Kloning Gen

Teknologi DNA rekombinan =

Kloning gen, Rekayasa
genetika, Kloning molekuler

Prinsip dasar teknologi DNA rekombinan adalah

memasukkan suatu gen dari suatu organisme ke sel
host dengan tujuan memelihara gen tersebut
secara terus menerus dan dipelajari.
Langkah-langkah dalam kloning
DNA
Teknologi DNA rekombinan
• Berkembang pada awal tahun 1980.
• Berakar dari ilmu biokimia dan genetika.
• Terjadi peningkatan pengetahuan yang
signifikan tentang dasar molekuler
penyakit-penyakit genetik pada manusia.
• Diterapkan dalam bidang pertanian,
peternakan, kedokteran forensik, penelitian
–penelitian dasar.
Enzim restriksi endonuklease
• Teknologi DNA rekombinan tidak dapat
berjalan tanpa adanya enzim restriksi
endonuklease.
• RE dapat memotong secara simetris ikatan
fosfodiester pada untai DNA yang
berlawanan pada situs spesifiknya.
• Contoh: EcoRI GAATTC
CTTAAG
Beberapa contoh enzim restriksi

Enzim Sekuens Jenis ujung End sequences

pengenalan
EcoRI 5’-GAATTC-3’ Sticky, 5’ overhang 5’-G AATTC-3’
3’-CTTAAG-5’ 3’-CTTAA G-5’

BamHI 5’-GGATCC-3’ Sticky, 5’ overhang 5’-G GATCC-3’

3’-CCTAGG-5’ 3’-CCTAG G-5’

AluI 5’-AGCT-3’ Blunt 5’-AG CT-3’

3’-TCGA-5’ 3’-TC GA-5’

PstI 5’-CTGCAG-3’ Sticky, 3’overhang 5’-CTGCA G-3’

3’-GACGTC-5’ 3’-G ACGTC-5’
Enzim
restriksi
endonuklease
 Vektor kloning
• Suatu “wadah” yang dipergunakan untuk
memperbanyak fragment DNA yang ingin
dipelajari, untuk transkripsi, invitro
mutagenesis, dan sekuensing DNA insert.
• Terdiri dari beberapa macam: plasmid
(elemen bakteri ekstrakromosom yang
dapat bereplikasi sendiri), bakteriophage,
cosmid, YAC, dll.
Vektor
Plasmid pBR322
 Syarat vektor kloning

• Dapat dipelihara dan direplikasikan di dalam sel

host.
• Mengandung banyak situs restriksi endonuklease
tunggal yang menyediakan pilihan situs insersi yang
memungkinkan.
• Contoh: Pemotongan DNA sumber dan vektor
dengan enzim RE yang sama, disatukan dalam tube
yang sama, ditambahkan enzim T4 DNA ligase
DNA diinkorporasikan ke situs spesifik.
• Membawa gen resisten terhadap antibiotik
tertentu.
Aplikasi Teknologi DNA
Rekombinan
Terapi Gen
DNA Fingerprint
Menghasilkan Tanaman Unggul
Basic Research