ULBRA Gravata Biologia

Replicao do DNA
Profa. Ana Paula Magalhes Leboute

DNA

Antiparalelismo

As fitas do DNA esto dispostas em direes opostas

Cada base de uma fita pareada com a base complementar da outra fita

Complementariedade

 A replicao do DNA semiconservativa, ou seja, uma das fitas da clula filhas a original, clula me, a outra recm sintetizada.

Fita velha

Durante a replicao do DNA as duas fitas velhas ou mes servem de molde para cada fita nova ou filha complementar, que est sendo sintetizada.

Fita nova

REPLICAO SEMICONSERVATIVA
Evidncia baseada em um experimento clssico de MeselsonStahl em 1958 Clulas de E. coli foram inicialmente colocadas em um meio para crescimento contendo sais de amnia preparados com 15 N (nitrognio pesado heavy) at todo o DNA celular conter o istopo. As clulas foram, ento, transferidas para um meio contendo 14N (nitrognio leve light). As amostras foram analisadas com gradiente de densidade que separa as duplas H-H, L-L e H-L em bandas distintas.

PNAS 44:671, 1958

Propriedades Qumicas e Fsicas do DNA

ORIGEM DA REPLICAO

Experimento com SV40 (Simian Virus) DNA viral de clulas infectadas com SV40 foi cortado com a enzima de restrio EcoRI, que reconhece um stio nico. A partir de um ponto vai se formando uma bolha chamada bolha de replicao comprovando a existncia de um ponto de origem da replicao Caractersticas da origem de replicao: . estrutura repetitiva . seqncias ricas em AT

ORIGEM DA REPLICAO
ORIGEM Stio de restrio EcoRI

Cromossomo viral circular

EcoRI
Bolha de replicao

A replicao e E. coli tem uma origem apenas

Autoradiografias feitas por J. Cairns (1963) em DNA de E. coli tratadas com meio contendo Trimidina comprovaram que a replicao semi-conservativa, bidirecional e que o DNA e circular

Origem de replicao de E. coli

Sntese de DNA em Eucariontes:

As Bolhas de Replicao

Nos eucariontes, a replicao requer mltiplas origens, devido ao tamanho de seu genoma. A replicao bidirecional e, em ambas as fitas, simultnea. Este processo gera bolhas de replicao.

Eucariotos tem mltiplas origens de replicao bidirecional

REPLICAO BIDIRECIONAL
Um experimento atravs da autoradiografia de molculas de DNA marcadas de culturas de clulas mamrias revelou grupos de replicons (unidades de replicao) com um ponto de origem de replicao central

OR

OR

Nos eucariotos so abertos vrias "bolhas de replicao" ou replicons

ORIGEM DA REPLICAO

PROCESSO DE REPLICAO

Os mecanismos celulares responsveis pela replicao do DNA foram descobertos primeiramente em bactrias.

A replicao em eucariotos ocorre atravs de protenas anlogas e com processos semelhantes replicao do DNA de E. coli

PRINCIPAIS ENZIMAS ENVOLVIDAS (SISTEMA DE REPLICAO DO DNA)

1. 2. 3. 4. 5. 6.

DNA Polimerases Endonucleases Helicases Topoisomerases Primases Telomerases

DNA POLIMERASE
So incapazes de quebrar as pontes de hidrognio que ligam as duas fitas do DNA S alongam uma fita de DNA/RNA pr-existente Catalisam a adio de um nucleotdeo no radical hidroxil da extremidade 3 da cadeia que est se formando. Desta forma, as fitas s podem crescer no sentido 5 3

DNA Polimerases
principais enzimas envolvidas no processo; responsveis pela adio de nucleotdeos e reparo requerem um modelo e um primer (segmento de RNA sintetizado pela primase) complementares para incio alongamento 3 tipos principais : I, II, III I : importante no sistema de reparo DNA Polimerases III: principal e mais complexa (mais de 10 subunidades)

NUCLEASES
- Degradam o DNA, clivando-o em pedaos menores 1. EXONUCLEASES: clivam o DNA a partir do final da molcula 2. ENDONUCLEASES: clivam em qualquer local da molcula

Adio de nucleotdeos
1

 Todas as DNA polimerases conhecidas so capazes de estender fitas de DNA apenas na direo 5' 3' Como, ento, se d a sntese na direo 3' 5' da forquilha de replicao?

Fragmentos de Okasaki

O que ocorre uma replicao descontnua numa direo e contnua na outra; os fragmentos (de Okasaki) so unidos mais tarde por uma ligase

A sntese de DNA feita na direo 5 3 e semidescontnua

PROCESSO DE REPLICAO

PROCESSO DE REPLICAO

OUTRAS ENZIMAS ENVOLVIDAS NO PROCESSO DE REPLICAO

HELICASES constituem uma classe de enzimas que podem se mover ao longo da fita dupla de DNA utilizando a energia da hidrlise de ATP para separar as duas fitas da molcula. SSB (single-strand-binding) ligam-se a cada uma das fitas impedindo o reanelamento das mesmas. PRIMASE RNA polimerase que sintetiza pequenas molculas de RNA utilizadas como iniciadores durante o processo de replicao do DNA. TOPOISOMERASES Responsveis por aliviar a toro na parte da fita que no est sendo replicada.

TELOMERASE
Os cromossomos de eucariotos so lineares e apresentam seqncias repetitivas em suas extremidades denominadas telmeros A sntese da fita leading continua at o trmino da fita molde de DNA, no entanto, no telmero a extremidade feita pela primase na fita lagging no digerida. Como o iniciador instvel, ele se degrada com o tempo diminuindo, assim, o tamanho do cromossomo. Telomerase age evitando a perda do fim do cromossomo.

TELOMERASE

O funcionamento da telomerase

volta

ESTGIOS DA REPLICAO 1. INICIAO 2. ALONGAMENTO 3. TERMINAO

1. INICIAO
ORIGEM DA REPLICAO OriC : - 245 pb ; - 3 repeties de 13 pb; - 4 repeties de 9 pb; (A=T)

2. ALONGAMENTO
Envolve duas operaes distintas, mas relacionadas: 1. 2. Sntese da fita lder Sntese da fita tardia helicases topoisomerase DNA binding proteins

Incio comum na forquilha de replicao envolvendo:

SNTESE DA FITA LDER

1. 2.

Sntese de um RNA primer pela primase na origem de replicao Desoxirribunocleotdeos so adicionados pela DNA polimerase III continuamente a partir da forquilha de replicao

3. TERMINAO

-Procariotos: DNA circular, quando as duas forquilhas de replicao se encontram ela termina. -Eucariotos: seqncias de nucleotdeos especficas no final dos cromossomos, incorporadas a telmeros.