Pengenalan identifikasi sel dan

kelainan sel darah

widodo
• Apakah hematology
• Tabung pengambilan darah
• Sampel untuk pemeriksaan hematologi
• Komponen sel darah
• Pemeriksaan hematology
 Nilai normal beberapa komponen darah
(Patofisiologi 2007)
Jenis Laki-laki Perempuan Nilai
rata2
Volume darah (liter) 0,041xBB(kg)+1,53 0,047xBB(kg)+0,6
Hematokrit ( L sel/L darah=%) 40-54 37-47
Eritrosit (jumlah sel/ml) 4,6-6,2 juta 4,2-5,4 juta
*Hb (g/dl) 14-18 12-16
Leukosit (jumlah sel/ml) 3.000-11.000

* Granulosit 63 %
* limfosit 31 %
* monosit 6%
Trombosit (jumlah sel/ml) 170.000-360.000 180.000-400.000 170.000-
360.000
Protein plasma (g/dl serum) 660-850
 Nilai normal elemen2 seluler pada darah
manusia (W.F. Ganong edisi 10 tahun 1983)
Jenis sel Sel/mikroliter Perkiraan range % total sel darah
(rata2) normal putih
ERITROSIT :
* Laki-laki 5,4 juta
* Perempuan 4,8 juta
LEUKOSIT TOTAL 9.000 4.000-11.000
Granulosit :
* Neutrofil 5.400 3.000-6.000 50-70
* Esinofil 275 150-300 1-4
* Basofil 35 0-100 0-4
Limfosit 2.750 1.500-4.000 20-40
Monosit 540 300-600 2-8
TROMBOSIT 300.000 200.000-500.000
Hemopoesis/Pembentukan Sel Darah
di Sumsum Tulang
Sel Darah Dewasa
Limphopoesis/Pembentukan sel limfosit di
Sumsum tulang dan Thymus
 Blood Collection Tubes

Blood sample collected without any

anticoagulant the sample will clot
Plain Blood = Clot + Serum
Use for Biochemistry, immunology,
microbiology, plasma proteins, drug
testing

Blood sample collected in

anticoagulant
the sample will not clot
Whole Blood = Cells + Plasma
Use for Hemostasis & Hematology

Unrestricted © Siemens Healthineers, 2020 July 2020 | Ramdani, Dadan (RC-ID SHS-AP-ASN-INA CS A
 The Blood Sample
Suspension of cells in a solute of water, proteins, and electrolytes
Average volume is 5 liters, 70mL per kg body
weight.

Plasma
the yellow fluid portion when the cellular
components
(RBCs, WBCs, platelets) have been
separated / removed
by centrifuging.

Serum
when cellular components (RBCs, WBCs,
platelets) & coagulation proteins (clotting factors) are removed by
clotting process, resulting fluid is serum is a lighter yellow more
transparent than
Unrestricted © Siemens plasma
Healthineers, 2020 July 2020 | Ramdani, Dadan (RC-ID SHS-AP-ASN-INA CS A
 Sample for Hematolgy
Blood for Hematology is collected in EDTA sample tube
(EthyleneDiamineTetraAcetic –acid)
Color Code: PURPLE CAP

PLASMA (fluid)
55% of Blood

CELLS
45% of Blood RBC - Red Blood Cells
WBC - White Blood
Cells
PLATELETS
Unrestricted © Siemens Healthineers, 2020 July 2020 | Ramdani, Dadan (RC-ID SHS-AP-ASN-INA CS A
 Sample for Hematology Tests
A sample of whole blood is collected into a potassium
EDTA
(EthyleneDiamineTetraAcetic-acid) anticoagulant,
PURPLE top tube.
Venipuncture minimally traumatic with 21G - 23G
needle,
and adequately mixed with the anticoagulant by
gentle inversion of the tube (never shaken).
Check for proper volume fill.
Specimen Storage and Transport
Stored at room temperature and
analyzed within 4 hours of
collection.
Peripheral blood film should be
made
within 2 hours
Unrestricted © Siemensfrom the
Healthineers, 2020sample. July 2020 | Ramdani, Dadan (RC-ID SHS-AP-ASN-INA CS A
 Cellular Blood Elements
Three types of formed elements:
1. Erythrocytes (Red Blood Cells)
2. Leukocytes (White Blood Cells)
3. Thrombocytes (Platelets)
Platelet
s

