PRAKTIKUM KULTUR

JARINGAN
pembuatan larutan stok
medium
Stok solution Komponen medium ∑ Awal (mg/L) Pemadatan (mg/L)
Stok solution I NH4NO3 1650 33000 (20 x)
KNO3 (>alkalis) 1900 38000 (20 x)
CaCl2 2 H2O 440 8800 (20 x)
MgSO4 7 H2O 370 7400 (20 x)
KH2PO4 170 3400 (20 x)
Stok solution II KI 0,83 166 (200 x)
H3BO3 6,2 1240 (200 x)
MnSO4 4 H2O O22,3 4460 (200 x)
ZnSO4 7 H2O 8,6 1720 (200 x)
Cu SO4 5 H2O 0,02 55 (200 x)
CoCl3 6 H2O 0,02 55 (200 x)
Stok solution III FeSO4 7 H2O 27,8 5560 (200 x)
Na3 EDTA 2 H2O37,37460 37,3 7460 (200 x)
Stok solution IV Inositol 100 20000 (200 x)
Nicotinic acid 0,5 100 (200 x)
Pyridoxine HCL 0,5 100 (200 x)
Thiamine HCL 0,1 100 (200 x)
Glycine 2 400 (200 x)
 Larutan stok 1, diambil 50 mL/1000 ml medium
1. Siapkan erlenmeyer volume 1000mL dan isi 300 mL
2. Timbang satu persatu komponen medium sejumlah seperti dalam
Tabel dan masukkan satu persatu komponen medium yg sudah
ditimbang ke erlenmeyer
3. Tambahan air aquades sampai volume 1000 mmL

Komponen medium Pemadatan Masukkan dalam erlenmeyer

STOK 1
NH4NO3 20 x 33000 mg/L
KNO3 (>alkalis) 20 x 38000 mg/L
CaCl2 2 H2O 20 x 8800 mg/L
MgSO4 7 H2O 20 x 7400 mg/L
KH2PO4 20 x 3400 mg/L
 Larutan stok 2, diambil 5 mL/1000 ml medium
1. Siapkan erlenmeyer volume 1000mL dan isi 300 mL aquades
2. Timbang satu persatu komponen medium sejumlah seperti dalam
Tabel dan masukkan satu persatu komponen medium yg sudah
ditimbang ke erlenmeyer yang sudah berisi air 300 mL
3. Tambahan air aquades sampai volume 1000 mmL
Komponen medium Pemadatan Masukkan dalam erlenmeyer

KI 200 x 166 mg/L

H3BO3 200 x 1240 mg/L STOK 2
MnSO4 4 H2O 200x 4460 mg/L
ZnSO4 7 H2O 200 x 1720 mg/L
Cu SO4 5 H2O 200 x 55 mg/L
CoCl3 6 H2O 200 x 55 mg/L
 Larutan stok 3, diambil 5 mL/1000 ml medium

1. Siapkan erlenmeyer volume 1000mL dan isi 300 mL aquades

2. Timbang satu persatu komponen medium sejumlah seperti
dalam Tabel dan masukkan satu persatu komponen medium
yg sudah ditimbang ke erlenmeyer yang sudah berisi air 300
mL
3. Tambahan air aquades sampai volume 1000 mmL
Masukkan dalam STOK 3
Komponen medium Pemadatan erlenmeyer

FeSO4 7 H2O 200 x 5560 mg/L

Na3 EDTA 2 H2O37,37460 200 x 7460 mg/L
 Larutan stok 4, diambil 5 mL/1000 ml medium
1. Siapkan erlenmeyer volume 1000mL dan isi 300 mL aquades
2. Timbang satu persatu komponen medium sejumlah seperti dalam
Tabel dan masukkan satu persatu komponen medium yg sudah
ditimbang ke erlenmeyer yang sudah berisi air 300 mL
3. Tambahan air aquades sampai volume 1000 mmL

Masukkan dalam
Pemadatan
Komponen medium erlenmeyer

Inositol 200 x 20000 mg/L

Nicotinic acid 200 x 100 mg/L
STOK 4
Pyridoxine HCL 200x 100 mg/L
Thiamine HCL 200 x 100 mg /L
Glycine 200 x 400 mg/L
 Rumus Pengenceran
• V1N1=V2N2 Amonium Nitrat
• V? 33000=1000.1650
• V=50 mL

