Metabolismo y Fisiología

Biología Celular
 Nutrientes
1- Fuente de energía luz
química
2- Macronutrientes
H K
O Mg
C Na
N 95% Ca
S Fe
P
3- Micronutrientes (elementos traza)
Co, Zn, Mo, Cu, Mn, Ni, Se, W
4- Factores de crecimiento
•Vitaminas
•Purinas y pirimidinas
•Aminoácidos
 Macronutrientes
Fuente de - CO2
carbono - Compuestos Carbohidratos, azúcares,
orgánicos proteínas, aminoácidos,
lípidos, ácidos grasos,
glicerol
Fuente de - Inorgánica NH4, NO3-, N2
nitrógeno - Orgánica Proteínas, peptonas, aa,
bases púricas y
pirimídicas, urea
Fuente de - Inorgánica Fosfatos
fósforo - Orgánica Esteres del ácido
fosfórico
Fuente de - Inorgánica Sulfuros y sulfatos
azufre - Orgánica Aminoácidos sulfurados,
vitaminas
Tipos nutricionales Fuente de Fuente de Ejemplos
energía C
Cianobacterias,
Fotoautótrofos Luz CO2 bacterias
púrpuras y
verdes
Compuestos Algunas
Fotoheterótrofos Luz orgánicos bacterias
púrpuras y
verdes
Compuestos Algunas
Quimioautótrofos o inorgánicos CO2 Eubacterias y
litótrofos ej.: H2, NH3, muchas Archaea
NO2-, H2S
La mayoría
Quimioheterótrofos Compuestos Compuestos Eubacterias,
o heterótrofos orgánicos orgánicos algunas Archaea
 Condiciones para el crecimiento microbiano

agua
Medios de cultivo
fuente de energía
Nutrientes fuentes de C, N, otros
Crecimiento elementos
micronutrientes,
factores de crecimiento
temperatura
pH
Condiciones
luz
de cultivo
aireación
actividad de agua
potencial redox
 Factores de crecimiento

Microorganismos auto o heterotrófos pueden requerir

pequeñas cantidades de ciertos compuestos orgánicos que
no pueden sintetizar y deben incorporarse en los medios

* bases púricas y pirimídicas ADN, ARN

* aminoácidos esenciales síntesis proteica
* vitaminas coenzimas
 Aislamiento

Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una población

mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los
microorganismos en cultivo puro

Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra

cuando el o los microorganismos están en una proporción adecuada., se
realiza por estrías (agotamiento) con o sin dilución previa de la muestra
(suelo, alimentos), en medio sólido

Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se

desea aislar e identificar se encuentra en baja proporción en la muestra,
se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en
medio líquido. Luego de varios pasajes se aisla por el método de
estrías.
Clasificación de los medios de cultivo

Según su naturaleza física

* líquidos
* sólidos - solidificante: agar-agar, silico-gel
* semi-sólidos

Según su composición
* definidos o sintéticos: composición química conocida
* no definidos o complejos: composición química no
definida, enriquecidos con peptonas, extracto de
carne, de levadura, de suelo, sangre
 Según su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, además de los

nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya
composición permite el desarrollo de un grupo determinado
Ej.agar-antibióticos; agua, sales, luz, para algas, medios con
NaCl superior a la concentración fisiológica

* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar

los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en él.
Ej. azúcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro
 Según su uso en el laboratorio

* selectivos o inhibitorios: medios que contienen, además de los

nutrientes, ciertas sustancias que inhiben el desarrollo de algunos
microorganismos permitiendo el crecimiento de otros o cuya
composición permite el desarrollo de un grupo determinado
Ej.agar-antibióticos; agua, sales, luz, para algas, medios con
NaCl superior a la concentración fisiológica

* diferenciales: medios que contienen indicadores para diferenciar

los distintos tipos de microorganismos que puedan crecer en él.
Ej. azúcar fermentecible: lactosa, indicador:rojo neutro
Cultivo en medio líquido
• Habitualmente se realiza en tubos o en matraces. El crecimiento
se puede manifestar por enturbiamiento, por formación de velo o
película, o por sedimento.
Cultivo en medio sólido
• Puede ser en tubos o placas
a) Tubos con agar inclinado. Para sembrarlos, se mueve el ansa o
la punta suavemente sobre la superficie del agar con un
movimiento en zigzag desde el fondo hasta la parte superior,
cuidando de no dañar el agar.
b) Tubos sin inclinar. Se siembran introduciendo una punta en el
centro del agar. También se llama siembra por picadura.
c) Siembra en placas. Puede ser en superficie (por estrías o
bañado) o incorporada (mezclando el inóculo con el agar
semifundido)
 Aislamiento

Aislar: Es separar un tipo de microorganismo a partir de una población

mixta. En habitats naturales, raramente encontramos a los
microorganismos en cultivo puro

Aislamiento directo:se logra directamente a partir de una muestra

cuando el o los microorganismos están en una proporción adecuada., se
realiza por estrías (agotamiento) con o sin dilución previa de la muestra
(suelo, alimentos), en medio sólido

Aislamiento por enriquecimiento:Cuando el microorganismo que se

desea aislar e identificar se encuentra en baja proporción en la muestra,
se incluye una primera etapa que consiste en sembrar la muestra en
medio líquido. Luego de varios pasajes se aisla por el método de
estrías.
 Cultivo puro
• Las colonias se describen por examen macroscópico en
función del tamaño, la forma, el borde, la elevación, la
transparencia y el color. Esto resulta a veces muy útil en la
identificación

• A partir de colonias aisladas en medio de cultivo se realiza un

examen microscópico que debe mostrar células
razonablemente semejantes respecto al Gram y a la
morfología.

