Anda di halaman 1dari 13

KROMATOGRAFI

“ UHPLC “
Anggota Kelompok :
• Nadya Rachman (P24840419044)
• Nanda Putri Rahayu (P24840419045)
• Nofiani Zikria (P24840419047)
• Nur Adinda Salsabila (P24840419048)
• Nur Khoerunnisa D.H (P24840419050)
• Qatrun Nada Aprila Taas (P24840419054)
Apa itu UHLPC ?
Ultra High Pressure Liquid Chromatography (UHPLC) merupakan
kromatografi cair kinerja tinggi yang memiliki modifikasi teknologi pada
sistem pompa dan kolom kromatografinya. Dibandingkan dengan
kromatografi cair teknik menengah (Medium Pressure Liquid
Chromatography) yang beroperasi pada tekanan sampai sekitar 600 psi
(sekitar 40 bar) dan HPLC yang beroperasi sampai sekitar 400 bar, batas
tekanan yang dihasilkan pompa UHPLC sebesar 15.000 psi (sekitar
1.000 bar).
Penggunaan Sistem Pada UHPLC
Pada UHPLC digunakan partikel yang memadukan kelebihan dari bahan
silika dan polimer. Senyawa yang digunakan merupakan gabungan
sintesis solid dan gel yang mengandung gugus-gugus metil. Sifat kolom
ini kuat secara mekanik, memiliki efisiensi tinggi, dan dapat digunakan
pada rentang pH yang luas. Dalam perkembangannya dipertimbangkan
sifat kolom yang stabil secara mekanik, sehingga dikembangkan
teknologi BEH (Bridged Ethane Hybrid). Partikel berdiameter 1,7 μm ini
memiliki stabilitas secara mekanik melalui adanya struktur jembatan
penghubung berupa gugus- gugus metil di dalam matriks silika.
Partikel berdiameter 1,7 μm selanjutnya dikemas dalam kolom dengan
melibatkan permukaan kolom bagian dalam yang halus dan desain
penghubung dengan sambungan yang baik untuk menjaga partikel-
partikel halus ini. Keseragaman pengemasan juga menjadi parameter
kritis, terutama jika kolom berukuran lebih pendek ditujukan untuk
menghasilkan resolusi yang baik sementara pemisahan hendak
dilakukan secara cepat. Pada kondisi tekanan yang tinggi dalam
diameter kolom yang umum digunakan di HPLC, yaitu sebesar 3,0
hingga 4,6 mm, energi pemanasan fase gerak yang saling bergesekan
akan berdampak signifikan pada turunnya kinerja oleh karena suhu
yang mempengaruhi aliran yang tidak seragam. Untuk meminimalisasi
dampak gesekan panas ini, digunakan diameter kolom yang lebih kecil
pada UHPLC, yaitu antara 1,0 – 2,1 mm.
Bagaimana Cara Kerja UHPLC ?
Cara Kerja UHPLC :UPLC didasarkan pada prinsip penggunaan fasa diam
yang terdiri dari partikel kurang dari 2 μm (sedangkan kolom HPLC
biasanya diisi dengan partikel berukuran 3 hingga 5 μm). Prinsip dasar
evolusi ini diatur oleh Van Deemter [4], yaitu rumus empiris yang
menjelaskan hubungan antara kecepatan linier dan ketinggian bidang.
H = A + B / u + Cu
Menurut Van Deemter pelebaran pita disebabkan oleh tiga faktor:
difusi Eddy (A), difusi longitudinal (B), dan transfer massa (CVa
Ketinggian plat (H) digunakan untuk memperkirakan efisiensi kolom
berdasarkan tiga faktor ini.
Transfer massa dan difusi longitudinal keduanya tergantung pada
kecepatan fase gerak linier (u).
Pada kecepatan rendah, difusi longitudinal dominan dan ketika
kecepatan meningkat efeknya berkurang; senyawa-senyawa tidak
punya waktu untuk berdifusi secara longitudinal. Di sisi lain, input
perpindahan massa tumbuh dengan meningkatnya kecepatan (Salonen,
2017)
Perbedaan UHPLC dengan HPLC
Pompa pada sistem HPLC konvensional hanya mencapai tekanan 400
bars. Sedangkan pompa pada sistem UHPLC dapat mencapai tekanan
hingga 1000 bar.
Hasil kromatogram UHPL yang lebih sempit, tajam, dan tinggi
dibandingkan kromatogram HPLC konvensional yang menghasilkan
kromatogram yang lebih lebar dan pendek.
Tekanan UPLC dapat mencapai 100 MPa, sedangkan pada sistem HPLC
maksimum hanya 35-45 MPa, tergantung pada sistem tertentu.
Keunggulan UHPLC
• Penurunan run time dan peningkatan sensitivitas.
• Menghasilkan selektivitas, sensitivitas, dan rentang dinamis analisis
LC.
• Biaya operasional secara drastis menurun.
• Konsumsi pelarut yang lebih rendah.
• Penurunan waktu yang diperlukan untuk siklus proses sehingga lebih
banyakproduk yang dapat dianalisis.
• Penjaminan kualitas produk akhir, terutama pada uji pelulusan akhir.
• Analisis cepat, mengukur analit dan produk secara akurat.
Kerugian UHPLC

• Kerugian utama yang terjadi dalam penggunaan UHPLC adalah umur


kolom, selama analisis tekanan tinggi dikembangkan karena ukuran
partikel. Menambah tekanan mengurangi masa pakai kolom. Karena
tekanan yang meningkat memerlukan lebih banyak perawatan dan
mengurangi umur kolom jenis ini.
Penerapan UHPLC
1. Analisis farmasi
Metode yang digunakan dalam bahan obat dan analisis produk obat harus
dikembangkan dan divalidasi dengan baik dan proses ini memakan banyak
waktu pada HPLC konvensional. UHPLC memberikan ruang untuk
pengembangan dan validasi metode analisis dalam waktu yang lebih singkat.

2. Analisis lingkungan
UHPLC menyediakan analisis sampel ini dengan lebih sedikit waktu, biaya,
dan lebih banyak informasi tentang konten sampel. Beberapa aplikasi UHPLC
adalah analisis komponen organik dalam tanah, udara, limbah berbahaya, air
minum, air limbah, residu pestisida dan analisis senyawa perfluorinasi (PFC).
3. Analisis makanan
Produsen makanan selalu mencari solusi ringkas untuk pengujian makanan
sehingga UHPLC dapat mengurangi biaya operasi, meningkatkan
produktivitas dan memberikan identifikasi beragam bahan kimia dalam
sampel makanan, sehingga memberikan keamanan publik.

4. UHPLC Forensik dan Toksikologi


Dapat ditemukan aplikasi yang baik dalam identifikasi penyalahgunaan obat
dari sampel darah, urin dan oral. Beberapa kanabinoid, opioid, barbiturat
dapat diidentifikasi dan dianalisis dengan UHPLC. Kombinasi UHPLC dengan
berbagai instrumen memberikan manfaat unik dari skrining obat dengan
sensitivitas dan akurasi yang sangat baik pada tingkat jejak.
THANK
YOU