ESTERIFIKAS

I & n-
SINTESIS SENYAWA n-4-
METOKSIBENZOYL
PHENYLUREA dan UJI AKTIVITAS
ANTIKANKER terhadap sel tikus
 ANGGOTA KELOMPOK
● Oviliya Rima Novitasai (037)
● Isabela Rossa Kusuma W (038)
● Alpi Mardyah Agustin (040)
● Nuvandaru Fajar Dzikra F (041)
● Muhammad Lutfi Irfan Syafii(042)
● Eis Sofina Adelia (043)
● Azizah Nur Aprilia Prayitno (044)
● Jesica Kharisma yanti (045)
● Dvis Ayu Nur Azizah (046)
● Ananda Pradnya Paramita (047)
● Alifia Rahma Rohadatul Aisyi (048)
 PEMBAHASAN
BAHAN METODE
1 YANG
DIGUNAKAN
2 SINTESIS 3 MEKANISME
REAKSI

CARA
4 MENENTUKAN
KEMURNIAN
5 IDENTIFIKASI
STRUKTUR
SENYAWA
 1 BAHAN - BAHAN
• Bahan untuk sintesis : • BAHAN UJI
AKTIVASI SEL
1. n- fenilurea KANKER
1. senyawa sintesis

2. Piridin 2. kultur sel tikus

3. Berbagai pelarut organik 3.Media Kultur DMEM

(aseton, etil asetat, n - 4. larutan DMSO

heksana, kloroform, etanol, 5. phosphate buffer saline (PBS)

dan metanol) 6. MTT (3- (4,5- dimetiltiazol-2-il)

7. 2,5-diphenyltetrazolium
bromida 10% dalam 0,1 N HCl.
Bahan untuk sintesis dan analisis fisikokimia :

- Dalam labu alas bulat 200 ml,

- 0,03 mol n-fenilurea dicampur dengan 40 ml tetrahydrofuran dan 4 ml
piridin.
- larutan turunan 4-metoksibenzoil klorida 0,01 mol ditambahkan ke dalam
20 ml tetrahydrofuran

Bahan uji aktivasi antikanker :

- Larutan induk dari 10 senyawa uji pada kadar 5000 g/mL dalam pelarut
DMSO.
- larutan baku kerja dengan konsentrasi 250, 500, 750, 1000, 2000 g/mL
dengan pengenceran.
- Kultur sel kanker dan sel normal dibuat dalam bentuk suspensi sel dengan
kerapatan 105-2,106.
- Kemudian sel dimasukkan ke dalam lempeng, sumur masing-masing adalah
100 μL,
- Reagen MTT disiapkan untuk pengobatan (0,5 mg/ml) dengan mengencerkan
1 mL stok MTT (50 mg MTT dalam 10 mL PBS) dengan media secukupnya.
100μL SDS 10% dalam HCl 0,1 N.
 METODE SINTESIS 2
Untuk optimasi aktivitas antikanker dilakukan modifikasi struktur senyawa
fenilurea berdasarkan perubahan sifat lipofilik, sterik dan senyawa elektronik.
Modifikasi sifat lipofilik dan elektronik dilakukan berdasarkan model Topliss,
yaitu dengan memasukkan substituen pada cincin benzena yang diprediksi akan
menghasilkan senyawa yang aktivitasnya lebih tinggi dari senyawa induknya.
Metil substituen (-CH3) akan meningkatkan sifat lipofilik non-polar, sedangkan
substituen elektronegatif seperti metoksi, kloro, dan trifluorometil akan
mengubah sifat elektronik senyawa. Modifikasi sifat sterik dihasilkan dari
perubahan ukuran gugus benzoil yang tersubstitusi. Senyawa dan nTurunan
-fenilurea dapat disintesis melalui reaksiantara nsenyawa -fenilurea dengan
benzoil klorida berdasarkan metode SchottenBaumann.
3 MEKANISME REAKSI
Sintesis dari n-4-metoksibenzoil-n'-fenilurea dilakukan dengan :
1. mereaksikan gugus amina primer dari N-fenilurea dengan gugus 4-metoksibenzoil klorida dari benzoil klorida.
2. Pada pembentukan n-4-metoksibenzoil-n'-fenilurea, reaksi juga dilakukan dengan mereaksikan N-senyawa
fenilurea dengan 4-metoksibenzoil klorida dengan menggunakan pelarut reaksi tetrahidrofuran, dan direfluks selama
8 jam.
3. Setelah reaksi selesai, kemudian ditambahkan larutan natrium karbonat jenuh untuk menetralkan HCl dan turunan
asam benzoat yang terbentuk.
4. Tahap selanjutnya adalah pencucian dengan air untuk menghilangkan sisa-sisa garam HCl yang ada, kemudian
dicuci dengan metanol untuk menghilangkan residu turunan benzoil klorida atau hasil hidrolisisnya yaitu turunan
asam benzoat.
5. Tahap selanjutnya adalah melakukan rekristalisasi dengan metanol panas karenan-4-metoksibenzoil-n'-fenilurea
secara turunan larut dalam metanol panas tetapi tidak larut dalam kondisi dingin.
6. Secara umum, hasil rekristalisasi darin-4-metoksibenzoil-nTurunan '-fenilurea berupa kristal jarum kecil berwarna
putih mengkilat atau potongan mengkilat.benzoat.
 CARA MENENTUKAN
KEMURNIAN SENYAWA
4
• Kemurnian senyawa hasil sintesis yang telah terbentuk kemudian
diuji dengan Kromatografi Lapis Tipis (KLT) dengan menggunakan
tiga fase gerak yaitu campuran.eksana : etil asetat : metanol (2 : 3 :
1), campuran heksana :aseton (4 : 2) dan heksana : etil asetat (4 : 2).
Hasil KLT menunjukkan bahwa pada berbagai fase gerak yang
digunakan di atas hanya terdapat satu noda. Artinya, senyawa hasil
sintesis dapat berupa senyawa tunggal.