• Las colonias aisladas deben aislarse nuevamente en medio no

selectivo por el método de estrías. Esto se conoce como
reaislamiento.
División celular: fisión binaria

Gemación,
ej.
levaduras
Crecimiento de un microorganismo en medio
de cultivo líquido

1- Fase de latencia
2- Fase exponencial
3- Fase estacionaria
4- Fase de muerte
Crecimiento en un volumen fijo de medio o
cultivo cerrado (batch)
Luego de la adición de bacterias al medio líquido fresco se observa la
siguiente cinética de crecimiento
• Fase lag - las células se adaptan al nuevo ambiente, aun no se dividen
• Fase exponencial (log) - velocidad máxima de crecimiento bajo
condiciones particulares, tiempo de generación mínimo
• Fase estacionaria - sin crecimiento neto, vc=0 ó estadísticamente = 0
cuando: vc=vm (vel. crecimiento es igual a la de muerte)
– nutrientes limitantes, pero suficientes para mantener actividad
– acumulación de desechos, inhibición del crecimiento
• Fase de muerte - velocidad de muerte celular > velocidad de
división celular
 Factores del ambiente

• físicos: temperatura, gases, pH, presión osmótica

•químicos: nutrientes, sustancias antimicrobianas
•biológicos: otros microorganismos, micro y
mesofauna, vegetación, afectan las
actividades microbianas

Los distintos factores actúan simultáneamente y resulta

difícil el análisis integrado de los efectos.
• Sicrófilos - rango: < 0-20°C, óptimo < 15oC
– organismos marinos, algas: Chlamydomonas nivalis (nieve rosada),
bacterias: Pseudomonas, Flavobacterium
– membrana contiene alto % de ácidos grasos insaturados
• Sicrótrofos o Sicrófilos facultativos
- rango: 0-35°C, óptimo 20-30oC
– Pseudomonas - crecen en el refrigerador
• Mesófilos - rango: 15-45° C, óptimo: 30-40°C
– la mayoría de los microorganismos (del suelo, aguas, patógenos)
• Termófilos - rango: 40-70°C, óptimo de 55-65oC
– membrana contiene alto % de ácidos grasos saturados
– enzimas estables al calor
– Bacillus stearothermophilus, organismos de compostaje
• Hipertermófilos - rango: 80-113°C, óptimo > 90oC
– Pyrococcus, Pyrodictium (aguas termales)
 Oxígeno
Clasificación de los microorganismos según
el efecto del oxígeno:
⇒Aerobios
→obligados: requieren oxígeno (21% o más)
Ej. Bacillus, hongos, etc.
→microaerofílicos: lo requieren pero a niveles menores que el
atmosférico (5-10%)
Ej. Azospirillum
⇒Anaerobios
→facultativos: no requieren oxígeno, pero el desarrollo es mejor con
oxígeno.
Ej. Levaduras, E. coli
→aerotolerantes: no son sensibles al oxígeno (crecen en ausencia o
presencia de oxígeno).
Ej. Enterococcus faecalis, Sreptococcus spp.
.
→obligados: no toleran el oxígeno, muere en su presencia
Ej. Methanobacterium, Clostridium
 Cultivos en anaerobiosis
•tubos con medio de cultivo llenos por completo.
•medios con sustancias que reaccionan con el oxígeno y lo excluyen.
•dispositivo especial (cámara anaeróbica)
•cajas o tubos incubados en recipientes con granos germinados (cebada,
centeno)
 Otros gases
N2 componente principal de de la atmósfera (78%). Gas inerte: no es usado
por la mayoría de los organismos, los que pueden reducir el triple enlace del
N2 con la enzima nitrogenasa se denominan diazotrofos o fijadores de N2 y
pueden desarrollarse en ambientes sin N-combinado

CO tóxico para la mayoría de los organismos (cadena respiratoria)

puede ser oxidado a CO2 por algunos microorganismos

CH4 liberado a la atmósfera por microorganismos metanogénicos, gas con

efecto invernadero, puede ser oxidado a CO2 por bacterias metanotróficas

CO2 importante gas, fuente de carbono para los autotrofos, aerobios y

anaerobios, fotosintéticos o quimiosintéticos. Muchos hongos lo requieren a
niveles superiores a los atmósfericos, para ciertas síntesis

H2 poco usado, tóxico para la mayoría de los microorganismos, brinda

energía a bacterias Hydrogenomonas: H2+O2 = H20 + ATP
 pH
El pH es la acidez o alcalinidad de una
solución, medida por el log 1/(H+)
Clasificación de los microorganismos según
su pH óptimo
⇒Neutrófilo: pH óptimo 7 - Ej.: bacterias
patógenas humanas.
⇒Acidófilo: pH óptimo < 7 - Ej.: muchas de
las archeobacterias y hongos.
⇒Basófilo: pH óptimo > 7 - Suelos y aguas
ricas en carbonatos
Medios de cultivo
MEDIO SELECTIVO Y
DIFERENCIAL
Colonia Lactosa negativa

Colonia Lactosa positiva

Agar sangre
S. epidermidis en agar sangre
 Agar sangre

HEMOLISIS EN AGAR SANGRE

HEMÓLISIS COMPLETA HEMÓLISIS PARCIAL

Pseudomonas aeruginosa

Siembra en medio OF

Metabolismo oxidativo
Prueba de la catalasa

+ -