• V1N1=V2N2 Kalium Iodida di add 1000

• V? 166=1000 0,83
V=5
 Tahap-tahap pembuatan medium

 Siapkan erlemmeyer ukuran 1 liter, isi dengan air suling  300 ml, hal ini dimaksdkn spy tdk
terjd pengendapan garam 2
 Pipet masing2 lar induk sesuai kebutuhan untuk 1 liter med, satu persatu lar induk tsb dimsukn
kedlm erlenmeyer yg sdh berisi air suling.
 Tambahkan zpt sesuai perlakuan & seny org komplek yg lain jk diperlukan (jus tomat, jus
kentang, air kelapa/senyawa2 lain yg dibtuhkan). Apabila suplemen lain yg di+kan bersft
trmolabil mk proses sterilisasi dilak dg penyaringan mengg filter milipore yg uk pori2 ant 0,22-
0,45 mikrometer (ssdh med.disterilisasi).
 Stlh semua lar induk msk, tbahkn gula sesuai takaran, med dikocok dg konstan mengg pengaduk
magnetik. Seteleh gula semua larut, selanjutnya diukur pH lar 5,8. Apabila pH lar.terll asam di+.
lar basa (NaOH 0,1 N) & sebaliknya apabila pH lar trll basa di+ lar asam (HCL 0,1 N). Selanjutnya
vol lar med yg sdh mengand komponen lengkap & sdh diatur pHnya +kan air suling & ditera dg
mengg labu ukur
Langkah2 Pembuatan medium 1 L
medium MS
1. Masukan air 300 ml akuades dlm erlenmeyer 1000 ml
2. Masukan 50 ml hara makro (Stock solution I)
3. Masukan 5 ml stok mikro (Stock solution II)
4. Masukan 5 ml stok Fe (FeEDTA) (Stock solution III)
5. Masukkan 5 ml stok vitamin, myoinositol (Stock solutionIV)
6. Masukkan hormon, sesuai dosis
7. Masukkan sukrosa 30 g
8. Tambah aquades sampai vol mendekati 1000 ml
9. Ukur pH antara 5,7-5,8 (dg KOH atau HCl)
10. Tambah aquades sampai volume 1000 ml (dlm labu ukur)
11. Masukkan 8 g agar-agar , masak dalam Erlenmeyer
12. Dimasak sampai mendidih dan berwarna bening
13. Maskkn dlm botol kultur (@ 20 ml/botol), tutup aluminium foil
14. Sterilisasi dg autoklaf pd sh 125 0C slm 15 ‘ tekanan 15 psi
 Tahap-tahap pembuatan medium
 Tambahkan bhn pmdt sesuai tak (jk menghendaki med
pdt),selnjtnya dipanaskan sampai mendidih. Sementara
siapkan wdh kultur yg sudah steril dg kapasitas sesuai dg
keb.
 Selanjutnya med dibagikan dlm wadah kultur sesuai ukuran,
wdh kultur dittp dg aluminium foil/plastik tahan panas.
 Wadah2 kultur yg sdh berisi med & siap disterilisasi di
pindahkan ke dlm kerangjang2 yg sesuai & selanjutnya
disterilisasi dg autokalsf pd suhu 120C & tekanan 1,06
kg/cm2 selm 15 menit (tgt vol setiap wadah)
 Jika mengg petri2 plastik tdk thn sterilisasi dg autoklaf, mk
med disterilisasi dg wadah bervol 250-500 ml, ssdh proses
autoklafing, med dibiarkan dingin sampai suhu 60C
selanjutnya dituangkan ke vial2 di bwh kond aseptik (dlm
Laminair air flow cabinet).
 FORMAT LAPORAN PRAKTIKUM
• 1, JUDUL PRAKTIKUM
• 2 TUJUAN
• 3.DASAR TEORI
• 4, ALAT DAN BAHAN
• 5, METODE
• 6, HASIL DAN PEMBAHASAN
• 7, KISIMPULAN
• 8, DAFTAR PUSTAKA