Cover

TPHA

http://www.free-powerpoint-templates-design.com
Cover

Kelompok B3
Khoirunnisa (P3.73.34.1.19.025)
Sheilvia Putri Alyani (P3.73.34.1.19.041)
Cover

Latar Belakang

Sifilis adalah infeksi kronis yang berkembang melalui tahapan infeksi

yang berbeda: primer, sekunder, tersier, dan kuartener. Tahapan ini
menghasilkan gejala klinis yang beragam, biasanya menghasilkan luka
awal yang dikenal sebagai chancres kemudian ruam sifilis diikuti
dengan dorman yang lama. Infeksi yang tidak diobati pada akhirnya
dapat menyebabkan masalah kardiovaskular dan neurosifilis.
Infeksi ini disebabkan oleh spirochete Treponema pallidum, dan
biasanya didapat melalui kontak seksual, meskipun penyakit ini dapat
ditularkan melalui transfusi oleh darah yang terinfeksi. Infeksi intrauterin
juga dapat terjadi. Organisme tersebut hampir mustahil untuk
berkembang biak dalam media buatan, dan diagnosis infeksi biasanya
tergantung pada demostrasi antibodi dalam darah, yang muncul segera
setelah infeksi awal
Tes sifilis terdiri dari 4 kategori
Pemeriksaan Mikroskopis
Tes Antibodi Treponema
Tes Antibodi Non - Treponema
Tes Antigen Langsung
Karena periode dorman yang lama dan
sifatnya yang tidak spesifik dari tes
non-treponema, metode yang
mendeteksi antibodi anti-treponema
yang spesifik pada spesimen darah
telah menjadi semakin populer untuk
skrining. TPHA adalah salah satu tes
tersebut.
 Prinsip Tes

Lab21 TPHA kit menggunakan eritrosit unggas yang telah diawetkan dan dilapisi antigen pallidum T (Nichols strain), yang akan
mengikat antibodi spesifik yang ada dalam serum atau plasma pasien. Sel disuspensikan dalam medium berisi komponen untuk
menghilangkan reaksi yang tidak spesifik. Reaksi positif diperlihatkan melalui agglutinasi sel, reaksi negatif dengan
pengendapan sel menjadi lingkaran kecil.
Pola aglutinasi dapat diinterpretasikan oleh mata atau oleh pembaca pelat yang dapat membaca pola aglutinasi.
 Reagen
Nama Reagen 100 tes kit 200 tes kit 1000 tes kit
TPHA/010 TPHA/020 TPHA/100
R1 : Tes Sel Eritrosit ayam Cukup untuk 100 Cukup untuk 200 Cukup untuk 1000
yang diawetkan tes tes tes
dilapisi dengan
antigen dari T.
pallidum
R2 : Tes Kontrol Eritrosit ayam Cukup untuk 100 Cukup untuk 200 Cukup untuk 1000
diawetkan, tidak tes tes tes
dilapisi
R3 : Pengencer Larutan garam 20 ml 2 x 20 ml 200 ml
yang mengandung
penyerap
R4 : Kontrol positif Serum manusia 1 ml 1 ml 2 ml
Titer : 1280
R5 : Kontrol Serum manusia 1 ml 1 ml 2 ml
negatif Titer : <80
Petunjuk penggunaan
 Peringatan dan Perhatian

Hanya untuk diagnosa in-vitro

Semua reagen mengandung natrium azida (<0,1% b/v). Cairan limbah yang
keluar dari penggunaan kit harus disiram dengan air dalam jumlah besar
agar tidak menumpuk senyawa yang berpotensi meledak di pipa
laboratorium.
Bahan kontrol yang diberikan berasal dari serum manusia. Mereka telah
diuji di tingkat donor dan ditemukan negatif untuk Hepatitis B dan C, dan
untuk HIV 1 dan 2.

Namun, mereka harus diperlakukan seolah-olah mereka bisa menularkan penyakit.

Spesimen serum manusia dan plasma harus diperlakukan sebagai bahan yang berbahaya, dan
ditangani sesuai dengan peraturan yang berlaku.
Jangan digunakan setelah tanggal kadaluwarsa.
Jangan menggabungkan atau mengganti reagen dari kit dengan nomor lot yang berbeda.
Penyimpanan
 Simpan pada suhu 2-8 derajat celcius ketika
tidak digunakan. Simpan botol dalam posisi
tegak. Jangan dibekukan.
 Umur simpan berlaku sampai tanggal yang
tertera pada label kit

Peralatan yang diperlukan

• Pipet yang dikalibrasi dan dipelihara dengan benar
yang mampu menghasilkan volume 10, 25, 75,
dan 190 ul
• 96 - pelat mikro sumur (format sumur U)
Spesimen

• Spesimen serum atau plasma harus bebas

dari sel darah dan kontaminasi mikroba.
• Spesimen dapat disimpan pada 2-8 derajat
celcius hingga 7 hari sebelum pengujian.
• Spesimen yang membutuhkan penyimpanan
lebih lama harus dibekukan pada suhu -20
derajat celcius atau lebih rendah.
• Spesimen beku harus dicairkan dan dicampur
dengan baik sebelum pengujian.
Pengujian

Tempatkan semua reagen dan spesimen pada suhu ruang sebelum digunakan

Catatan: kit kontrol positif dan negatif harus dijalankan pada setiap pengujian
Uji Kualitatif

1. Pengencer spesimen
• Tambahkan 190 ul pengencer ke lubang pertama
• Tambahkan 10 ul spesimen ke lubang yang sama
• Campurkan hingga rata

