Anda di halaman 1dari 64

PEMISAHAN &

PEMURNIAN
TITIK SUNARNI
KONTRAK PERKULIAHAN
PEMISAHAN DAN PEMURNIAN
Mata kuliah WAJIB yang berisikan tentang :
 cara-cara  melakukan proses pemisahan dan pemurnian suatu analit
dalam  suatu sampel atau memisahkan pengotor dari sampel yang ada
dengan beberapa metode seperti  ekstraksi dan kromatografi.
 Metode isolasi kandungan kimia tanaman yang meliputi senyawa
alkaloid, alkaloid, flavonoid, triterpene dan steroid
MODEL PERKULIAHAN : CERAMAH DAN PENUGASAN PRESENTASI

DOSEN PENGAMPU :
1. Dr. apt. Titik Sunarni
2. Dr. apt. Iswandi
3. Dr. Suwandri
PEMISAHAN & PEMURNIAN
 Ilmu pemisahan (Separation Science)
Ilmu yang mempelajari gejala fisika dan kimia yang
terlibat dalam proses atau pencapaian pemisahan,
pengembangan dan penggunaan berbagai proses
pemisahan.

 Definisi pemisahan :
Cara kerja atau pengerjaan sehingga suatu campuran
dibagi menjadi sekurang-kurangnya 2 bagian atau lebih
yang berbeda susunannya
SISTEM PEMISAHAN
TERDIRI DARI 2 FASE :
FASE 1
FASE 2

METODE FASE 1 FASE 2


Kromatografi Fase Diam Fase Gerak
ECC Rafinat Ekstraktan
Dialisis Retentat Difusat
TAHAPAN ISOLASI
3 (tiga) tahapan utama dalam isolasi :
 Ekstraksi
 Fraksinasi
 Pemurnian

Bahan Tumbuhan

Ekstraksi Fraksinasi Pemurnian


The aims of extraction
a Isolation a compound  structure

b Isolation of identity Compound (marker)

c Standardization of extract

d Pharmacology effect test

e Preparation of dosage form


o und
c o mp
i on a
ure 2 STRATEGI RISET BAHAN ALAM
la t c t
Iso stru DALAM ISOLASI
1. Older strategies:
a. Focus on chemistry of compounds from natural sources, but not on activity.
b. Straightforward isolation and identification of compounds from natural sources followed by
biological activity testing (mainly in vivo).
c. Chemotaxonomic investigation.
d. Selection of organisms primarily based on ethnopharmacological information, folkloric
reputations, or traditional uses.
2. Modern strategies:
a. Bioassay-guided (mainly in vitro) isolation and identification of active ‘‘lead’’ compounds
from natural sources.
b. Production of natural products libraries.
c. More focused on bioactivity.
d. Production of active compounds in cell or tissue culture, genetic manipulation, natural
combinatorial chemistry, and so on.
e. Introduction of the concepts of dereplication, chemical fingerprinting, and metabolomics.
f. Selection of organisms based on ethnopharmacological information, folkloric reputations,
or traditional uses, and also those randomly selected.
Isolation a compound 
Natural Product
a structure

Phytochemistry Crude drug


Screening
Extraction
Extract

te nt Fractionation

l c on Fraction
m ica gies)
c he trate Separation -
s ed r s
a
B (old e Purification
Isolate
Characterization
& Identification
Molecular
structure
c omp ou nd
Isolation a ure
a struct

ct i vit y
se d A s)
Ba te g ie
s t ra
e r n
(mod

Structure of active compound


b z ati on of
Natural Product
ar di
an d
St
tr act
ex
Phytochemistry Crude drug
Screening
Extraction

Phytochemistry Extract
Screening
Standardization

Standardized
Extract
Natural Product
c i dent i ty
n o f )
a tio k er Crude drug
Isol ( m ar
ou nd
p
com Extraction
Extract
Fractionation

Fraction
Separation -
Purification
Isolate
Characterization
& Identification
Marker
d fe ct Natural Product
gy ef
co lo
Pharma
test Crude drug

Extraction

Phytochemistry Extract
Screening
Standardization

Standardized
Extract
Pharmacology test

Pharmacology
Effect
f
d ti on
o
Natural Product
a r a rm
p fo
Pre sage
do
Crude drug

Extraction

Phytochemistry Extract
Screening
Standardization

Standardized
Extract
Formulation

Dosage Form
EXTRACTION
 Extracting of component in
crude drug – selectively with
suitable solvent

Criteria of solvent :
• Dissolve solute
• Selective
• Volatile
• Non toxic
• Non corrosive
• Non expensive relatively
• Viscosity
Extraction
Using suitable solvent

