBUKAN ELEKTRON)
12
ELECTRON IMPACT (EI)
(TUMBUKAN ELEKTRON)
EI-MS
• M 70 eV M+. + e
• Karena tingginya energi ionisasi, maka pada spektrum massa dengan pola
EI, seringkali Molecular Ion (M+.) tidak bisa terlihat atau tidak terbentuk,
karena mengalami fragmentasi menjadi daughter ions yang banyak, atau
abundance-nya sangat-sangat kecil.
13
Prinsip Analisis Spektroskopi Massa
FRAGMENTASI DALAM KAMAR PENGION
m+ m 1+ m 2 + + m2 0
EI-MS Ion positif
mol. netral
70 eV
M M+. m +. m 1+ m 2+
Sampel Ion Molekul Ion radikal-positif
parent-ion
m- m 1+
Ion negatif
m+ + R.
radikal netral Daughter-ion
14
ELECTRON IMPACT (EI)
(TUMBUKAN ELEKTRON)
Elektron-
H
..
H O..
H H
Non-bonded electron, n
Elektron-
15
CHEMICAL IONIZATION (CI)
2 (IONISASI KIMIAWI)
• Untuk mendapatkan Molecular Ion yang baik, dengan abundance yang cukup untuk bisa
dilihat, maka dapat digunakan cara ionisasi yang dikenal dengan Chemical Ionization.
• Pada pola CI-MS ini, sebagai chemical pengion-nya digunakan gas-organik sperti: metana,
isobutana atau ammoniak
• Pada pola CI-MS ini maka gas-pengion akan diinosasi dengan energi elektron 300eV yang
menghasilkan ion gas; ion ini segera bereaksi dengan counter-part netralnya.
• Yang akan terbaca pada CI-MS, bukanlah Molecular ion (M+.) seperti pada EI-MS, namun
yang terbaca adalah MH+, yaitu molecular ion plus 1H.
16
CHEMICAL IONIZATION (CI)
(IONISASI KIMIAWI)
17
CHEMICAL IONIZATION (CI)
(IONISASI KIMIAWI)
18
FIELD DESORPTION IONIZATION (FDI)
3 (IONISASI DESORPSI MEDAN)
19
FIELD DESORPTION IONIZATION (FDI)
(IONISASI DESORPSI MEDAN)
dibesarkan +
+ 8kV
+ terdesorpsi
+
Plat-kawat
5 mm
Katode celah Sampel, 1 mg
Jarum-jarum tajam.
Terbuat dari metal, yang
Mengandung vacant-orbital
20
FIELD DESORPTION IONIZATION (FDI)
(IONISASI DESORPSI MEDAN)
Jarum-tajam
.. +.
M . M
Vacant-orbital
Sampel terdesorpsi (lepas)
Dengan potensial plat sebesar + 8kV, dari muka jarum
maka Kuat medan muka jarum dapat sebagai Molecular ion, bisa
mencapai 108 Vcm-1, shg 1 elektron sampel sebagai M+. Atau MH+
masuk vacant-orbital logam jarum tersebut
21
FIELD DESORPTION IONIZATION (FDI)
(IONISASI DESORPSI MEDAN)
Jarum-tajam
H+
..
M MH +
Vacant-orbital Terdesorpsi/lepas
22
LASER DESORPTION (LD)
4 (DESORPSI LASER)
23
FAST ATOM BOMBARDMENT (FAB)
5 (BOMBARDIR ATOM CEPAT)
Bombardment dg atom-cepat
Ion-ion Sampel
Probe ... Ion analyzer
sampel
Metal probe tip
+kV (spektra ion-positif)
-kV (spektra ion-negatif)
24
FAST ATOM BOMBARDMENT (FAB)
(BOMBARDIR ATOM CEPAT)
Prinsip FAB-MS
• Beberapa mikrogram sampel (M) dilarutkan dalam beberapa mikroliter matrix
dengan volatilitas rendah, -umumnya dipakai gliserol. Matrix diperlukan agar
sampel tidak rusak bila terkena bombardment atom cepat secara langsung. Jadi
fungsi matrix untuk melindungi sampel.