White Blood
Cells

Red
Blood
Cells

Unrestricted © Siemens Healthineers, 2020 July 2020 | Ramdani, Dadan (RC-ID SHS-AP-ASN-INA CS A
 Leukocytes (White Blood Cells) Sub
Populations
Leukocytes (White Blood Cells) consist of 5 subpopulations:
1.Neutrophil – most numerous, immediate responders
2.Basophil – inflammatory response
3.Eosinophil – associated with allergic reaction
4.Monocyte – phagocytic cells
5.Lymphocyte – regulator of immune response

Unrestricted © Siemens Healthineers, 2020 July 2020 | Ramdani, Dadan (RC-ID SHS-AP-ASN-INA CS A
 WBC in Peripheral Blood Film

Lymphocyt
es Monocyt
es

Neutrop
hils
Basophil
Eosinoph
Unrestricted © Siemens Healthineers, 2020 il July 2020 | Ramdani, Dadan (RC-ID SHS-AP-ASN-INA CS A
 Hematology Diagnostics
1. Cell Counting (RBC, WBC, Differential
Count,
Platelets & Hemoglobin)
using Hematology
Analyzers
ADVIA® ADVIA®
ADVIA® 360 560
2120i

2. Cell morphology (different types /

characteristics)
from blood smear using
Microscopy

Unrestricted © Siemens Healthineers, 2020 July 2020 | Ramdani, Dadan (RC-ID SHS-AP-ASN-INA CS A
Hematologi rutin