Extraction

Non polar Polar


solvent solvent
N-Hexana Semi polar EtOH, MeOH
solvent
EtOAc, CH2CL2, CHCl3
PELARUT
 Banyak digunakan :
n-heksana, benzene, diklormetan (CH2Cl2), kloroform
(CHCl3), aseton, etilasetat, metanol, etanol dan air
 Kualitas Pelarut yang digunakan :
sebaiknya teknis yang di re-distilasi atau pa (pro analisis)

Tujuan redistilasi :
Untuk menghilangkan bahan kimia lain yang seringkali ada
dalam pelarut teknis yang dapat mengacaukan proses
isolasi
Kontaminan pelarut

Isolasi Alkaloid kulit kina :


 Oleh senyawa peroksida dalam pelarut eter
(technical grade) diubah menjadi bentuk
turunan N-oksida oleh senyawa peroksida.
 Senyawa hasil oksidasi relatif mudah larut
dalam air dibanding senyawa awalnya.

HO
N HO
N

O
R
R
N
N
Alkaloid kina Turunan N-oksida dari alkaloid
PENGGOLONGAN PELARUT
A. BERDASARKAN KEPOLARAN

N-Heksana
Benzena
Dietileter
Diklorometan Kepolaran meningkat
Kloroform
Etilasetat
Aseton
Etanol
Metanol
air
B. BERDASARKAN GUGUS FUNGSI
 Pelarut Hidroksi : Alkohol
 Pelarut Oksigen : Eter, Aseton
 Pelarut Belerang : Cs2
 Pelarut Klor : Kloroform
 Pelarut Hidrokarbon : N-heksana
 Pelarut Nitrogen : Piridin
 Pelarut Asetat : Asam Asetat
C. BERDASARKAN BAHAN ORGANIK / NON ORGANIK

PELARUT ORGANIK : PELARUT NON ORGANIK :

KEUNTUNGAN : KEUNTUNGAN :
 Melarutkan Lebih Slektif  MURAH
 Mdan Mudah Terbakarudah
Diperoleh Kembali KERUGIAN :
KERUGIAN :  Tidak selektif
 Harga Mahal  Tidak tahan lama
 Beberapa Toksik
PEMILIHAN PELARUT
ATURAN UMUM
Pelarut non-polar (petroleum eter dan heksana) akan larut senyawa non-
polar (lemak dan lilin).
Sedangkan pelarut polar (metanol, etanol dan air)  melarutkan senyawa
polar (garam dan gula alkaloid).         
(that mean like dissolve like)

Afinitas zat terlarut terhadap fase organik akan meningkat dengan


menggunakan pelarut campuran  daripada pelarut tunggal
(kadang-kadang digunakan campuran pelarut untuk  meningkatkan
kelarutan).
Example: solublization of an aliphatic carboxylic acid in
ethanol, acetone and a mixture of both.
O------------H-O-CH2-CH3

In ethanol -R-C Hydrogen bond


O-H

O Hydrogen
bond
In acetone R-C
CH3
O-H---------O=C
CH3
In a mixture of acetone and ethanol
O HO-C2H5 (ethanol)

R-C CH3
OH O=C (acetone)
CH3
KONDISI YANG HARUS DIPERHATIKAN
PADA WAKTU EKSTRAKSI
1. SUHU
2. PENGADUKAN
3. PENGGANTIAN PELARUT
4. PERBANDINGAN PELARUT – LINARUT
5. UKURAN MATRIKS
SUHU

MEMPENGARUHI BANYAK SOLUT YANG TEREKSTRAKSI


SEMAKIN TINGGI SUHU KELARUTAN SEMAKIN TINGGI
PENGADUKAN
TUJUAN PENGADUKAN :
AGAR TIDAK TERJADI KESEIMBANGAN KONSENTRASI

SEL YANG MASIH UTUH :


SEL PECAH

PELARUT MASUK SOLUT BERDIFUSI KE


PELARUT MUDAH LUAR SEL
SEL
MASUK SEL

DI SEKITAR DINDING
TERJADI
SEL TERJADI
KESEIMBANGAN GRADIEN
KONSENTRASI KONSENTRASI
DI ALAM DAN DIFUSI BERHENTI
LUAR SEL
PERBANDINGAN PELARUT – LINARUT
 CONTOH MASERASI :
BPOM RI 2011
 10 bagian serbuk simplisia dituangi dengan 75
bagian cairan penyari, tutup, biarkan 5 hari sambil
sesekali diaduk, serkai, peras, dengan cairan : 7 ,5
1
penyari secukupnya hingga diperoleh 100 bagian.
2. KEMENKES RI 2013
 Satu bagian serbuk simplisia dalam maserator 0
1 : 1
ditambah 10 bagian pelarut. Rendam selama 6 jam G
A N
pertama sambal sesekali diaduk, diamkan selama DIUL LI
18 jam. Pisahkan maserat 2 KA
 Ulangi penyarian sekurang-kurangnya 2 kali dengan
jenis dan setengah kali jumlah pelarut
KELARUTAN
(FARMAKOPE INDONESIA)
Jumlah bagian pelarut yang
Istilah kelarutan diperlukan untuk melarutkan
satu bagian zat
Sangat mudah larut Kurang dari 1
Mudah larut 1 - 10
Larut 10 - 30
Agak sukar larut 30 - 100
Sukar larut 100 - 1000
Sangat sukar larut 1000 - 10.000
Praktis tidak larut Lebih dari 10.000
BENTUK EKSTRAK
 EKSTRAK KERING
 EKSTRAK KENTAL
 EKSTRAK ENCER

