UNIVER SIDADE ESTADUAL PAULISTA (U NESP), SÃO JOSÉ HTTP:// DX.DO I.ORG/ 10.101 6/J.B JHH.2 015 .

6/J.B JHH.2 015 .02 .00 7

DO RIO PR ETO, SP, B R AZIL

Journal Reading

Hemoglobin D-Punjab: Asal,

Distribusi dan Diagnosis
Laboratorium
Lidiane de Souza Torres ∗, Jéssika Viviani Okumura,
Danilo Grünig Humberto da Silva, Claudia Regina Bonini-
Domingos

Oleh: dr. Sarah Amalia

Pembimbing :
01
dr. Dian Puspita Sari, Sp.A(K), M.Kes .
 AB STR AK

Hemoglobin D-punjab
• juga dikenal sebagai hemoglobin D-Los Angeles, satu dari varian
hemoglobin yang paling umum di seluruh dunia
• Hemoglobin D-Punjab berasal dari mutasi inti gen beta-globin
(HBB: c.364G>C; rs33946267)
• lazim pada wilayah Punjab, India barat laut
• dapat diwariskan secara heterozigosis
• Tidak menyebabkan perubahan klinis atau hematologis
• dikaitkan dengan hemoglobin S
• dapat serupa dengan homozigosis untuk hemoglobin S

It's crucial to know and

understand the difference.
02
 P EN DA H UL U AN

7% Hb S
varian hemoglobin yang paling sering
Mutasi pada gen yang mengkode rantai di dunia, parah pada homozigot /
hemoglobin terjadi pada populasi dunia berhubungan dengan hemoglobinopati
lain : thalassemia beta, Hb C atau Hb D

penelitian ini bertujuan untuk mengumpulkan informasi yang tersedia dalam literatur
03 tentang hemoglobin tipe D, lebih khusus tentang Hb D-Punjab
 S EJA RA H

Did you know?

Tahun 1951
Hb D -> Hemoglobin keempat yang
teridentifikasi , pertama kali dideskripsikan
oleh Itano

memiliki mobilitas elektroforesis yang mirip dengan Hb S pada

pH basa, namun pada pH asam, migrasinya menyerupai Hb A. Hb
D menunjukkan kelarutan normal ketika dalam keadaan tereduksi,
tidak mengalami sabit

04
 HEMOG LOBIN D-PUNJAB

Mutasi β121 Glu→Gln (GAA→CAA)

diturunkan dari mutasi inti pada gen beta-globin (HBB) pada basa pertama kodon 121 (GAA→CAA) dengan substitusi glutamin untuk asam
glutamat (Glu>Gln) di rantai beta globin

Gambar 1 – Pembatasan situs polimorfik dalam cluster beta-globin untuk skrining haplotipe yang terkait dengan Hb D-Punjab
05
 HEMOG LOBIN D-PUNJAB

Asal dan distribusi geografis

Hb D-Punjab lazim di wilayah Punjab, India Barat Laut, dengan perkiraan frekuensi 2,0%. Di India barat, lebih khusus di wilayah Gujarat,
frekuensinya turun setengahnya
Haplotipe tertentu yang terkait dengan Hb D Punjab, menunjukkan asal multisentrik untuk mutasi ini

06
 P EWARISAN HB D-PUNJAB DAN
KARAKTERI STIK KLI NI S
TERKAIT

Hb D-Punjab dapat diturunkan heterozigosis pada Hb A normal,

mencirikan sifat heterozigot, tidak menunjukkan perubahan klinis
atau hematologis.

interaksi antara Hb D-Punjab dan thalasemia beta menyebabkan

anemia mikrositik dan hipokromik ringan, tetapi tidak
menunjukkan perubahan klinis atau hematologi yang relevan

Hb D-Punjab dikaitkan dengan Hb S, Hb S/D-heterozigot ganda,

hasilnya adalah manifestasi klinis sedang hingga berat; hubungan
ini secara klinis mirip dengan Hb SS homozigot. Nyeri, karena
peristiwa vaso-oklusif, adalah salah satu komplikasi yang paling
umum. Selanjutnya, stroke dan sindrom koroner akut dapat terjadi
pada pembawa genotipe ini

07
 PEWAR ISAN HB D-PUNJ AB DAN
KARAKT ERISTIK KLINIS TER KAIT

Patel dkk. menerbitkan sebuah penelitian pada pasien Hb S/D-

Punjab dengan gejala klinis sedang hingga berat yang mirip
dengan genotipe Hb SS yang memiliki episode vaso-oklusi atau
membutuhkan transfusi darah

kerentanan yang lebih besar untuk lisis sel darah merah pada
pasien Hb S/D-Punjab dibandingkan dengan genotipe Hb SS

Gambar 2 – Mobilitas elektroforesis Hb D-Punjab dibandingkan dengan hemoglobin lain yang diketahui, seperti Hb A, S dan C.
Gambar sesuai dengan elektroforesis hemoglobin dalam selulosa asetat (A), elektroforesis hemoglobin dalam gel agarosa (B),
elektroforesis rantai polipeptida pada selulosa asetat (C) dan elektroforesis rantai polipeptida pada gel poliakrilamida (D).
Genotipe setiap sampel ada di bagian atas gambar. Arah dan posisi saat ini dari hemoglobin yang berbeda adalah di samping
setiap metode

Pemberian hidroksiurea (HU)(10mg/kg/hari) adalah strategi

terapi potensial untuk anemia sel sabit (Hb SS),
Tingkat keparahan klinis pada individu Hb S/D-Punjab dapat meningkatkan kadar Hb F dan akibatnya mengurangi
dikaitkan dengan fakta bahwa Hb D mendukung polimerisasi Hb
S
keparahan nyeri, sindrom koroner akut, transfusi, dan rawat
08
inap.
 HEMOG LOBIN D-PUNJAB

