biokimia

Asistensi Percobaan
“Enzim”
ENZIM??
50%
 Biokatalisator Enzim
 Senyawa protein yang dapat mengkatalisis seluruh
reaksi kimia dalam system biologis
 Faktor-factor yang mempengaruhi enzim:
- Temperatur Tinggi
- Temperatur pembekuan
- Pengaruh pH
- Pengaruh Kadar Air
-Pengaruh Kadar garam
 Contoh Enzim : Lipase, Amilase, Papain, Laktase,
Renin, dll
Ekstraksi Enzim
Amilase
BAHAN

1. Biji Kering
2. Biji direndam semalam (12 jam)
3. Biji dikecambahkan (12 jam)
4. Biji dikecambahkan (24 jam)
5. Biji dikecambahkan (48 jam)
6. Buffer Asetat (0,1 – 0,5 M) pH 5,5
7. Pati 4%
8. Iodin 1%
9. Glukosa anhidrat
Prosedur 5 gram kecambah biji (hancurkan)
Kerja
+ 50 ml buffer asetat (0,1-
0,5 M) pH 5,5

Diamkan selama 30
mnit (sesekali diaduk)

Saring (kertas
Ambil filtrat
whatmann)

Sentrifugasi 1500 rpm (30

menit)

Ambil supernatant
lalu Uji aktivitas
NEW
 1 ml substrat pati 4%

Iodin 1%

0,5 mL larutan enzim

Menguji Aktivitas
Amati perubahan warna enzim
Enzim Amilase

Inkubasi pada suhu kamar

dengan pengamatan setiap 10
menit selama 60 menit
 Waktu
(menit) 0 10 20 30 40 50 60
Sampel
Biji kering
Biji direndam
Kecambah
umur 12 jam
Kecambah
umur 24 jam

Kecambah
umur 48 jam
 10 gram dedak padi
EKSTRAKSI ENZIM
LIPASE
+ 50 ml dietil eter
(aduk-aduk untuk
melarutkan lemak)

Saring
Filtrat disisihkan dan ampasnya dilarutkan kembali
dgn 40 ml 50 mM buffer pospat pH 7 atau 40 ml 10
mM Tris HCl buffer pH 7,5

Campuran tersebut dimagnetik stirrer selama 30

menit
Saring (2 lapis)

Filtrat di sentrifugasi
Supernatan merupakan ekstrak enzim kasar yg terlarut
dalam buffer

Lakukan Uji Aktivitas Enzim

Lipase
 5 gram kacang
tanah(hancurkan)
+ 50 ml 0,1 N NaCl atau 0,1 M buffer Phospat pH
6,5
(biarkan selama 30 menit)
Saring dengan kertas saring biasa dan filtrat
merupakan ekstrak enzim lipase kasar

Substrat (susu sapi segar) dipanaskan 80’C selama

10 menit
8 ml substrat (susu sapi pasteurisasi)
Dimasukkan dalam labu Erlenmeyer 100 ml
Seimbangkan suhunyadalam penangas air 37’C

+ 5 tetes indicator pp dan titrasi + 2 ml ekstrak enzim lipase

dengan 0,1 N NaOH hingga
mencapai warna pink
kasar
Inkubasi pada suhu tersebut
selama 10 menit, setelah
inkubasi tambahkan 40 ml
alkohol
Titrasi Blanko

8 ml
susu

2 ml larutan pengekstrak enzim

(larutan NaCl atau buffer phospat) +
40 ml alcohol tanpa inkubasi

+ 5 tetes indicator pp dan titrasi dengan

0,1 N NaOH hingga mencapai warna
pink

 Aktivitas lipase =
THANK
YOU