Cara manual:Hemoglobin, hitung leukosit,

hitung jenis lekosit, KED
Cara automatik:Hb & eritrosit; leukosit,
trombosit, MCV, MCH, MCHC, hemato-krit,
hitung jenis leukosit, retikulosit, dll tgt
kemampuan alatnya
• Manual : peralatan & reagensia murah, ta-
pi laboran intensif.
• Automatik: modal cukup besar, tapi
mampu menampilkan pemeriksaan yg
banyak oleh sedikit laboran.Cara ini lebih
teliti
• Spesimen : bisa darah kapiler atau vena dg
antikoagulan Kalium EDTA
• Dikerjakan dlm waktu 6 jam ssd pengambi-
lan; tapi dlm penyimpanan 4oC bisa 24 jam
Pemeriksaan darah rutin
• Hb (Oksi-Hb, deoksi-Hb, met-Hb, karboksi-
Hb) metode sianmet, normal 12-16 g/dl (pe-
rempuan), 13.5-18 g/ dl (laki-laki)
• Hitung leukosit
• Hitung jenis leukosit
• KED
Hitung Leukosit
• Metode manual: encerkan 20 l darah dg lar
pengencer 0.38 ml dlm tabung gelas/ plastik
75x10 mm, tutup & campurputar dlm
mechanical mixer selama 1’; Isikan ke bilik
hitung dan hitung dibawah mikroskop. Pipet
leukosit tidak dianjurkan karena su-kar
dikaliberasi, mudah pecah.
• Kesalahan sama dg hitung eritrosit
Hitung jenis leukosit
• Pemeriksaan visual thd sel-sel leukosit pada
sediaan apus darah tepi.
• Pembuatan sediaan apus jangan terlalu ti-
pis/tebal -> 50 % sel-sel leukosit terkumpul
ditepi/diekor
• Distribusi kualitatif biasanya: polimorfonu-
klear neutrofil & monosit predominan pd te
pi/ekor; limfosit dibagian tengah sediaan
• Cara manual: hitung sel-sel leukosit dg obj
40x atau 100x (oil) sepanjang lebar sediaan
pd lajur dari pangkal sp ekor; bila<100 sel,
ulangi pd lajur dibawahnya; hindari tepi la-
teral sediaan;
• Kesalahan terjadi bila sel sediaan bag tebal
tak dpt diidentifikasi serta kelebihan
menghi tung neutrofil/monosit ditepi
sediaan
• Pd leukemia sel harus dihitung pd bag yg
tersebar lebih baik
• .Cara lain dg tehnik battle count, > teliti &
meminimalkan kesalahan, ok variasi distri-
busi bag tengah & tepi
• Sbg prosedur rutin, hitung 100-200 sel, 200
sel lebih akurat.
• Cara melaporkan: dinyatakan sbg prosen-
tase setiap jenis sel; bila dihubungkan dg
hitung leukosit -> jumlah absolut
• Eritrosit berinti bisa termasuk dlm hitung je
nis leukosit, atau diluar. Bila diluar harus
dinyatakan sbg jml eritrosit berinti/100 leu-
kosit
Identifikasi sel
Perlu dipikirkan sbb.:
1). Apakah ukuran sel? Kecil, sedang, besar
2). Apakah karakteristik nukleus?(bentuk, u-
kuran relatif, gamb khromatin halus/kasar,
ada nukleoli)
3). Apakah karakteristik sitoplasma?Granuler
/nongranuler; granula spesifik/nonspesifik;
pewarnaan; jumlah relatif
Pemeriksaan atas indikasi
• Hematokrit, metode mikro
• Hitung eritrosit
• Indeks eritrosit : mcv (normal 80-100
fl), mch (normal 26-32 pg), mchc
(normal 32-36 %)
• KED
• Hitung trombosit
• Retikulosit
• Hitung eosinofil
• Gambaran sediaan apus darah tepi
• Gambaran sediaan sumsum tulang
• Pewarnaan sitokimia
Hitung Eritrosit
• Utk menghitung MCV & MCH - penting utk
diagnose hematologi. Cara manual makan
waktu serta ketelitian jelek; utk rutin tidak
dianjurkan.
• Metode yg dianjurkan automatik
• Kesalahan manual: technical error (alat)
dpt diminimalkan dg hati-hati dan field er-
ror (distribusi) dpt diatasi dg menghitung
lebih banyak sel
• Metode manual: 20l darah masukkan ke-
dlm tabung gelas/plastik 75x12 mm yg
beri-si 4 ml lar pengencer, tutup dan
campur kmd putar dlm mechanical mixer
selama 2’; hitung dg bilik hitung dibawah
mikroskop
• Hindari: kelebihan pengisian bilik hitung,
pengisian blk hitung tidak sempurna, tdp
gelembung udara, tdp kotoran
• Kesalahan lain: kotoran atau gumpalan pu-
ing eritrosit/leukosit dan gumpalan leukosit
• Gumpalan leukosit biasanya terjadi pd da-
rah-heparin bila heparin > 25 IU/ml darah
Gumpalan tampak pd darah yg dibiarkan
bbp jam sblm di-kerjakan
Hematokrit
• Manual digunakan mikro-hematokrit, yang
banyak digunakan metode automatik
• Ketepatan mikro-hematokrit : tgt kesalahan
akibat kurang tercampur antikoagulan, kele
bihan antikoagulan, kesalahan menyumbat
kapiler, kapiler tidak standar
Indeks Eritrosit
• Dihitung dari hasil Hb, hitung eritrosit &
hematokrit -> MCV, MCH, MCHC
• Penting utk kepentingan klinik, dipakai secara
luas utk klasifikasi anemia
• Ketelitian dan ketepatan tgt pemeriksaan ke
tiga parameter tsb berasal, manual/automa-
tik serta kesalahan yg diperoleh
 Mean Corpuscular Volume (MCV)

• Merupakan volume rata-rata eritrosit yang dihitung dari

hematokrit dan jumlah eritrosit
• MCV menunjukkan ukuran rata-rata eritrosit : normositik,
makrositik, mikrositik klasifikasi morfologi anemia

Ht (%) X 10 fl (mikrometer kubik/ um3)

MCV =
Jumlah eritrosit (106/μl)

• 1 fl = 10-15L = 1 mikrometer kubik (um3)

• Nilai normal : 84-96 fl (nilai lebih tinggi pada neonatus, bayi an
orang tua)
 Contoh soal MCV

• Jika diketahui Ht 45% (0,45 L), Jumlah eritrosit 5x1012/L, maka

45 X 10 fl (mikrometer kubik/ um3)

MCV =
5
= 90 fl
= normositik
 Mean Corpuscular Hemoglobin (MCH)

• Menunjukkan rata-rata berat Hb di dalam 1 eritrosit (pg Hb

/RBC)
• Terutama digunakan untuk menilai derajat beratnya anemia
• Cara hitung

Hb (g/dl) X 10 fl (mikrometer kubik/ um3)