• Sebagai atom cepat, umumnya digunakan atom-atom yang termasuk gas-
mulia, seperti: Xe, Ne, Ar dsb.
• Pembuatan Atom Cepat, sbg contoh Xe :
Atom Xe Cepat dibuat dengan memberikan percepatan pada Ion Xenon
sampai pada tingkat energi sekitar 6-9 KeV. Ion Xe Cepat yang terjadi
tersebut, kemudian dinetralkan dengan Atom Xe Stasioner, sehingga akan
terjadi ion exchange, dimana Ion Xe Cepat yang berbenturan dengan Atom
Xe Stasioner, akan berubah menjadi Atom Xe Cepat, sedang Atom Xe
Stationer akan berubah menjadi Ion Xe Stasioner.
25
FAST ATOM BOMBARDMENT (FAB)
(BOMBARDIR ATOM CEPAT)
Xe+ + Xe Xe + Xe+
Atom Ion exchange
Ion cepat Atom cepat Ion stasioner
stasioner
desorpsi
Xe + M/matrix [M+H] + atau [M-H]-
26
FAST ATOM BOMBARDMENT (FAB)
(BOMBARDIR ATOM CEPAT)
bombardment
Xe [M-H]-
matrix sampel
M desorpsi
[M+H]+ Ke Ion Analyzer
M desorpsi
[M+H]+
Metal probe tip desorpsi
27
FAST ATOM BOMBARDMENT (FAB)
(BOMBARDIR ATOM CEPAT)
Matrix:
Pada analisis FAB-Mass Spectrometry, maka sangat dianjurkan bahwa
Sampel harus dilarutkan dalam suatu matriks. Sampel harus sedikit
lebih bersifat hidrofobik dibanding matrix, atau dengan kata lain matriks
harus sedikit lebih hidrofilik dibanding sampel. Sampel harus mampu
mengisi interface matrix, karena penetrasi atom cepat Xe hanya sekitar
10nm ke dalam matrix.
28
FAST ATOM BOMBARDMENT (FAB)
(BOMBARDIR ATOM CEPAT)
30
ELECTROSPRAY IONIZATION
(IONISASI SEMPROTAN-ELEKTRIK)
Sampel
diinjeksikan
Ke Ion Analyzer
3-6 kV
Jarum
Kapiler
Drying gas
Ion Molekul:
[M+H]+ atau [M-H]-
32
ELECTROSPRAY IONIZATION
(IONISASI SEMPROTAN-ELEKTRIK)
+ + + + +
+ Evaporasi
+ +
(1) + Sampel
+ + + ++
Butir-spray mengecil
Butir-spray (droplet) awal
Muatan positif makin berdekatan,
Gaya repulsi antar muatan makin terasa
33
ELECTROSPRAY IONIZATION
(IONISASI SEMPROTAN-ELEKTRIK)
34
MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION
7 IONIZATION
(MALDI)
• Ionisasi dengan pola MALDI merupakan tahap yang lebih maju dari ionisasi
pola LDI, dan juga menggunakan pendekatan desorption.
• Perbedaannya dengan LDI adalah, bahwa pada pola MALDI, sampel yang akan
dianalisis dilarutkan dulu kedalam solven yang terdiri dari larutan molekul
organik kecil, yang disebut dengan matrix.
• Molekul organik kecil atau Matrix yang digunakan ini, dipilih yang mempunyai
sifat absorpsi kuat pada panjang-gelombang LASER .
• Setelah sampel dilarutkan pada solven yang berisi matrix, kemudian solven
diuapkan sehingga akan didapatkan larutan-padat dari sampel di dalam matrix
(a solid solution of sample in the matrix)
35
MATRIX ASSISTED LASER DESORPTION
IONIZATION
(MALDI)
• Induksi sinar LASER ini akan mengakibatkan akumulasi energi yang besar
di dalam larutan-padat tersebut melalui eksitasi elektronik dari molekul-
molekul matrix.
36
Spektra EI-MS kloroquin
Fragmentasi levodopa