Pewarnaan Ziehl

Neelsen
 Pewarnaan Ziehl-Neelsen adalah salah satu jenis
pewarnaan bakteri tahan asam (BTA), yang pertama kali
diperkenalkan oleh Paul Ehrlich. Pewarnaan Ziehl-
Neelsen adalah pewarnaan bakteriologis yang
digunakan untuk mengidentifikasi organisme tahan
asam, terutama jenis Mycobacterium.

Pewarnaan ini dinamai dari dua dokter Jerman yang

menyempurnakan metode: ahli bakteriologi Franz Ziehl
(1859–1926) dan ahli patologi Friedrich Neelsen

2
 Komposisi Pewarnaa Ziehl Neelsen
Ziehl Neelsen A (Cat Primer)
◉ Berisi Carbol fuchsin 1%
◉ 5% phenol yang larut dalam
bahan lipid seperti yang
dimiliki oleh dinding
sel Mycobacterium sp.
 Penetrasi cat ini akan dipermudah
dengan adanya pemanasan yang
membantu carbol
fuchsin menembus dinding lipid
menuju sitoplasma
Ziehl Neelsen B (Decolorizing
Agent)
◉ Berisi asam alkohol (HCl 3%
dan Ethanol 95% ).
Sifat larutan ini mampu
mengeraskan dinding sel yang
tersusun dari lipid.
Dekolorisasi menggunakan
asam alkohol tidak dapat
melunturkan cat primer (ZN A),
karena ZN
Ziehl Neelsen C
(Counterstain)
◉ Berisi Methylene blue 0,1%. 
Hanya sel bakteri non-BTA
yang terwarnai oleh methylene
blue karena mengalami
dekolorisasi pada saat pencucian
dengan ZN B.
Sedangkan
bakteri Mycobacterium sp. yang
merupakan BTA telah meretensi
cat ZN A.
3
 Pedoman cara membuat reagen ZN
A. Carbol Fuchsin 0,3 % B. Asam alkohol 3 % C. Methylen blue 0,3 %
1.Larutan A ◉ Dipipet 3 ml HCl 37 %, ◉ Ditimbang 0,3 ga
Ditimbang 0,3 gr Fuchsin, dilarutkan dimasukkan kedalam Methylen blue,
dalam 10 ml alkohol 96 % gelas ukur dilarutkan dalam 100 ml
2. Larutan B ◉ Ditambahkan Alkohol 96 aquadest
◉ Ditimbang 4,5 gr Fenol Kristal, % t ad 100 ml ◉ Diaduk hingga homogen
dilarutkan dalam 90 ml aquades
◉ Dicampur sampai ◉ Dimasukkan dalam botol
◉ Campurkan larutan A kedalam
larutan B, diaduk hingga merata
homogen dan diberi etiket
◉ Dimasukkan kedalam botol dan ◉ Dimasukkan kedalam
diberi etiket botol dan diberi etiket

4
PRINSIP PENGECATAN

“
mycobacterium yang dinding selnya tahan asam karena mempunyai lapisan lemah atau lilin
sehingga sukar ditembus cat. Oleh pengaruh phenol dan pemanasan maka lapisan lemak dapat
ditembus cat basic fuchsin.
BTA mengambil warna dari basic fuchshin kemudian dicuci dengan air mengalir, lapisan lilin
yang terbuka pada waktu dipanasi akan merapat kembali karena terjadi pendinginan pada waktu
dicuci.
Sewaktu dituangi dengan asam sulfat dan alkohol 70% atau HCI alkohol, warna merah dari basic
fuchsin pada BTA tidak akan dilepas/luntur.
Bakteri yang tidak tahan asam akan melepaskan warna merah, sehingga menjadi pucat atau tidak
bewarna. Akhirnya pada waktu dicat dengan Methylien Blue BTA tidak mengambil warna biru

5
 Langkah – Langkah Pengecatan
◉ Sediaan dahak yang telah dibuat, diletakkan sediaan diatas rak dengan jarak 1 jari
◉ Sediaan ditetesi larutan Ziehl Neelsen (Carbol Fuchsin 1%) melalui corong yang dilapisi kertas saring,
dimulai dari ujung kaca sediaan hingga menutupi seluruh permukaan kaca sediaan.

6
 Langkah – Langkah Pengecatan
◉ Panaskan sediaan dengan sulut api sampai keluar uap (jangan sampai mendidih), kemudian dinginkan
selama 10 menit.
◉ Bilas sediaan secara perlahan dengan air mengalir, jangan menyiramkan atau menyemprotkan air tepat pada
apusan.
◉ Buang sisa air pada sediaan

7
 Langkah – Langkah Pengecatan
◉ Tuangkan Ziehl Neelsen B (Asam Alkohol 3 %) hingga warna merah bersih
◉ Bilas dengan air mengalir
◉ Tuangkan Ziehl Neelsen B (methylene blue 0.1%) hingga menutupi seluruh sediaan dan biarkan selama 1
menit.
◉ Bilas dengan air mengalir
◉ Keringkan sediaan pada rak pengering

8
 Penilaian kualitas pewarnaan Ziehl Neelsen
Pewarnaan yang Baik
Pada pewarnaan yang baik,
apabila diperiksa di bawah
mikroskopi akan tampak bakteri
tahan asam (BTA) berwarna
merah baik sendiri atau
bergerombol dengan warna
latar biru dan terlihat jelas
gambaran leukosit
Pewarnaan yang Kurang Baik
Pada pewarnaan yang buruk,
apabila diperiksa di bawah
mikroskop masih tampak adanya
sisa zat warna, endapan kristal
sehingga BTA tidak tampak
dengan jelas
9
10
Contoh Sediaan

11
 Daftar Pustaka

◉ Modul Pembelajaran Tuberkulosis Untuk Pendidikan ATLM, BPPSDM

Kemenkes RI, 2020
◉ Kemenkes RI.2017. Modul pelatihan laboratorium tuberkulosis bagi petugas
di fasyankes
◉ https://fk.uii.ac.id/mikrobiologi/materi/pengecatan-ziehl-neelsen-zn/

12
Thank You

13