• Tahap selanjutnya adalah menguji kemurniannya dengan

menentukan jarak leleh dari senyawa-senyawa hasil sintesis. Hasil
penentuan rentang leleh senyawa hasil sintesis menunjukkan bahwa
rentang leleh relatif kecil, yaitu sekitar dua derajat Celcius. Artinya
senyawa hasil sintesis bersifat murni.
5 IDENTIFIKASI
STRUKTUR
Dalam menentukan panjang gelombang N-4-metoksibenzoil-N'-fenilurea dengan
menggunakan spektrofotometer UV, dapat diketahui bahwa senyawa hasil sintesis
menunjukkan dua maksimum panjang gelombang, yaitu 252 nm. Senyawa hasil sintesis
diperkirakan memiliki gugus kromofor ikatan rangkap terkonjugasi atau sistem aromatik
dan gugus auksokrom. Dari spektrum UV juga terlihat adanya pergeseran panjang
gelombang maksimum.

Pereaksi N-fenilurea menunjukkan dua panjang gelombang, yaitu 204 nm dan 238 nm,
sedangkan senyawa hasil sintesis juga menunjukkan dua panjang gelombang maksimum,
yaitu 252 nm. Hal ini menunjukkan adanya penambahan gugus kromofor pada struktur
benzoil sehingga dapat dikatakan bahwa reaksi asilasi antara N-fenilurea dan 4-
metoksibenzoil klorida telah berjalan sesuai dengan yang diharapkan.

Pada spektrum IR N-4-metoksibenzoil-N'-fenilurea terlihat adanya pita

di area 3446 cm-1 yang menunjukkan gugus amina sekunder dari amina aromatik
senyawa. Hal ini juga didukung oleh spektrum 1H-NMR dengan dua pita tajam di area
12.00 dan 13.00 ppm, yang menunjukkan adanya 1 atom H singlet dari amina sekunder
kelompok (kelompok CONH). Dua gugus karbonil terlihat dalam spektrum IR pada bilangan
gelombang 1685 dan 1603 cm-1, sedangkan untuk golongan -C=C- dapat dilihat pada bilangan
gelombang 1538 dan 1515cm-1. Hal ini diperkuat dengan Spektrum 1H-NMR yang menunjukkan
multiplisitas 10 H atom dari dua inti aromatik dalam pergeseran kimia dari 6,90 menjadi 8,10 ppm.
Dari analisis spektrum di atas, dapat disimpulkan bahwa senyawa tersebut adalah n-
4-metoksibenzoil-N'-fenilurea dengan rumus struktur kimia sebagai berikut.

Dari data aktivitas antikanker terhadap garis sel Hella pada tabel dan IC50
membentuk n-4-metoksibenzoil-N'-fenilurea sebesar 6,50 mM, dapat dilihat bahwa
senyawa uji dapat menyebabkan kematian 50% sel kanker pada tingkat sekitar 1000
hingga 2000 g/mL. Ketika hidroksi urea sebagai standar memiliki IC50 170,57 mM.