WESTERN BLOT

MENGAPA
 KONFIRMASI IDENTITAS SUATU
PROTEIN
 BERBAGAI PROTEIN YANG BERBEDA
DAPAT MEMILIKI MW YANG SAMA
DARI HASIL SDS-PAGE
 BAGAIMANA CARANYA
 MENGGUNAKAN ANTIBODI
 ANTIBODI TERSEBUT SANGAT
SPESIFIK TERHADAP ANTIGEN
TARGET
MOLEKUL ANTIBODI
Tahap 1 : Gel Electrophoresis
 Tahap 2 : transfer ke nitroselulosa

 Elektroda positif
 Sponge
 Kertas saring
 Nitroselulosa
 Gel
 Kertas saring
 Sponge
 Elektroda negatif
 TAHAP 3 : PROSES BLOTTING

 BLOCKING
 ANTIBODI PERTAMA
 PENCUCIAN
 ANTIBODI KEDUA YANG MENGANDUNG
MOLEKUL FLUORESENCE ATAU ENZIM
 PENCUCIAN
 DETEKSI
WESTERN BLOT DEVELOPMENT
 Antibody reagents
 Komponen paling penting dalam
western blotting
 Antibodi primer bersifat spesifik
 Antibodi sekunder bersifat lebih
general dan biasanya berkaitan dengan
aktivitas enzim
 Reagen bersifat colorimetric
 Non-specific blocking agent
SDS-PAGE VS WESTERN BLOT
 SENSITIVITAS WESTERN BLOT
 1). 10 pg
 2). 25 pg
 3). 50 pg
 4). 100 pg
 5). 1000 pg