MCH (pg/) =
Eritrosit (106/ul)
• Nilai normal : 28-34 pg/sel
Mean Corpuscular Hemoglobin Concentration (MCHC)

• Mengukur rata-rata kadar Hb di dalam semua eritrosit

• Digunakan untuk memantau terapi anemia
• Nilai normal 32-36 g/dl
• Cara hitung

Hb (g/dl) X 100
MCHC = g/dl
Ht (%)
 V. Red Cell Distribution Width (RDW)
• Dihitung secara otomatik
• Cara hitung :
SD ukuran eritrosit
RDW = X 100
MCV

• Menunjukan variabilitas ukuran eritrosit abnormal

konfirmasi morfologi pada sediaan hapus darah tepi
• Anisositosis  RDW meningkat
• Nilai normal  11.5-14.5 (CV %)
Hitung trombosit
• Komponen penting dlm darah rutin; cara
manual - pengamatan visual thd darah yg
diencerkan
• Ketelitian cara manual < automatik
• bahan pemeriksaan manual darah EDTA dari
vena; dari kapiler < baik -> hilang waktu
perlukaan
• Diluent : ammonium-oksalat 1 % -> melisis
kan sel-sel eritrosit ->puing eritrosit dpt ter
hitung, bisa dihindari dg kehati-hatian serta
pengalaman. Diluen yg dianjurkan formal-
citrat
• Metode: 0.1 ml darah campurkan kdlm 1.9 ml
diluent; campur dlm mechanical mixer 10-15’
isikan ke blk hitung, biarkan 20’ dlm piring
petri lembab, periksa mikr fase kontras
• Ketelitian dan ketepatan dpt dilakukan dg
hati-hati terutama kebersihan waktu
persiapan; pengalaman dpt membedakan
trombosit/bukan
• Cara manual CV= 8-10 %
Hitung retikulosit
• Retikulosit mengandung sisa RNA ribosom, yg
ada dlm sitoplasma rubrisit
• Ribosom bereaksi dg azur B/brilliant cresyl
biru/new methylen biru -> granula/filamen
biru (hanya tercat bila sel masih hidup)
• Retikulosit - 4 kelompok: dari retikulosit im
mature (gumpalan retikulin) sp mature (gra
nula retikulin)
• Sediaan yg dibiarkan kering difiksasi meta-
nol -> dg pengecatan Wright/Giemsa tam-
pak retikulosit sbg eritr yg tercat biru.
• Jumlah retikulosit dinyatakan dlm prosenta
se eritrosit -> menggambarkan aktivitas e-
ritropoiesis
• Cara manual: New methylen biru lebih baik
dari Brilliant Cresyl biru
Pewarnaan PAS

• PAS terutama digunakan utk sitokimia leuko-

sit Eritrosit mature & sitoplasma normoblas
bbg tahap pengembangan normal tidak tercat
• Eritroblas pd peny bisa bereaksi positif: pd
eritroleukemia tercat difus, pada thalasemia,
def besi, sideroblastik, bbg macam leukemia
dan anemia hemolitik tercat difus dg derajad
yg lebih sedikit
Sitokimia leukosit
• Uji sitokimia utk menunjukkan ensim spesi-
fik atau substansi lain yg ada di sel-sel he-
mopoietik, terutama sel-sel imature & lim-
fosit ok dg pengecatan Romanovsky tak dpt
mengidenti-fikasi perbedaan morfologi
• Utk diagnosis & klasifikasi leukemia:
1) membedakan sel-sel granulostik & mono-
sitik dlm leukemia akut & mengenal bbp tipe
ALL
2) Karakteristik sel dlm CLL dan limfosit normal;
3) membedakan leukositosis pd reaksi leuke-
moid dan gg myeloproliferatif;
4) mempelajari kelainan def ensim neutrofil

• Berbagai macam pewarnaan sitokimia:

