Pemeriksaan Kuantitatif

HCG ELISA
PRINSIP
● CBI Hcg ELISA adalah metode sandwitch ELISA fase padat yang diadaptasi.
● Sampel konjugat anti hCG-biotin berlabel anti hCG-HRP ditambahkan ke sumur yang dilapisi dengan streptavidin.
● hCG dalam serum pasien berikatan dengan anti bodi anti hCG dan membentuk sandhwitch pada pelat berlapis
streptavidin.
● Protein yang tidak terikat dan konjugat HRP di cuci dengan buffer cuci,
● Setelah penambahan substrat, intensitas warna sebanding dengan konsentrasi hCG dalam sampel
● Kurva standar disiapkan yang menghubungkan intensitas warna dengan konsentrasi hCG dalam sampel.
 ALAT BAHAN
• Microwell yg dilapisi dgn streptavidin

• Reagen standart
• Strip test
• Sampel pengencer
• Kantung foil
• Enzim konjugat
• Segel
• Serum

• Kertas penyerap • Substrace tbm

• Stop solution
 KANDUNGAN REAGEN
Negative Control Positive Control Enzim Conjugate
inactivated normal Inaktifasi serum manusia yang Horseradish peroxidase (HRP)
positif Hcg didalam buffer yang dikonjugasi dengan Hcg
human serum solution dengan protein hewan

Chromogen B Stop Reagen

Chromogen A
Buffer solution dengan urea Buffered Solution dengan Asam Sulfat (H2SO4) yang
peroksidase (H2O2) Tetramethyl Benzydine sudah diencerkan
(TMB)

Microtiter strip
Wash Buffer Pre-Coated with murine
anti-human hcg
20-fold concentrated
Monoclonal Antibody
solution of buffered
surfactant
 JENIS SAMPEL
 Serum 01
 Plasma (EDTA, Heparin) 02

NOTE:
1. Sampel yang digunakan tidak boleh
LIPEMIK, LISIS, IKTERIK
2. Sampel yang tidak langsung diperiksa di
simpan di suhu 2-8 °C (bertahan 1 minggu)
 FUNGSI REAGEN
REAGEN FUNGSI

Negative Control Sebagai Kontrol yang tidak memberikan respon terhadap test

Positive Control Sebagai Kontrol Positif yang memberikan respon pada test

Antibodi sekunder yang berikatan pada kompleks antibodi-antigen dan berikatan dengan enzim
Enzim Conjugate
untuk bereaksi dengan substrat

Chromogen A Pereaksi untuk perubahan warna pada substrat

Sebagai substrat warna dan enzim peroksidase dihambat dengan menyesuaikan pH ke nilai pH 2/
Chromogen B
lebih rendah

Sebagai penghenti reaksi dengan cara menhambat secara efektif enzimatik HRP dan menstabilkan
Stop Solution
produk teroksidasi dari substrat kromogenik atau florogenik

Wash Dilution Membersihkan antibodi/antigen yang tidak berikatan

Fasa solid yang umumnya berupa sumuran 96 lubang dan telah dilapisi secara nonkovalen oleh
Microtiter Strip
antigen atau antibodi
 Cara Kerja
Untuk sumuran
blanko tidak perlu
Blanko
ditambahkan (kosong)
Negatif Control

Positif Control Masukkan masing-

Sampel 1 masing 25 µL
Sampel 2

Ketuk-ketuk pada
Inkubasi selama Tambahkan
pinggiran sumuran
60 menit, suhu untuk 100 µL
18-26°C menghomogenkan , Enzym
(masukkan pada tutup dengan seal konjugat
incubator)
 lanjutan

Lakukan pencucian
dengan wash buffer
sebanyak 300 µL Keringkan Tambahkan 100
yang sudah di dengan tissue µL chromogen A
encerkan 20X,
dilakukan sebanyak
3 kali

Inkubasi selama
15 menit, suhu Tambahkan 100
37°C (masukkan µL chromogen B
pada incubator)
dan ruang gelap
lanjutan

Tambahkan 50 µL stop
solution pada kontrol
positif (berubah
menjadi warna kuning)

Dibaca di ELISA
Reader dengan
Panjang gelombang
450nm
Dalam waktu 15
menit setelah
menambahakan stop
sulution
 Tindakan yang harus diperhatikan Prevention

● Lapisi sumuran dengan anti bodi anti B-hCG

(monoclonal)
● Pastikan semua bahan tidak mengandung pengawet
yang mengandung merkuri
● Pada pemeriksaan ini menggunakan sampel berupa
serum atau plasma (EDTA, heparin atau sitrat)
pastikan specimen tidak boleh hemolitik, ikterik, atau
lipemik.
 Interpretasi Hasil
Kalkulasi hasil (kuantitatif)
1 Hitung nilai absorbansi rata-rata untuk setiap control, dan sampel specimen
2 Mengguakan kertas grafik linear,
3 Menggunakan nilai absorbansi rata-rata untuk setiap sampel menentukan
konsentrasi yg sesuai dari kurva standar
4 Metode otomatis; hasil dalam petunjuk penggunaan telah dihitung secara otomatis
menggunakan kurva 4-parameter yg cocok
5 Konsentarasi sampel dapat dibaca langsung dari kurva standar ini, sampel
dengan konsentarsi lebih tinggi dari standar tertinggi harus lebih lanjut diencerkan
atau dilaporkan sebagai > 1000 mIU/mL. untuk perhitungan konsentrasi factor
pengenceran ini harus diperhitungkan
 KADAR HCG PADA IBU HAMIL
MASA
KEHAMILAN KONSENTRASI MASA KEHAMILAN KONSENTARASI
(MINGGU)

2-3 10-50 13 12500-95000

4 40-1000 14 10500-80000
5 400-20700 15 9000-70000
6 2200-7420 16 7000-64000
7 6000-13000 17 5500-56000
8 2900-19000 18 4500-50000
9 18500-205000 19 3300-40000
10 18000-200000 20 2500-32000
11 16500-180000 21 1800-25000
12 14500-125000
Contoh hasil pemeriksaan hCG
/elisa
 Contoh kurva standar

Standar Optical Units (450 nm)

1 0.05

2 0.14

3 0.43

5 0.94

6 1.54
 My Team

kelompok 2

HENDRIANI-
G1C221023
SANDRI MONAS
HERLINA

Jeanne
tw
Thanks!
Alternative Resources