Diagnosa laboratorium
Identifying characteristics

Elektroforesis pemfokusan isoelektrik (IEF)

Hemoglobin dapat dipisahkan dengan elektroforesis
memisahkan hemoglobin menurut titik isoelektriknya
pada selulosa asetat pada pH 8,635 dan pada gel
(pI) dengan pemfokusan isoelektrik (IEF).39 Dalam
agarosa pada pH 6,2.36 Pada selulosa asetat, migrasi
kasus Hb D-Punjab, pI-nya mendekati pH 7,1, suatu
Hb D lebih lambat dari Hb A dengan posisi yang mirip
posisi yang mirip dengan varian hemoglobin lainnya
dengan Hb S, tetapi pada pH asam posisi migrasinya
seperti Hb Korle-Bu (Gambar 3). Meskipun memiliki
sama dengan Hb A. Namun pola elektroforesis ini
resolusi yang besar, teknik ini membutuhkan kit
tidak spesifik untuk varian Hb Golongan D, karena
khusus dan lebih mahal daripada elektroforesis
ada varian hemoglobin lain dengan perilaku serupa,
konvensional.
seperti Hb G dan Hb Korle-bu

09
 Diagnosa laboratorium HEMOG LOBIN D-PUNJAB

Gambar 3 – Representasi skema mobilitas relatif dari

hemoglobin yang berbeda menggunakan metode
pemfokusan isoelektrik. Hb D-Punjab ditunjukkan pada
gambar dengan titik isoelektrik (pI) antara 7,1 dan 7,2

10
 Diagnosa laboratorium HEMOG LOBIN D-PUNJAB

11
 Diagnosa laboratorium HEMOG LOBIN D-PUNJAB

12
 Diagnosa laboratorium HEMOG LOBIN D-PUNJAB

Gambar 4 – Profil kromatografi sifat heterozigot untuk Hb D-Punjab (B dan C) dan Hb heterozigot ganda S/D-Los Angeles A dan D). (A
dan B) Kromatogram sistem VARIAN I dengan kit analisis beta-thalassemia heterozigot. Panah menunjukkan tombak yang sesuai dengan
Hb D-Los Angeles dengan waktu retensi rata-rata 4,1–4,3 menit. Hal ini dimungkinkan untuk mencatat penurunan nilai Hb A2,
karakteristik sampel dengan varian hemoglobin ini. (C dan D) Sistem kromatogram resolusi ultra2 dengan kit analisis Genesys. Panah
menunjukkan lonjakan Hb D-Punjab, dengan waktu retensi antara 0,92 dan 0,96 menit terkait dengan Hb S
13
 Diagnosa laboratorium HEMOG LOBIN D-PUNJAB

Gambar 5 – Visualisasi gel agarosa dari fragmen yang dihasilkan oleh teknik PCR-RFLP untuk skrining mutasi β121 Glu→Gln
(GAA→CAA). Alel normal menghasilkan dua fragmen dan alel mutan mempertahankan fragmen 564 bp, ditunjukkan oleh panah. N: tidak
ada mutasi; HET: heterozigot untuk Hb D-Los Angeles; mm: penanda molekuler 100 bp. Enzim restriksi: EcoRI (G↓AATTC)

14
 HEMOGLOB IN D-PUNJ AB

High performance liquid chromatography (HPLC)

• fraksinasi hemoglobin dengan sensitivitas dan spesifisitas tinggi.

• Ametode terpadu berdasarkan pertukaran ion untuk memisahkan dan mengidentifikasi persentase
relatif hemoglobin spesifik secara keseluruhan sampel darah.

• HPLC fase terbalik (RP-HPLC) dari rantai globin manusia telah dilaporkan sebagai alat penting untuk
mendeteksi hemoglobinopati

• Namun, aplikasi klinisnya untuk hemoglobin masih terbatas karena waktu analisis yang lama,
preparasi sampel yang kompleks, dan masalah resolusi

• Selalu disarankan untuk mendiagnosis Hb D-Punjab, melakukan analisis molekuler untuk konfirmasi
15
genotipe dengan PCR-RFLP sebagai alternatif
 HEMOGLOB IN D-PUNJ AB

High performance liquid chromatography (HPLC)

• Dengan menggunakan metodologi ini selama 10 tahun terakhir, 70 kasus hemoglobin tipe D dari
Brasil tenggara didiagnosis di Laboratorium Penyakit Genetik Hemoglobin dan Hematologi dari
Universidade

• Estadual Paulista (UNESP) sebuah pusat rujukan untuk diagnosis hemoglobin. Dari jumlah tersebut,
66 (94,3%) memiliki profil yang kompatibel dengan Hb D-Punjab, delapan (12,1%) adalah senyawa
heterozigot Hb S/D-Punjab dan 58 (87,9%) heterozigot Hb A/D-Punjab, yang semuanya dikonfirmasi
oleh tes molekuler

• Empat kasus lainnya menunjukkan profil elektroforesis dan kromatografi yang kompatibel dengan
sifat "Hb A/D-non-Los Angeles", kemungkinan Hb A/D-Iran (data tidak dipublikasikan).
16
 H EM OG L O BIN D -P U N JA B

Kesimpulan
Hb D-Punjab adalah hemoglobin yang relatif
umum di seluruh dunia

varian hemoglobin ketiga yang paling umum

di Brasil

Perhatian yang lebih besar diberikan ketika

hubungan Hb D-Punjab dengan hemoglobin
abnormal lain atau thalasemia menyebabkan
gejala klinis
17
 H EM OG L O BIN D -P U N JA B

18