1). Reaksi myeloperoksidase, ensim lisosomal
terletak dlm granula azurofil neutrofil &
monosit
2). Sudan Black B, ngecat granula neutrofil
mengandung fosfolipid
3). Neutrofil fosfatase alkali, aktivitasnya pd
sitoplasma neutrofil mature (segmen),
jarang pd batang
4). Reaksi PAS, reaksi positif biasanya menun-
jukkan adanya glikogen; bila diberi ludah
menghilang
5). Reaksi fosfatase asam, tdp dlm lisosom
sel-sel hemopoietik spt mielosit,
polimorfonu-klear, limfosit plasma
sel,platelet & semua sel fagosit
mononuklear
Reaksi sitokimia dlm praktek
• Ada 4 kelompok keganasan sel hemapoietik
yg dg metode sitokimia dpt digunakan utk
diagnosis benar dan klasifikasi:
1). Leukemia akut, proliferasi sel-sel blas
2). Gg myeloproliferatif khronik, proliferasi
seri myeloid
3). Gg limfoproliferatif khronik, proliferasi sel-
sel limfoid
4). Sindroma myelodysplastik
• Sbg dasar klasifikasi pengecatan May-
Grunwald-Giemsa thd sediaan apus darah
tepi/ sumsum tulang
• Uji sitokimia menunjukkan arah & tipe dife-
rensiasi seluler, bukan sbg pelengkap ana
lisis morfologi; uji sitokimia primer yg di-
rekomendasi : myeloperoksidase, chloro-
asetat esterase, -naftil asetat esterase
• Klasifikasi & sitokimiawi AML lihat tabel
• Klasifikasi imunologik & sitokimiawi ALL
lihat tabel. Uji sitokimia yg digunakan: dlm
memepelajari ALL reaksi PAS & fosfatase
asam.
Gambaran sediaan apus drh tepi
• Eritrosit: gambaran morfologi eritrosit
• Leukosit: gambaran morfologi leukosit
• Trombosit: gambaran morfologi trombosit
• Kesimpulan: apa saja yg dioperoleh, serta
gambaran diagnosis yg mungkin/belum dpt
disingkirkan
• Saran: pemeriksaan yg masih perlu
Morfologi eritrosit
• Sediaan dicat Wright/Giemsa/MGG
• Pewarnaan Hb: normokhrom, hipokhrom,
poli-khromatofilia
• Ukuran: normosit, mikrosit, makrosit,
anisosito sis
• Bentuk: poikilositosis, sferositosis, leptosito
sis, sistositosis, eliptositosis, stomatosis
• Fragmen/inklusion: basofilik stipl, Howell-
Jolly bodies, Heinz bodies, eritr berinti
Morfologi leukosit
• Hitung jenis: mieloblas, mielosit,
promielo-sit, metamielosit, neutr
batang, neutr seg-men, eosinofil, basofil,
limfoblas, limfosit, monoblas, monosit
• Kelainan morfologi: ekuisita granulasi-
tok-sik, Dohle bodies, granula azurofilik,
hiper-segmentasi, makropolisit,
heriditer: anoma-li Alder-Relly, May-
Hegglin, Pelger-Heut, Chediak-Higashi
• Kelainan hitung jenis: granulositosis /
neutrofilia, neutropenia, limfositosis,
limfositopenia, monositosis, monosito
penia, eosinofilia, basofilia, geser kekiri
• Limfosit sirkulasi normal sel T 75-80, sel
B 10-15 % dan sel Nol sisanya. Limfosit
atipik (sel Downy), immune activation T
cell
• Monosit di sirkulasi sedikit, di jar 
disebut makrofag
Evaluasi laboratorik
Hemopoiesis 
Gamb sediaan sums tulang
• Sampling : aspirasi/punksi sumsum
tulang, biopsi pd crista iliaca
ant/post, sternum, pd anak < 2 th
bag proks tibia; Dry-tap/blood-tap
• Yg dinilai : kepadatan sel/selularitas :
sel sms/sel lemak 1-2,-> hi-
poseluler/aplastik, hiperseluler; rasio
Mieloid/eritroid normal 2/1-4/1;
hitung jenis sel sel berinti
Eritropoiesis:
• Hitung retikulosit : retik terhitung x f
korek
• Sitologi sumsum tulang :
proeritroblas - eri troblas basofil -
eritr polikhromatofil - eritr
ortokhromik - retikulosit
• Eritropoietin (cara RIA/Elisa),
bermanfaat utk membedakan
polisitemia primer / sekun-der