KARAKTERISASI

01. HIDROLISAT 02.

Konten Konten lipid dan kelas lipid
protein
Kandungan protein hidrolisat terliofilisasi ditentukan Kelas lipid ditentukan dengan kromatografi lapis tipis (KLT) menggunakan

menggunakan FP-528 LECO nitrogen analyzer yang heksana / dietil eter / asam asetat (65: 35: 1, v / v / v) sebagai pengembangan

dikalibrasi dengan asam ethylenediaminetetraacetic sistem pelarut. Piring yang dikembangkan disemprot dengan 10% asam
fosfomolibdat dalam etanol dan dipanaskan pada 120 ° C selama 5 menit.

03.
Distribusi massa hidrolisat
molekul
Distribusi massa molekul hidrolisat protein ikan dengan
kromatografi filtrasi gel dengan FPLC ÄKTA dengan
menggunakan Peptide Superdex 10/300 kolom GL
dengan detektor UV pada 254 nm. Eluen 30% asetonitril
dengan asam trifluoroasetat 0,1% pada laju alir 0,5 ml /
menit.
04.
Penentuan aktivitas antioksidan
alikuot dari setiap sampel (50 μL) dicampur dengan 100 μL larutan buffer Tris
(50 mM, pH 7.4) dan dengan 850 μL larutan yang disiapkan setiap hari dari 1,1-
difenil-2-picrylhydrazyl (DPPH) pada 0,1 mM dalam metanol. Campuran itu
kemudian disimpan pada suhu kamar dalam gelap selama 30 menit, dan
pengurangan
Radikal DPPH diukur pada 515 nm.
 KARAKTERISASI
05.
HIDROLISAT 06.
Mengurangi Aktivitas chelating besi (Fe2 +)
kekuatan Disuling air (3,7 mL) ditambahkan ke 1 mL setiap larutan protein
Daya reduksi sampel hidrolisat protein ikan ditentukan menurut
hidrolisat ikan pada konsentrasi yang berbeda (0,2-1 mg / mL).
metode Oyaizu . 2 mL masing-masing hidrolisat pada konsentrasi
Kemudian, 100 μL besi klorida 2 mM ditambahkan dan setelah 3
protein yang berbeda (3-20 mg / mL) ditambahkan ke 2 mL buffer
menit reaksi terhambat oleh penambahan 200 μL larutan ferrozine 5
fosfat 0,2 mM (pH 6,6) dan 2 mL 1% kalium ferricyanide. Campuran
mM. Campuran itu dikocok dengan kuat dan dibiarkan pada suhu
reaksi diinkubasi pada 50 ° C selama 20 menit dan kemudian 2 mL dari
kamar selama 10 menit, dan daya serap diukur pada 562 nm.
10% TCA ditambahkan. Campuran ini disentrifugasi pada 1500 × g
selama 10 menit. Alikuot supernatan 2 mL dicampur dengan 2 mL air
suling dan 0,4 mL besi klorida 0,1%. Lalu absorbansi larutan yang
dihasilkan dicatat pada 700 nm sesudahnya 10 menit. Volume yang
setara dari air suling bukan sampel digunakan sebagai kontrol. Analisis
dilakukan dalam rangkap tiga.
 KARAKTERISASI
HIDROLISAT
07. 08.
Identifikasi teoritis peptida Analisis statistik
antioksidan
adanya antioksidan yang sebelumnya dilaporkan dalam struktur Perangkat lunak Statgraphics (versi 5.1) digunakan untuk melakukan
protein ikan akan memberikan gambaran tentang peptida yang bisa oneway analisis varians (ANOVA) pada data. Nilai rata-rata
bertanggung jawab untuk aktivitas antioksidan dari hidrolisat. dibandingkan dengan menggunakan tes Tukey. Perbedaan antara cara
Protein utama ikan (65-75%) bersifat struktural protein seperti aktin dipertimbangkan signifikan pada p ≤ 0,05.
dan miosin. Kelompok penting lainnya adalah sarkoplasma protein
(myoalbumin, globulin dan enzim) yang mewakili 20–35% dari
total protein.