EKSTRAK ENCER

U RUANG
TIDAK BOLEH DISIMPAN SUH
DALAM WAKTU LAMA CAHAYA

ARTEFAK DEKOMPOSISI
PEMEKATAN EKSTRAK
SUHU PEMEKATAN DENGAN
ROTAVAPOR

SUHU < 40⁰C


UNTUK MENGHIDARI DEKOMPOSISI
KOMPONEN TERMOLABIL

P E L A RUT
H
APAKA A M P U NG
I T
YANG D AVAOR
OT
DARI R GUNAKAN?
P A T D I
DA
Classification of extraction

1. Based on Form

A Liquid Solid Extraction

er at ion
Mac
percolatio
n
Reflux
Continuos extraction
(Soxhlet)
Maceration :
Soaking the crude drug with solvent in certain time

Percolation :
Wetting the crude drug with solvent and flowing the solvent
through the crude drug in certaine time

Continuous extraction (Soxhlet):


The solvent evaporate, condensation, condensate through
the crude drug, get substance from the crude drug.
EKSTRAKSI CAIR - PADAT
 PROSES PENARIKAN KOMPONEN DARI MATRIKS PADAT

KELARUTAN

PATOKAN EKSTRAKSI CAIR PADAT


‘LIKE DISSOLVE LIKE
PELARUT POLAR melarutkan komponen polar
PELARUT NON POLAR melarutkan komponen non polar
B Liquid-liquid extraction

Gradually extraction
(separation funnel)

Continually extraction (Craig


apparatus)
2. Based on contact time

Gradually extraction
A
maceration

reflux

LLE
(separation funnel)
Continullay extraction
B
Continuous extraction
(Soxhlet)

LLE (craig apparatus)


Based on energy

A Cold extraction

for thermolabil compound  Senyawa yang


sudah diketahui
to prevent dan termolabil
decomposition/artefact  Mengekstraksi
senyawa yang
component in crude drug belum diketahu
have not know yet

for soft material


`

B Hot extraction

For thermostabil compound

for hard material


When will extraction be finished ?
Extraction will be finished :
1. until colorless
2. extracted > 98 %
FRAKSINASI
 Pemisahan kandungan kimia ekstrak berdasarkan
polaritas.
 Pemisahan suatu campuran menjadi beberapa bagian
dengan ciri yang berbeda
Fractionation methods :

1 Liquid-liquid extraction

2 Chromatography
LIQUID LIQUID EXTRACTION

Substance removal from any liquid to


the other liquid that immiscible, by
shaking repeatedly

1.Separation Funnel
2.Craig apparatus
EKSTRAKSI CAIR-CAIR
 proses yang didasarkan pada distribusi solute dalam
dua macam pelarut yang satu sama lain tidak saling
larut.
 Solut larut dalam kedua macam pelarut yang tidak
saling campur dan terbagi dalam kedua macam
pelarut tersebut sampai dicapai keadaan yang
setimbang.
 Umumnya salah satu pelarut adalah air, shg Kd lebih
banyak dipengaruhi sifat fisikokimia pelarut ke-2
Terms in LLE

Extractant : Solvent that is


used to extract

Raffinate : Material/liquid that


to be extracted

Solute : Active compound in


raffinate
ONE STEP
LIQUID – LIQUID EXTRACTION
Partition coefficient (Kp) :
C raff
Kp =
C extr
C raff = solute concentration raffinate
C extr = solute concentration in extractant
Jika :
p = fraksi solut tak terekstraksi
q = fraksi solut terekstraksi
V raf = volume rafinat
V ekstr = volume ekstraktan

V raf
U=β=
V ekstr
jumlah solut tak terekstraksi
p=
Jumlah solut total

C raf . V raf
p=
C raf . V raf + C ekstr . V ekstr

Kp . U
p=
1 + Kp . U
jumlah solut terekstraksi
q=
Jumlah solut total

C ekstr . V ekstr
q=
C ekstr . V ekstr + C raf . V raf

1 q = 1 - p
q =
1 + Kp . U Prosen solute terekstrasi
% q = (1 - p)X 100%
Jika volume ekstraktan = volume rafinat

β=1 U=1
Maka :

Kp 1
p = q =
Kp + 1 1 + Kp
Jika ekstraksi dilakukan n kali
Maka :
Fraksi solut tak terekstraksi = pn
Fraksi solut terekstraksi = qn

Untuk menghitung fraksi solut terekstraksi n kali


jangan langsung menghitung dari qn tapi
menghitung dulu pn baru dicari qn

qn = 1 - p n
KERJAKAN SOAL BERIKUT INI
1. Jika suatu solut diekstraksi dengan sistem air – heksan mempunyai nilai
koefisien partisi 0,55. Volume air 25 ml, sedang volume heksan 40 ml.
Berapakah % solut terekstraksi setelah 4 kali ekstraksi dengan masing-
masing tahapan menggunakan volume heksan 40 mL?