Catatan : kontrol positif dan negatif disediakan siap digunakan dan tidak memerlukan
pengenceran
2. Tes

• Tambahkan 25ul spesimen encer dari langkah 1 untuk menguji dengan baik
• Tambahkan 25ul spesimen encer dari langkah 1 ke sumur kontrol.
• Suspensikan kembali suspensi Sel Uji dan Kontrol dengan mengocok vial.
• Tambahkan 75ul Sel Uji ke sumur uji, dan 75ul Sel Kontrol ke sumur
kontrol, (Pengenceran spesimen akhir setelah penambahan sel adalah 1
dalam 80) Aduk rata.
• Inkubasi pada suhu 15-30 °C pada permukaan bebas getaran selama
minimal 45 menit. (60 menit mungkin diperlukan untuk hasil optimal dengan
beberapa pembaca piring)
• Baca pola pengendapan. Pola aglutinasi stabil setidaknya selama tiga jam
jika tidak terganggu.
Uji Kuantitatif
Dibutuhkan 8 sumur untuk setiap spesimen.
Catatan: Kontrol positif dan negatif kit harus dijalankan dengan setiap lot tes.

1. Pengenceran Spesimen
• Tambahkan 190ul pengencer ke dalam sumur.
• Tambahkan 10ul spesimen ke sumur yang sama
• Pastikan pencampuran rata

Catatan: Kontrol positif dan negatif disediakan untuk digunakan kembali dan tidak memerlukan
pengenceran.
 
2. Titrasi
 
• Biarkan sumur pertama kosong, tambahkan 25ul pengencer ke masing-masing dari 7
sumur yang tersisa dalam deretan 8 sumur.
• Tambahkan 25ul dari langkah 1 ke sumur pertama
• Tambahkan 25ul dari langkah 1 ke sumur ke-2 dan campur, lalu encerkan secara
berurutan di sepanjang urutan sumur, buang kelebihan 25 ul dari sumur terakhir

3. Tes

• Campur Sel Uji dengan perlahan untuk memastikan resuspensi menyeluruh.

• Tambahkan 75 ul Sel Uji ke setiap sumur. (Rentang pengenceran spesimen akhir setelah
penambahan sel adalah 1 dalam 80-1 dalam 10.240)
• Aduk rata
• Inkubasi pada 15-30 °C pada permukaan bebas getaran selama minimal 45 menit, (60 menit
mungkin diperlukan untuk hasil optimal dengan beberapa pembaca piring).
• Baca pengendapan. Pola aglutinasi stabil setidaknya selama tiga jam jika tidak terganggu.
• Titer spesimen adalah kebalikan dari pengenceran tertinggi yang memberikan aglutinasi.
INTERPRETASI DAN
UJI VALIDASI
HASIL SEL UJI SEL KONTROL

Positif Kuat Pola sel penuh yang menutupi Tidak ada aglutinasi yang padat
dasar sumur
Positif Lemah Pola sel mencakup kira-kira Tidak ada aglutinasi yang padat
1/3 dari dasar sumur
Tidak Pasti Pola sel menunjukkan pusat Tidak ada aglutinasi yang padat
yang terbuka
Negatif Sel menetap dibagian bawah Tidak ada aglutinasi yang padat
yang padat, biasanya dengan
pusat kecil yang jelas
Nonspesifik Reaksi positif Reaksi positif
Kontrol Kualitas Internal

Agar hasilnya valid, kontrol negatif harus memberikan hasil negatif

(lihat gambar) dan kontrol positif harus memberikan titer 640-2560
(Lihat ilustrasi untuk panduan titik akhir titrasi).

Spesimen yang memberikan aglutinasi kurang dari yang

ditunjukkan sebagai '+/-' di atas harus Negatif.
Spesimen yang memberikan aglutinasi lebih besar daripada yang
ditunjukkan sebagai '+/- di atas harus dicatat sebagai positif
sementara, dan prosedur pengujian diulang seperti di atas, tetapi
dalam duplikat, menambahkan Sel Kontrol yang disediakan ke
satu set sumur, dan Sel Uji ke sumur lainnya.
Jika aglutinasi dengan sel uji lebih besar daripada dengan sel kontrol,
spesimen positif antibodi anti-treponema, dan harus menjalani tes lebih
lanjut untuk konfirmasi.
Jika aglutinasi dengan sel kontrol lebih besar atau sama dengan
dengan sel uji, prosedur di bawah ini untuk penyerapan reaksi non-
spesifik harus diterapkan.
 
Penyerapan reaksi non-spesifik
(Prosedur yang akan digunakan jika aglutinasi terlihat pada sel uji dan sel kontrol)

• Tambahkan 10 µl spesimen ke 190 µl sel kontrol yang disuspensikan kembali, aduk

rata dan inkubasi selama 30 menit.
• Centrifuge untuk menyimpan sel minimal 1500g selama 3 menit.
• Tambahkan 25 µl supernatan dari langkah 2 ke masing-masing 2 sumur.
• Campurkan sel uji dan kontrol dengan lembut untuk memastikan melalui resuspensi.
Tambahkan 75 µl sel uji ke sumur pertama.
Tambahkan 75 µl sel kontrol ke sumur ke-2.
• Pastikan melalui pencampuran dan inkubasi di RT selama minimal 45 menit.
• Baca dan tafsirkan pola pengendapan seperti di atas.
Cover

Thank You
Insert the Sub Title
of Your Presentation