2. Jika koefisien partisi suatu solut dalam sistem air – n-heksan 0,47 dan solut
terlarut dalam air 25 mL diekstraksi dengan masing-masing 40 mL n-heksan
sebanyak 3 kali. Berapakah % solut terekstraksi setelah 3 kali ekstraksi.
Berapakah % solut terekstraksi jika diekstraksi dengan sekaligus 120 mL n-
heksan (1 kali)?

3. Jika koefisien partisi suatu solut 0,49 diekstraksi dengan sistem air – heksan dimana
solut terlarut dalam heksan 50 mL diekstraksi dengan air 60 mL. Berapakah % solut
terekstraksi setelah 4 kali ekstraksi dengan masing-masing tahapan menggunakan
volume air 60 mL?
Petunjuk mengerjakan soal
 Jika mau menghitung harus ditentukan dulu mana yang
rafinat dan mana yang ekstraktan
 Umumnya yang disebut didepan rafinat
Misal :
Kp = 0,48 pada sistem air – heksan, maka :
Air  rafinat
Heksan  ekstraktan
tetapi jika ada pernyataan Kp = 0,48 pada sistem air –
heksan, solut terlarut pada heksan 50 ml diekstraksi
dengan air 60 ml, artinya :
Heksan  rafinat
Air  ekstraktan
Kp A = 0,48 pada sistem air – heksan, maka :
Air  rafinat
Heksan  ekstraktan

Bagaimana sifat kelarutan senyawa A?


Hubungan log Kp dan q
 Kurva log Kp
PARAMETER KEEFISIENAN PEMISAHAN
EKSTRAKSI CAIR CAIR
PATOKAN 2 KOMPONEN :
 KUOSIEN PEMISAHAN
 FAKTOR PEMISAH
PATOKAN 2 KOMPONEN
KUOSIEN PEMISAHAN = NISBAH KOEFISIEN PARTISI

 Dalam ekstraksi umumnya yang teribat tidak hanya 1 solut saja


 Ekstraksi akan berhasil memisahkan solut satu dg lainya jika masing-
masing solut mempunyai Kp yang sangat berbeda
 Daya pemisah 2 substansi dinyatakan dg faktor pemisah (α ) :

Kp1
 Kp yang lebih besar  pembilang
Kp2
α>1
 Makin besar α ekstraksi makin baik, namun saja tidak
bermanfaat
Contoh :
Campuran X : KpA = 2, Kp B = 0,5 α = 4,0
Campuran Y : Kp A = 20, Kp B = 5 α = 4,0
FAKTOR PEMISAH
Faktor perolehan kembali B
S B/A =
Faktor perolehan kembali A

S RA
B/A =
RB

Banyaknya A yang terisolasi


R A=
Banyaknya A total

W A yang terisolasi
R A=
(W A ) TOTAL
Ekstraksi Craig
 Menggunakan peralatan Craig yang
diatur fase cair ringan (bj kecil)
ditransfer dari satu tabung ke yang
berikutnya.
 untuk memisahkan dua zat atau lebih,
dengan perbedaan Kp < 0,1.
EKTRAKSI CAIR-CAIR BERKESINAMBUNGAN
 ALAT CRAIG
Contoh soal
 Senyawa A mempunyai Kp = 3,4 dipisahkan dengan alat Craig, Volume rafinat
sama dengan volume ekstraktan. Berapa % fraksi yang terekstraksi pada
tabung no 4, setalh 7 kali ekstraksi.
 Campuran mengandung senyawa X (Kp = 0,32) dan Y (Kp = 0,29) dipisahkan
dengan alat Craig. Volume rafinat sama dengan volume ekstraktan. Bera % X
dan Y dalam tabung no 1, 2, 3, 4, 5 setelah 8 kali transfer. Buat kurva f n,r vs
no tabung untuk kedua senyawa dalam gambar 1
TUGAS PRESENTASI
 KLT BIOAUTOGRAFI
 KROMATOGRAFI CENTRIFUGAL (KROMATOTRON)

DILENGKAPI CONTOH APLIKASI


(SUMBER JURNAL ILMIAH )

Anda mungkin juga menyukai